《Preventive Veterinary Medicine》：“Synthetic gp90 Peptide ELISA for Equine Infectious Anemia Virus: Improved Sensitivity and Risk Factor Insights”
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马传染性贫血病毒（EIAV）血清学检测中，基于合成肽gp90抗原的间接ELISA方法敏感性达85.3%，特异性97.9%，较传统AGID检测多识别29.4%阳性样本，显著提升早期感染和亚临床感染检出率，为精准防控提供新工具。
Gabriel Eduardo Acevedo-Jiménez|Carlos Morales-González|Mohammad Mehdi Akbarin|Cecilia Rodríguez-Murillo|Víctor David González-Fernández|Lucero de María Avila-De la Vega|María Martha García-Flores|Ana Silvia González-Méndez|Gabriela Castillo-Hernández|Marcela Autran Martínez|Hugo Ramirez Alvarez
墨西哥国立自治大学Cuautitlán高等研究院兽医系病毒学、遗传学与分子生物学实验室，校区4，Cuautitlán Izacalli 54714，墨西哥
摘要
马传染性贫血病毒（EIAV）是一种全球范围内重要的马匹病原体，其防控依赖于有效的血清学监测。世界动物卫生组织（WOAH）推荐的琼脂凝胶免疫扩散（AGID）方法在敏感性方面存在局限性。本研究开发并验证了一种基于EIAV gp90表面糖蛋白保守区域的合成肽的间接ELISA检测方法。该检测方法使用了来自墨西哥山谷大都会区773份马血清样本，并与AGID方法进行了比较。结果表明，gp90-EIAV ELISA的敏感性为85.3%，特异性为97.9%，比AGID方法多检测出29.4%的血清阳性样本（p = 0.044）。两种方法之间的统计一致性较高（κ = 0.73）。风险因素分析和聚类分析发现，4岁以下的马属于高风险群体，且病例主要分布在夏季降雨的温带气候区域。基于合成gp90肽的ELISA方法是一种更有效的筛查工具，能够提高亚临床感染的检测能力。其应用有望通过早期发现和高风险人群的针对性监测显著改善EIAV的防控工作。
引言
马传染性贫血（EIA）是由属于Ortervirales目、Retroviridae科、Orthoretrovirinae亚科的Lentivirus equinfane病毒引起的（Coffin等人，2021年）。EIAV可感染马、驴和骡子（Carvelli等人，2024年）。病毒可通过重复使用的注射器、受污染的牙科设备以及输血等方式传播。吸血昆虫（如Tabanidae科的Tabanus、Hybomitra和Chrysops属）和Stomoxys属的厩蝇也可能作为机械性传播媒介（Issel和Foil，2015年；Resende等人，2022年）。EIAV的主要靶细胞是单核细胞/巨噬细胞和内皮细胞（Ma等人，2014年；Oaks等人，1999年）。在感染急性期，病毒会在富含巨噬细胞的组织（如脾脏、骨髓、肝脏、肾脏和淋巴结）中持续复制（Oaks等人，1998年）。临床症状表现为反复发作的病毒血症，伴有急性发热、贫血、血小板减少、腹部水肿和慢性消瘦（Cook等人，2013年；Sellon，1993年）。大多数EIAV感染的马会经历一个典型的疾病过程，分为急性期、慢性期和无症状期，其中无症状期可作为病毒储存库，使得该疾病特别难以控制（Liu等人，2016年）。即使感染高毒力菌株，许多马在出现临床症状后也能有效抑制疾病发展（Oaks等人，1998年）。EIAV感染对经济也有显著影响，包括移动限制、强制扑杀以及流行区和暴发地区的贸易限制（Machado等人，2021年；Sellon，1993年）。EIAV病毒颗粒的基因组由两条正链单链RNA组成，长度约为8.2 kb，编码gag（结构蛋白）、pol（酶）和env（包膜糖蛋白）基因，两侧有长末端重复序列（LTRs）。病毒基因组还包含三个辅助基因：tat、rev和S2（Coffin等人，2021年；Cook等人，2013年）。gag和pol基因具有较高的保守性，而env和rev基因则变化较大（Baccam等人，2003年；Malossi等人，2020年；Naves等人，2019年）。由gag基因编码的核心蛋白p26具有高度保守性，是大多数商业EIAV血清学检测方法的抗原（Malossi等人，2020年）。目前，EIAV的监测主要依赖于世界动物卫生组织（WOAH）推荐的Coggins琼脂凝胶免疫扩散（AGID）方法，用于确诊病例的确诊和流行病学监测（Ricotti等人，2016年；世界动物卫生组织，2019年）。尽管AGID方法具有高特异性，但在早期或亚临床感染阶段敏感性较低，可能导致病毒未被及时发现。相比之下，ELISA作为初步筛查工具具有更高的诊断敏感性，后续可通过AGID和Western blot方法进行确认（Ostuni等人，2023年）。基于ELISA的方法具有更高的敏感性和通量，但通常依赖p26或gp45抗原，这些抗原可能无法完全反映所有抗体反应。EIAV表面糖蛋白gp90是一种关键的免疫优势抗原，尽管存在变异，但仍包含适合血清学诊断的保守表位（Cook等人，2013年；Du等人，2018年；Issel等人，2013年；Rosati等人，2004年）。本研究旨在开发并验证一种基于gp90保守区域的合成肽的间接ELISA方法，将其性能与AGID方法进行比较，并结合流行病学风险因素分析以识别高风险马群，以便进行针对性监测。研究设计与样本
本研究在墨西哥中部的773匹马中进行，这些马来自墨西哥州、墨西哥城、伊达尔戈州、莫雷洛斯州、特拉斯卡拉州和克雷塔罗州，这些地区共同构成了墨西哥山谷大都会区（ZMVM）。采样时，所有马均无EIAV感染的临床症状。样本由墨西哥国立自治大学Cuautitlán高等研究院的兽医医院提供。
EIAV抗体检测
gp90-EIAV ELISA在773个样本中检测出44个阳性样本（5.7%），而AGID（Coggins）方法检测出34个阳性样本（4.4%）。753个样本中，两种方法的结果一致（724个阴性，29个阳性）。有20个样本的结果不一致：15个样本仅通过gp90-EIAV ELISA检测出阳性，5个样本仅通过AGID检测出阳性。因此，gp90-EIAV ELISA比AGID方法多检测出29.4%的血清阳性样本（95%置信区间：0.35-2.24%）。讨论
本研究证明，使用来自EIAV gp90保守区域的合成肽进行间接ELISA检测马血清中的抗体是可行的。该方法的诊断敏感性优于AGID（Coggins）方法，这与先前研究结果一致，表明ELISA在检测早期感染或病毒血症较低的病例方面具有优势（Alvarez等人，2015年；Dorey-Robinson等人，2019年）。合成肽具有标准化等优点。
结论
本研究证明，基于合成gp90肽的间接ELISA是一种可靠、敏感且特异的检测马传染性贫血病毒的方法，相比AGID（Coggins）方法能够检测出更多血清阳性样本（包括亚临床感染）。该方法具有较高的诊断敏感性（敏感性85.3%，特异性97.9%），同时操作简便。
资助
本研究由FESC - UNAM的研究项目C12478资助。作者贡献声明
María Martha García-Flores：撰写、审稿与编辑。Ana Silvia González-Méndez：撰写、审稿与编辑。Gabriela Castillo-Hernández：撰写、审稿与编辑。Marcela Autran Martínez：撰写、审稿与编辑。Ramírez álvarez Hugo：监督、资源协调、项目管理、资金获取、概念设计。Gabriel Eduardo Acevedo-Jiménez：撰写、审稿与编辑、初稿撰写、概念设计。Carlos Morales-González：方法学设计。Mohammad Mehdi Akbarin：利益冲突声明
作者声明不存在可能影响文章结果的利益冲突。致谢
我们感谢兽医Felipe De Jesús Cortés Delgadillo提供样本用于评估，以及FES-Cuautitlan, UNAM的兽医医院的支持。Mohammad Mehdi Akbarin获得了UNAM DGAPA-UNAM博士后奖学金的资助。
