探索传统壮医药“盈补浦”的肾脏保护作用：来自血清代谢组学、网络药理学和实验验证的见解

《Journal of Equine Veterinary Science》：Exploring the Kidney-Protective Potential of Traditional Zhuang Medicine ' Yingbupu': Insights from Serum Metabolomics, Network Pharmacology, and Experimental Validation.

YBP通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制Cyclin D1和Axin-2基因表达，改善阿霉素肾病模型大鼠肾损伤及尿蛋白水平。

　　

Jieying Su|Mei Yang|Yang Zhou|Taijun Liu|Dan Zhu|Xiangpei Zhao

壮药与瑶药研究实验室，广西中医药大学附属国际壮医医院，中国南宁市良庆区五乡新区秋月路8号，530201

摘要

民族植物学意义

蛋白尿是肾脏疾病进展的关键指标和治疗难点。壮药Yingbupu（YBP）在民间应用中显示出显著的降蛋白尿效果，但其确切的肾保护作用和分子机制尚不清楚。

研究目的

研究YBP的肾保护作用及其作用机制。

方法与结果

采用UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术分析YBP的吸收成分，并结合网络药理学、分子对接和阿霉素肾损伤大鼠模型实验（观察一般指标、尿蛋白、肾组织超微结构、免疫组化、Western blot和PCR）来评估YBP的肾保护作用和作用机制。共鉴定出24种YBP的吸收成分，并筛选出136个关键靶点。富集分析表明Wnt/β-连环蛋白信号通路可能起核心作用。动物实验证实YBP能显著改善肾损伤，降低尿蛋白水平，抑制β-连环蛋白向核内的转移，并显著下调Cyclin D1和Axin-2等靶基因的表达。

结论

YBP的肾保护作用归因于其有效逆转Wnt/β-连环蛋白通路异常激活的能力。

引言

慢性肾病（CKD）是全球主要的公共卫生问题。根据2021年的数据，全球有超过8.5亿人患有CKD。蛋白尿是肾损伤的关键标志，约2%的普通人群会出现蛋白尿，而在老年人和糖尿病患者中这一比例更高[1]。蛋白尿是重要的临床标志物，是肾功能恶化的独立风险因素，也强烈预示心血管事件和任何原因导致的死亡[2]。尽管现代医学在肾损伤管理方面取得了一些进展，常用的药物如血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）、糖皮质激素或免疫抑制剂在控制蛋白尿方面有一定效果，但这些治疗手段常伴随高钾血症、干咳、感染风险和骨髓问题等不良反应，限制了其长期应用[3, 4, 5]。因此，寻找高效安全的替代疗法具有重要的临床和现实意义。当前的研究方向主要集中在两个主要途径：一是从传统医药系统中挖掘具有多靶点调控潜力的天然药物[6]；二是利用现代生物技术开发新型治疗分子[7]。基于壮药Yingbupu在治疗肾病方面的传统经验，本研究聚焦于第一个途径，旨在系统探索其肾保护作用的分子机制。Yingbupu是一种常用的民间药材，来源于Aralia armata（Wall.）Seem.或Aralia decaisneana Hance的干燥根。其药用历史悠久，在《广西民族医药汇编》和《壮族民间医药精选》等地方民族药典中有记载。值得注意的是，YBP在广西少数民族地区具有悠久的药用和食用历史，其根部常与鸡肉、排骨等食材炖煮，用于滋补、强身和产后恢复等治疗目的。此外，YBP的嫩茎可直接作为蔬菜食用，具有独特的风味，是一种本地野生食材。更重要的是，YBP在壮族民间医学中长期以来被用于治疗蛋白尿、水肿、慢性肾炎等肾脏相关疾病，以及瘀伤、风湿病等与血管损伤和局部血液循环障碍密切相关的疾病[8]。在之前的研究中，我们团队系统建立了YBP的药材质量标准体系，并明确了其主要活性成分齐墩果酸和Aralia皂苷A的含量范围[9]。基于其在民间治疗血管损伤相关疾病方面的传统经验，我们研究了YBP对血管的保护作用，发现其可通过调节Wnt/β-连环蛋白信号通路有效抑制血管平滑肌细胞的异常增殖和迁移，从而减少血管损伤后的内膜增生[10, 11, 12]。然而，关于YBP治疗肾脏相关疾病的研究尚未系统报道。

基于此，本研究基于“血清药理学-网络药理学预测-实验验证”的思路，系统研究了YBP的肾保护作用机制。通过超高效液相色谱-高分辨率质谱（UPLC-Q-Orbitrap HRMS）鉴定吸收成分，利用网络药理学筛选关键靶点和通路，并通过分子对接和动物实验进行功能验证。研究重点关注YBP对Wnt/β-连环蛋白通路的调节作用，旨在揭示其保护肾小球滤过屏障的潜在机制，为该民族药物的现代化、开发和临床转化提供理论和实验基础。

药物制备

YBP采集自广西隆胜县三门镇通利村，经鉴定为Aralia armata（Wall.）Seem.的干燥根皮。凭证标本（编号ZY-20171123）已保存在广西中医药大学附属国际壮医医院的中药标本馆，可供核查。取1000克YBP，分别加入12倍和9倍量的水进行两次提取。

YBP血清吸收成分的鉴定分析

通过保留时间对齐、峰提取和背景扣除等步骤，利用高分辨率液相质谱收集的数据筛选出峰面积大于1×10⁷的特征离子（数据初步整理由Compound Discoverer 3.1（Thermo Fisher）完成[27]）。根据精确的分子量、碎片离子和裂解模式，将样本与数据库（mzCloud、mzVault、ChemSpider）进行比对以确定成分。

讨论

本研究首次整合了血清药理学、网络药理学和实验验证方法，系统揭示了壮药YBP在治疗阿霉素诱导的肾损伤中的物质基础和分子机制。研究不仅明确了其吸收成分，更重要的是发现了YBP通过多种靶点调节Wnt/β-连环蛋白信号通路的新机制。

结论

基于“血清药理学-网络药理学预测-实验验证”的研究方法，本研究成功揭示了壮药YBP通过多种成分和多个靶点调节Wnt/β-连环蛋白通路从而发挥肾保护作用的分子机制。研究确定了其在体内的直接作用成分群，证实了该药物对足细胞损伤的保护作用，并进行了系统分析。

作者贡献声明

Xiangpei Zhao：撰写、审阅与编辑。Dan Zhu：验证与监督。Yang Zhou：方法学研究。Taijun Liu：实验研究。Jieying Su：初稿撰写。Mei Yang：数据管理

数据共享声明

本研究使用的数据包含在文章中。

伦理声明

本动物实验已获得广西中医药大学实验动物福利伦理审查委员会的批准（批准编号：DW20191008-32）

利益冲突声明

作者声明没有已知的可能影响本研究的财务利益或个人关系。

资助

本研究得到了国家自然科学基金（82405011）、广西自然科学基金（2024GXNSFAA010130）、广西科技计划项目（Guike AD2506909）、广西中医药大学（2021年博士研究启动基金（2021BS042）以及广西国际壮医医院高水平人才队伍建设三年行动计划项目（GZCX20231204）的支持。

利益冲突声明

作者声明没有可能影响本文研究的已知财务利益或个人关系。