《Scientific Reports》：Resistance profile of the Plasmodium falciparum dihydropteroate synthase gene in three hospitals in the city of Ndjamena, Chad
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这项研究针对抗疟药物耐药性监测的重要问题，研究人员在查德恩贾梅纳市三家医疗机构开展了一项关于恶性疟原虫二氢蝶酸合酶（Pfdhps）基因遗传耐药特征的分析。研究通过分子生物学方法检测到Pfdhps耐药基因及其关键突变（A437G和A581G），证实了该地区存在对磺胺多辛-乙胺嘧啶（Fansidar）的潜在耐药性，强调了加强抗疟药耐药性监测的必要性。
疟疾是一种由疟原虫引起的、可能致命的发热性溶血性寄生虫病。在众多疟原虫种类中，恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）是导致最严重临床症状和死亡的主要病原体。磺胺多辛-乙胺嘧啶（Fansidar）作为抗疟联合疗法的重要组成部分，曾被广泛用于疟疾的预防和治疗。然而，其疗效正面临着日益严峻的挑战——恶性疟原虫通过其关键靶点二氢蝶酸合酶（dihydropteroate synthase, Pfdhps）基因发生突变，从而产生耐药性。位于查德（Chad）首都恩贾梅纳（N’Djamena）地区的疟疾流行情况不容乐观，但关于当地恶性疟原虫对磺胺多辛-乙胺嘧啶的耐药性分子特征，特别是Pfdhps基因的突变流行情况，此前缺乏系统的监测数据。这种信息的缺失，使得当地的疟疾防治策略可能面临“盲区”，无法根据实际的耐药性演变来优化治疗方案。因此，迫切需要对这一关键公共卫生问题进行精准的“基因诊断”，以评估耐药风险，并为制定有效的抗疟策略提供科学依据。为了回答这一问题，一项题为“Resistance profile of the Plasmodium falciparum dihydropteroate synthase gene in three hospitals in the city of Ndjamena, Chad”的研究在《Scientific Reports》期刊上发表。研究人员在恩贾梅纳市的三家医疗机构开展了一项横断面分析研究，旨在确定恶性疟原虫Pfdhps基因的遗传耐药性特征，特别是两个关键突变位点A437G和A581G的流行情况。这项研究不仅填补了该地区耐药性监测数据的空白，其发现也为全球抗击疟疾耐药性的斗争提供了来自萨赫勒地区的重要证据。
研究人员主要运用了几项关键技术方法来开展这项研究。首先，他们从三家医疗机构的220名同意参与的患者中收集样本，并使用快速诊断试剂（RDT）和厚血涂片法来诊断恶性疟原虫感染并计算寄生虫密度。对于检测为阳性的样本，研究人员将其点样在Whatman滤纸上进行保存。接着，他们采用Chelex-100法从这些滤纸血斑中提取恶性疟原虫的DNA。为了检测目标基因，研究团队使用半巢式聚合酶链反应（semi-nested PCR）对Pfdhps基因进行扩增。最后，为了精准鉴定该基因上两个关键的耐药相关突变——A437G（即第437位氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸）和A581G（即第581位氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸），他们采用了限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）分析方法对PCR产物进行分型。所有收集到的流行病学和分子数据均使用SPSS统计软件（版本26）进行分析。
研究结果
恶性疟原虫感染总体流行率
在所有220名参与研究的患者中，通过RDT和厚血涂片确诊的恶性疟原虫总体感染率为39.54%。分析不同年龄组的感染情况发现，0-5岁年龄组的感染流行率最高。
Pfdhps耐药基因的检出情况
在确诊的阳性病例中，Pfdhps耐药基因的总体检出率为37.93%。进一步按年龄组分析显示，该耐药基因在5-35岁年龄组中的检出频率最高，达到45.61%。
A437G和A581G突变特征分析
对这两个特异性耐药突变位点的分析揭示了不同的流行模式。A437G突变在全部样本中的检出率为9.09%，而A581G突变的检出率显著更高，达到54.54%。就人群分布而言，A437G突变在5-35岁的个体中更为常见（占该突变阳性者的42.10%）。相比之下，A581G突变则在男性患者（占该突变阳性者的30%）以及自述曾使用过Fansidar（磺胺多辛-乙胺嘧啶）的个体（占该突变阳性者的30%）中更为流行。
研究结论与讨论
本研究通过分子流行病学调查，首次系统性地证实了在查德恩贾梅纳市的三家医疗机构中，存在携带Pfdhps耐药基因及其关键突变（A437G和A581G）的恶性疟原虫虫株。这一发现具有重要的公共卫生意义。特别是A581G突变的高频率（54.54%）尤为令人警惕，因为该突变与对磺胺多辛-乙胺嘧啶的高水平耐药密切相关。研究还提示，特定人群（如5-35岁年龄组、男性及有Fansidar用药史者）可能具有更高的耐药突变携带风险，这为未来进行针对性监测和干预提供了线索。这些结果清晰地表明，恩贾梅纳地区的恶性疟原虫种群已经对基于磺胺多辛-乙胺嘧啶的疗法产生了显著的分子水平耐药性。如果这种耐药性进一步发展并扩散，将严重威胁到以该药物为基础的联合疗法（如磺胺多辛-乙胺嘧啶+阿莫地喹）在当地的有效性，进而可能导致疟疾发病率和死亡率的上升。因此，本研究强烈呼吁，必须立即加强在查德乃至整个萨赫勒地区对抗疟药物耐药性的持续监测。这些实时、精准的分子监测数据，是评估现行治疗方案有效性、预警耐药风险、以及及时调整国家疟疾防治政策不可或缺的科学依据。只有建立并依靠这样的监测体系，才能在这场人类与疟原虫之间漫长的“军备竞赛”中保持主动，最终实现有效控制和消除疟疾的目标。
