《Journal of Bioscience and Bioengineering》：Methylxanthine derivative, pentoxifylline attenuates inflammation via NF-κB and AP-1 pathway inhibition in murine macrophages
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抗炎活性研究显示，pentoxifylline在20 μM浓度下无细胞毒性，显著抑制LPS诱导的巨噬细胞NO生成及炎症介质基因（Nos2、Tnfα、Il1β）表达，并通过降低NF-κB和AP-1转录活性及核转位抑制炎症。细胞迁移实验进一步证实其抗炎作用。该化合物有望作为安全有效的抗炎治疗候选物。
E.H.T. Thulshan Jayathilaka | Moon-Moo Kim
韩国釜山东义大学化妆品工程系与应用化学及食品工程研究生院，邮编47340
当前抗炎疗法的长期使用在慢性炎症管理方面存在显著局限性，需要更安全的替代方案。在本研究中，我们探讨了甲基黄嘌呤衍生物戊四氧菲林的抗炎作用。采用MTT实验检测了戊四氧菲林的细胞毒性。通过Griess实验、qRT-PCR、Western blot、基因报告实验和细胞迁移实验来评估戊四氧菲林的抗炎效果。MTT实验结果显示，在RAW 264.7细胞中，剂量高达20 μM时戊四氧菲林仍具有较高的安全性，且无细胞毒性。实验表明，戊四氧菲林的抗炎作用具有浓度和时间依赖性：在10 μM和20 μM浓度下，其能够显著降低一氧化氮（NO）的产生（p < 0.05）。基因表达分析显示，炎症介质基因Nos2、Tnfα和Il1β的表达显著下调（p < 0.05）。蛋白质分析进一步证实了这些效应，表现为iNOS、TNFα、IL1β和IL6的水平降低（p < 0.05）。此外，戊四氧菲林还能显著抑制NF-κB和AP-1的转录活性（p < 0.05），并显著减少NF-κB向细胞核的转移，从而证实了其转录抑制作用。在划痕实验中，戊四氧菲林显著降低了巨噬细胞的迁移能力（p < 0.05），这支持了其在抑制炎症进展中的重要作用。戊四氧菲林这些多靶点的抗炎作用使其成为治疗炎症性疾病的有希望的候选药物。
实验材料
化学试剂
Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）、胎牛血清（FBS）、青霉素（10,000 U/mL）、链霉素（10,000 μg/mL）、两性霉素B（2,500 μg/mL）及其他细胞培养试剂均购自Gibco BRL（美国马萨诸塞州沃尔瑟姆）。RAW 264.7巨噬细胞购自美国弗吉尼亚州马纳萨斯的American Type Culture Collection（ATCC）。戊四氧菲林购自Sigma–Aldrich（美国密苏里州圣路易斯），并溶解于蒸馏水中配制成2 mM的储备液。
戊四氧菲林对RAW 264.7巨噬细胞存活率的影响
在RAW 264.7细胞中，分别于24小时、48小时和72小时时，使用0–80 μM浓度的戊四氧菲林进行处理，并进行MTT实验以检测其细胞毒性。结果显示，剂量高达20 μM时戊四氧菲林未表现出明显的细胞毒性，细胞存活率无统计学显著下降（p > 0.05，图1）。基于这些结果，认为0–20 μM范围内的戊四氧菲林浓度适用于后续的抗炎效果评估。
戊四氧菲林对RAW 264.7巨噬细胞一氧化氮产生的影响
讨论
尽管现有的抗炎疗法对许多炎症性疾病有效，但长期使用仍存在一些局限性，如不良反应、药物耐药性和治疗效果不完全（15）。因此，迫切需要发现新型化合物，以实现更高效、更具针对性的抗炎效果，并确保较高的安全性（16）。本研究表明，戊四氧菲林具有潜在的抗炎作用。
CRediT作者贡献声明
E.H.T. Thulshan Jayathilaka： 负责撰写初稿、数据可视化、方法验证、数据分析、概念构建。
Moon-Moo Kim： 负责审稿与编辑、结果验证、项目监督、资源协调、实验设计、资金争取及概念构思。
致谢
我们衷心感谢Si Eon Lee和Gyeong Hee Kim在实验过程中的技术支持。作者声明不存在利益冲突。
