Saikosaponin D 通过调节 lncRNA5682 来影响 NF-κB 通路，从而缓解慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征

《Journal of Equine Veterinary Science》：Saikosaponin D alleviates chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome by regulating the NF-κB pathway via lncRNA5682

慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）是一种以持续盆腔疼痛和慢性炎症为特征的疾病，易引发抑郁并显著降低患者生活质量。本研究通过建立EAP小鼠模型，评估中药成分Saikosaponin D（SSD）的抗炎、镇痛及免疫调节作用，并首次揭示SSD通过抑制lncRNA5682/NF-κB通路减轻炎症、调节巨噬细胞极化，从而改善CP/CPPS症状的分子机制。

　　

王行祖|臧振杰|周宇航|刘志豪|张慧|张克勤|王振清|傅强

山东省第一医科大学附属山东省医院泌尿科，济南，250021，中华人民共和国

摘要

民族药理学相关性

慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）是一种常见的泌尿系统疾病，其特征是持续的盆腔疼痛和慢性炎症，这可能引发抑郁症状，并显著影响患者的生活质量和健康。目前的临床治疗效果并不令人满意。柴胡皂苷D是一种三萜皂苷，主要从柴胡（Bupleurum chinense）及其相关物种的根中提取。柴胡是一种传统的药用植物，在东亚民族医学中得到广泛应用。据报道，柴胡皂苷D具有抗炎、免疫调节和抗纤维化作用。然而，其在CP/CPPS中的治疗潜力仍不明确。

研究目的

本研究旨在评估柴胡皂苷D在实验性自身免疫性前列腺炎（EAP）小鼠模型中的治疗效果，并探讨其作用机制。

材料与方法

雄性C57BL/6小鼠被用弗氏完全佐剂乳化的鼠前列腺提取物免疫以诱导EAP，随后分别接受高剂量和低剂量的柴胡皂苷D治疗。通过冯弗雷丝（von Frey）纤维测试评估盆腔疼痛阈值，通过强迫游泳测试评估抑郁样行为，通过苏木精-伊红染色评估组织病理变化。采用多组学分析方法，包括RNA测序、RT-qPCR、Western blotting、ELISA、免疫荧光和流式细胞术，来分析转录组变化、细胞因子水平和免疫细胞表型。

结果

柴胡皂苷D治疗显著提高了疼痛阈值，缓解了抑郁样行为，并减少了前列腺炎症和组织损伤。转录组分析显示，NF-κB信号通路是柴胡皂苷D调控的主要通路。机制上，柴胡皂苷D抑制了异常上调的lncRNA5682的表达，从而抑制NF-κB的激活，减少了促炎单核细胞/巨噬细胞的数量，并促进了M2型巨噬细胞的极化。

结论

柴胡皂苷D通过抑制lncRNA5682/NF-κB通路，对CP/CPPS具有显著的抗炎、镇痛和免疫调节作用，显示出作为治疗慢性前列腺炎的有希望的候选药物。

引言

慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）是一种常见的泌尿系统疼痛疾病，其特征是盆腔/生殖器疼痛，常伴有尿频/尿急症状，甚至可能导致抑郁，严重影响患者的生活质量（Clemens等人，2019；Wagenlehner等人，2013）。与其他难治性疾病一样，CP/CPPS的病因复杂且不确定，这使得现有的治疗方法难以取得满意的效果（Franco等人，2019）。尽管CP/CPPS的具体病理生理机制尚不清楚，但越来越多的证据表明，间质细胞释放的炎症介质在其发展中起着关键作用（Song等人，2024）。一些研究甚至提出，CP/CPPS可能主要涉及前列腺间质（Dellabella等人，2009）。先前的研究还表明，免疫失调可能是CP/CPPS发病和进展的关键因素（Stephens Shields等人，2025）。前列腺间质细胞的炎症反应可以招募单核细胞/巨噬细胞，导致这些细胞在前列腺组织中扩散，并增加血清中的IFN-γ和IL-17水平（Liu等人，2021；Motrich等人，2020）。因此，研究与CP/CPPS免疫相关的治疗策略并探索其内在机制具有很大潜力。

柴胡（Bupleurum chinense DC.）在中医中被称为柴胡，是一种广为人知的药用草本植物，在东亚民族医学中用于治疗炎症性疾病和疼痛相关疾病。历史上，柴胡根被用于治疗发热、疼痛、情绪紊乱以及涉及内脏功能障碍的疾病，尤其是与肝脏系统相关的疾病。根据传统医学理论，柴胡具有“舒缓肝气”、缓解淤滞和调和炎症失衡的作用，这些都与伴有疼痛和心理症状的慢性炎症性疾病密切相关（Teng等人，2023）。在民族医学实践中，含有柴胡根的制剂常用于治疗泌尿生殖系统不适、盆腔疼痛和炎症相关综合征，表明其对类似慢性前列腺炎的情况具有潜在作用。柴胡皂苷D（SSD）是一种主要从柴胡根中提取的三萜皂苷化合物（Li等人，2018）。它是该植物中主要的生物活性皂苷之一，其结构特征为橄榄烷型苷元与糖基团结合（Yang等人，2025）。作为主要的药理活性成分，柴胡皂苷D具有多种生物效应，包括抗炎、免疫调节、保肝、神经保护和抗抑郁作用（Chen等人，2024；Gu等人，2025）。先前的研究表明，柴胡皂苷D可通过抑制NF-κB和NLRP3炎性体通路来抑制促炎细胞因子的释放，从而减轻氧化应激和免疫介导的组织损伤（Zheng等人，2025）。它还通过调节巨噬细胞极化和树突状细胞成熟来调控先天性和适应性免疫反应（Wang等人，2021）。此外，在神经行为和情绪障碍模型中，柴胡皂苷D通过调节mTOR和Homer1–mGluR5信号通路以及促进NLRP3的K48连接泛素化来缓解抑郁样行为，从而抑制神经炎症（Li等人，2022）。其多靶点的免疫调节特性使其成为治疗炎症相关疾病、免疫功能障碍和情绪障碍的潜在候选药物。

近年来，长链非编码RNA（lncRNAs）因其能够通过多种调控机制调节基因表达和信号通路而受到广泛关注（Nojima和Proudfoot，2022）。长链非编码RNA可以通过多种机制调节基因表达，包括转录或翻译水平上的调控、染色质重塑、蛋白质信号通路、作为分子支架以及作为microRNA的海绵（Yi等人，2024）。研究表明，长链非编码RNA在CP/CPPS的发病和进展中起着重要作用。例如，lncRNA LINC02518通过与B细胞连接分子的相互作用影响CP/CPPS细胞的增殖和炎症因子的分泌（Yu等人，2025）。长链非编码RNA GAS5通过负调控环氧化酶-2（COX-2）的表达来抑制细胞增殖，从而缓解慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）的进展（Xu等人，2019）。这些发现，结合柴胡皂苷D的抗炎和免疫调节作用，促使我们进一步研究其对慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）的潜在治疗效果及其作用机制和分子通路。

在本研究中，我们建立了一个公认的CP/CPPS模型，即EAP模型，该模型再现了人类CP/CPPS的主要免疫特征和临床表现。在此基础上，我们探讨了柴胡皂苷D干预后EAP小鼠的炎症和疼痛是否得到显著缓解。接下来，我们通过高通量全转录组测序分析了前列腺组织中差异表达的lncRNAs。根据差异表达lncRNAs的表达水平、倍数变化和显著性，选择了差异显著表达的lncRNA 5682。迄今为止，其在慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）中的潜在作用尚未被研究。随后，我们探讨了lncRNA 5682表达与前列腺间质细胞炎症反应之间的相关性，并评估了AAV-lncRNA 5682注射对小鼠前列腺组织炎症反应和免疫微环境的影响。最后，我们进一步探讨了柴胡皂苷D通过lncRNA 5682发挥作用的下游分子机制，以及小鼠血液和前列腺组织免疫微环境的变化。

实验部分

动物实验

本研究共使用了72只6-8周龄、体重22-25克的雄性C57BL/6小鼠，这些小鼠购自济南兴康生物有限公司（中国济南）。所有动物实验均获得了山东省医院动物护理和使用委员会的批准（批准编号2024–002）。小鼠在无菌动物设施中饲养，可自由获取食物和水。所有小鼠均喂食含有60%营养成分的标准实验室饲料。

柴胡皂苷D改善了EAP模型小鼠的CP/CPPS症状

EAP小鼠表现出前列腺特异性的细胞和体液免疫反应，伴有与人类CP/CPPS患者相似的典型组织炎症浸润。此外，这些啮齿动物模型表现出与慢性盆腔疼痛一致的行为和生理特征。鉴于EAP模型与人类CP/CPPS在症状、病理和免疫特征上的高度一致性，EAP小鼠是一个理想的模型。

讨论

在本研究中，我们使用EAP小鼠模型研究了柴胡皂苷D的治疗效果，重点探讨了长链非编码RNA和炎症通路相关的分子机制。我们首次证明，柴胡皂苷D可以降低盆腔触觉敏感性，缓解前列腺炎症，调节巨噬细胞并抑制抑郁行为。其主要机制是通过抑制新的lncRNA ENSMUST00000155682（lnc5682）来发挥作用。

结论

我们发现并提供了证据，证明lncRNA 5682通过调节NF-κB通路来激活免疫反应，从而在CP/CPSS的进展中发挥作用。此外，柴胡皂苷D通过抑制lnc5682来抑制NF-κB通路的激活，减少炎症反应，调节巨噬细胞表型和全身免疫。我们的工作展示了柴胡皂苷D在CP/CPSS治疗中的临床意义。

作者贡献声明

王振清：撰写 – 审稿与编辑、监督、项目管理、资金获取。傅强：撰写 – 原稿撰写、方法学设计、资金获取、概念构思。张慧：数据可视化、正式分析。张克勤：软件操作、正式分析。周宇航：实验研究、数据管理。刘志豪：实验研究、数据管理。臧振杰：撰写 – 原稿撰写、验证、实验研究。王行祖：撰写 – 审稿与编辑、原稿撰写，

利益冲突声明

所有作者声明没有利益冲突。

伦理批准

所有实验均获得了山东省医院动物护理和使用委员会的批准（批准编号2024–002）。所有实验均按照山东省医院动物护理和使用委员会的指南和规定进行。

数据可用性

本研究生成和/或分析的数据可应相应作者的要求提供。

资金声明

本研究得到了山东省泰山学者计划（tstp20230658）、山东省自然科学基金（项目编号ZR2023QH325）和中华人民共和国国家自然科学基金（资助编号82501950）的支持。

利益冲突声明

? 所有作者声明没有可能影响本文工作的已知财务利益或个人关系。

致谢

我们感谢山东大学的王雅宁在图表制作方面的指导和帮助。