人畜共患流感防控：荷兰医学实验室高效检测动物甲型流感病毒——外部质量评估，2023年

《Journal of Clinical Virology》：Zoonotic Influenza Preparedness: Dutch Medical Labs Efficiently Detect Animal Influenza A Viruses - External Quality Assessment, 2023

荷兰50家临床诊断实验室通过外部质量评估检测高致病性禽流感A(H5N1)clade 2.3.4.4b及猪/禽流感病毒，91%能成功检测，但亚型分型准确率仅3.6%（猪H1N1v），凸显常规实验室分型能力不足，需转介国家流感中心。

　　

萨曼莎·祖默（Samantha Zoomer）|加布里埃尔·戈德斯基（Gabriel Goderski）|莎伦·范登布林克（Sharon van den Brink）|兰斯·D·普雷斯尔（Lance D. Presser）|赞德拉·C·费利克斯·加尔萨（Zandra C. Felix Garza）|昂安·武昂（Oanh Vuong）|埃尔哈德·范德弗里斯（Erhard van der Vries）|马农·霍本（Manon Houben）|罗恩·A.M. 福谢尔（Ron A.M. Fouchier）|迪尔克·埃金克（Dirk Eggink）|亚当·梅耶（Adam Meijer）

荷兰国家公共卫生与环境研究所传染病控制中心，安东尼·范·列文虎克大道9号（Antonie van Leeuwenhoeklaan 9），3721 MA，比尔托芬（Bilthoven）

摘要

背景

自2022年以来，高致病性H5N1甲型流感病毒2.3.4.4b亚型在野生鸟类和家禽中引发了全球性疫情，同时哺乳动物和人类的感染病例也有所增加。这引发了人们对人畜共患传播和大流行风险的担忧，凸显了人类临床诊断实验室（hCDL）准确检测和鉴定动物甲型流感病毒的必要性。

方法

为了评估常规诊断能力，我们向荷兰、阿鲁巴（Aruba）、博内尔（Bonaire）和库拉索（Cura?ao）的50个人类临床诊断实验室分发了一个包含灭活甲型流感病毒的外部质量评估（EQA）试剂盒，这些病毒分别来源于鸟类（三种H5亚型、一种H7亚型）、猪（两种H1亚型、一种H3亚型）和人类（一种H1pdm09亚型、一种H3亚型）。各实验室进行了常规的分子流感病毒检测，并在条件允许的情况下进行了亚型鉴定。

结果

共收到118份检测报告。其中109份（91%）在所有阳性样本中成功检测到了甲型流感病毒。在50个实验室中的49个（98%）中，至少有一种检测方法能够可靠地将所有动物流感病毒鉴定为A型流感病毒。大多数假阴性结果发生在猪H1N1v病毒检测中。只有20个实验室对部分样本进行了亚型鉴定（共报告了109个亚型特异性结果）：对于人类病毒，37/39个结果正确；对于鸟类病毒，13/14个结果正确（其中H5亚型全部正确）；对于猪病毒，只有2/56个结果正确（均为使用广谱反应性H3检测试剂检测的猪H3N2病毒）。

结论

荷兰的人类临床诊断实验室在检测动物甲型流感病毒方面表现优异。然而，其亚型鉴定能力有限，因此需要对疑似人畜共患流感病例的样本进行送检至国家流感中心进行进一步鉴定。

引言

自1996年出现以来，高致病性禽流感（HPAI）A(H5)病毒一直在全球范围内传播。21世纪初，新的H5血凝素亚型基因谱系首次在东南亚和埃及被发现。到2014年，2.3.4.4b亚型开始在欧洲传播，导致野生水鸟和家禽中爆发疫情。自2021年以来，HPAI A(H5N1) 2.3.4.4b亚型已感染超过1亿只野生鸟类和家禽[1]，以及越来越多的哺乳动物，包括野生陆地和海洋食肉动物以及绵羊[2]、[3]、[4]。2024年，该亚型的一个特定基因型开始在美国牛群中传播，截至2025年11月已影响超过1000个牛群[5]。这表明2.3.4.4b亚型正在持续进行大范围传播，并且宿主范围不断扩大。

随着HPAI A(H5N1)活动的增加，人类暴露风险也随之上升。自1996年以来，世界卫生组织共报告了1088例人类H5流感病例，其中约80例由2.3.4.4b亚型引起[4]、[6]、[7]，主要通过直接接触感染动物传播[1]、[8]、[9]、[10]。临床表现从无症状到严重肺炎甚至死亡不等[1]。

这种病毒可能导致严重的人类疾病，加上在牲畜中的广泛传播，进一步加剧了人们对人畜共患传播和大流行风险的担忧[11]。因此，包括荷兰在内的许多国家都建立了针对高风险动物接触者的监测系统。然而，对于没有明确接触史的患者，人畜共患感染可能会被漏诊。荷兰最近发现的三例猪流感病毒感染病例就证明了这一点[12]。因此，人类临床诊断实验室（hCDL）至少应能够将动物甲型流感病毒（IAV）鉴定为A型流感病毒。进一步的亚型鉴定可以通过核酸扩增检测（NAATs）或测序来完成，但这些技术通常不在hCDL具备，需要依赖国家流感中心（NICs）进行，尤其是在有动物接触史或特定旅行史的情况下。尽管大多数商用NAATs已经过动物流感病毒检测的验证，但这些验证可能无法反映病毒的最新演变情况，因此需要定期进行外部质量评估（EQA）以使用当前流行的病毒株。

部分内容摘要

目标

此次外部质量评估（EQA）于2023年进行，主要目的是调查荷兰的人类临床诊断实验室是否能够利用其常规分子诊断方法检测当前流行的禽流感病毒。由于担心猪流感病毒可能传播给人类以及季节性人类、猪和禽流感病毒之间的混合感染[13]，因此也包含了潜在的人畜共患猪流感病毒。次要目标是探讨……

样本制备和试剂盒组成

我们创建了一个包含10个模拟临床样本的定性EQA试剂盒，这些样本中含有灭活的甲型流感病毒（IAV）（表1）。使用分子即时检测（mPOCT）的实验室可以选择检测有限的样本组合（样本1-5），以降低成本。选择的人类和动物病毒涵盖了近期导致某些商用检测试剂检测效果不佳的人类A(H1N1)pdm09和A(H3N2)病毒[15]、[16]，以及禽类[1]和猪[12]流感病毒

甲型流感病毒检测

共收到120份检测报告；其中2份仅报告了亚型鉴定结果，未提供总体检测结果，因此在分析中予以排除。在118份检测报告中，97份（82%）使用了商用扩增试剂盒，21份（18%）使用了实验室自开发的检测方法（LDT）（图1）。

50个实验室中有49个（98%）至少有一种方法能够正确检测到全部或部分样本中的甲型流感病毒（表1，图1，补充图S1）。82份检测报告……

讨论

本次评估考察了荷兰人类临床诊断实验室检测动物流感病毒的能力。总体而言，检测效果良好：50个实验室中有49个（98%）至少有一种方法能够在所有相关样本中检测到甲型流感病毒。值得注意的是，20个实验室（40%）能够鉴定出某些样本中的H亚型，但主要是针对人类流感病毒。检测结果与最近针对H5N1亚型2.3.4.4b的EQA结果一致[17]。然而，本研究的独特之处在于其重点关注人类临床诊断实验室（hCDL）的检测能力

资金信息

本研究得到了荷兰卫生、福利和体育部的支持。

伦理声明

本次调查无需伦理批准。

作者贡献声明

马农·霍本（Manon Houben）：撰写、审稿与编辑、资源协调、资金筹集。埃尔哈德·范德弗里斯（Erhard van der Vries）：撰写、审稿与编辑、资源协调、资金筹集。昂安·武昂（Oanh Vuong）：撰写、审稿与编辑、资源协调。莎伦·范登布林克（Sharon van den Brink）：验证、方法学设计、概念构建。加布里埃尔·戈德斯基（Gabriel Goderski）：验证、方法学设计、概念构建。赞德拉·C·费利克斯·加尔萨（Zandra C. Felix Garza）：撰写、审稿与编辑、初稿撰写、数据可视化、数据分析。兰斯·D·普雷斯尔（Lance D. Presser）：撰写、审稿与编辑

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本研究结果的已知财务利益或个人关系。

致谢

我们感谢所有参与实验室的技术人员和医学分子微生物学家的合作与帮助：阿姆斯特丹UMC AMC分院的Fatma Sara?-Pektas（医学微生物学与感染预防部门）；Rijnstate Velp医院的Jacky Flipse（医学微生物学与免疫学实验室）；IJsselland医院的Arenda Crielaard；Radboud UMC医院的Willem Melchers（医学部门）