《Small Ruminant Research》：Time
kill curve analysis and pharmacodynamic modeling for
in vitro evaluation of cloxacillin activity against
Corynebacterium pseudotuberculosis
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本研究旨在确定头孢西林对弯曲杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis）的tentative epidemiological cutoff（TECOFF），分析其时间-杀菌曲线，并建立药代动力学/药效学（PK/PD）模型。结果显示，35株菌的MIC范围为4-16 μg/mL，TECOFF为16 μg/mL（99.9%置信区间）。PK/PD指标%T>MIC（相关系数0.85）和AUC/MIC（0.82）能有效描述药效关系，分别为杀菌和清除目标达45%和63%。这些发现为制定合理治疗方案提供了依据，但需进一步体内验证。
安娜·米莱娜·塞萨尔·利马（Ana Milena César Lima）|拉里萨·亚历山德拉·费利克斯（Larissa Alexsandra Felix）|希拉·雷兹勒·沃西亚茨基（Sheila Rezler Wosiacki）|弗朗西斯科·塞尔莫·费尔南德斯·阿尔维斯（Francisco Selmo Fernandes Alves）|维维安·德索萨（Viviane de Souza）|尼尔利尔·普拉西多·德索萨（Nirlir Plácido de Sousa）|玛丽亚·莱蒂西亚·卡内罗·罗德里格斯（Maria Leticia Carneiro Rodrigues）|温贝托·德梅洛·布兰当（Humberto de Mello Brand?o）|马科斯·费兰特（Marcos Ferrante）|帕特里夏·吉田·法乔利-马丁斯（Patrícia Yoshida Faccioli-Martins）
巴西农业研究公司（Embrapa）山羊与绵羊研究部门，巴西塞阿拉州索布拉尔（Sobral, Ceará, Brazil）
摘要
目前针对Corynebacterium pseudotuberculosis的治疗方法无法实现细菌学上的完全治愈，并且生物安全性较低，因此需要新的治疗策略。本研究旨在确定氯唑西林对Corynebacterium pseudotuberculosis的初步流行病学临界值（TECOFF），通过时间-杀菌曲线评估细菌反应，并识别描述抗菌剂-病原体相互作用的药代动力学/药效学（PK/PD）指标和靶点。在经阳离子调整的Miller-Hinton肉汤中测定了最低抑菌浓度（MIC）和时间-杀菌曲线，TECOFF是根据MIC分布推算得出的。一个S型Emax模型确定了最能描述时间-杀菌曲线中观察到的剂量-反应曲线的PK/PD指标及其靶点（PDT）。分别为杀菌活性（E= -3 log10）和根除活性（E= -4 log10）建立了PK/PD靶点值。35个分离株的MIC范围为4至16 μg/mL，TECOFF为16 μg/mL（99.9%置信区间）。PK/PD指标%T > MIC（R2 = 0.85）和AUC/MIC（R2 = 0.82）最能描述药代动力学参数与微生物参数之间的关系，与氯唑西林对C. pseudotuberculosis的作用密切相关。PDT值分别为杀菌活性的45%和63%，以及根除活性的31.79%和45.5%（AUC48h/MIC）。这些发现为制定合理的治疗方案提供了依据，并强调了在临床条件下进行体内验证的必要性。
章节摘录
引言
干酪样淋巴结炎（CL）是小型反刍动物的主要传染病之一。其特征是慢性进展、病情加重以及表层淋巴结形成脓肿，这些脓肿可能扩散至内部器官和淋巴结（Faccioli-Martins等人，2014年）。该病在巴西东北部地区十分普遍，95.5%的山羊和69.9%的绵羊感染了此病（IBGE，2023年）。超过90%的绵羊群和80%的山羊群中存在该病（Alves等人，2020年）。
细菌、试剂和抗菌药物
从相关收集库中获取了肺炎链球菌 ATCC? 49619TM和金黄色葡萄球菌 ATCC? 29213TM。氯唑西林钠盐购自Thermo Scientific?（产品编号：J64314.03）。经阳离子调整的MHB肉汤购自Millipore?（参考编号90922-500），β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（β-NAD）购自Sigma-Aldrich?（参考编号N7004，纯度≥98%）。马血来自健康动物，并使用玻璃珠进行无菌去纤维化处理。
血液采集过程
MIC分布及初步流行病学临界值的确定
氯唑西林对35株C. pseudotuberculosis分离株的MIC范围为4至16 μg/mL（MH-F肉汤）。拟合的MIC分布[Log2平均值（2.43）±标准差（0.35）]计算得出TECOFF为16 μg/mL（见图2）。
时间-杀菌曲线
图3展示了氯唑西林对
C. pseudotuberculosis的
体外时间-杀菌曲线。杀菌曲线显示其活性具有时间依赖性。氯唑西林抑制了6株
C. pseudotuberculosis菌株的生长（MIC = 8 μg/mL）。
讨论
目前用于治疗山羊群中CL脓肿的传统方法是手术引流和用10%碘酊进行化学烧灼。然而，这种方法存在诸多缺点：操作繁琐、不分青红皂白地烧灼感染组织和健康组织，并且只有在至少10天的10%碘治疗之后才能有效清除伤口中的细菌（Pinheiro等人，2023年）。Nozaki等人（2000年）评估了封闭性干酪样淋巴结炎脓肿的手术切除方法。
结论
本研究首次确定了氯唑西林对Corynebacterium pseudotuberculosis的初步流行病学临界值（TECOFF），并分析了时间-杀菌曲线。基于杀菌曲线的PK/PD建模有助于识别%T > MIC和AUC/MIC作为最能代表氯唑西林与C. pseudotuberculosis之间关系的药代动力学/药效学指标。确定的药效学靶点为合理制定治疗方案提供了重要依据。
伦理声明
作者确认他们遵守期刊的伦理政策，具体内容详见期刊的作者指南。本材料未同时提交给其他期刊发表或被其他期刊接受，并已获得共同作者的批准。与血液采集相关的程序得到了Embrapa山羊与绵羊动物使用伦理委员会根据协议001/2021的授权。
作者贡献声明
帕特里夏·吉田·法乔利-马丁斯（Patrícia Yoshida Faccioli-Martins）：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、监督、研究设计、资金获取、数据管理、概念构思。马科斯·费兰特（Marcos Ferrante）：撰写 – 审稿与编辑、监督、数据分析、数据管理、概念构思。安娜·米莱娜·塞萨尔·利马（Ana Milena César Lima）：撰写 – 审稿与编辑、研究设计、资金获取、数据管理。尼尔利尔·普拉西多·德索萨（Nirlir Plácido de Sousa）：研究、数据管理。温贝托·德梅洛·布兰当（Humberto de Mello Brand?o）：监督、方法学设计、资金提供。致谢
作者感谢Embrapa（20.20.03.002.00.00）、Fapemig（APQ-01168-21）和CNPq（448011/2014-0）提供的财政支持，感谢Funcap（BP5-0197-00148.01.00/22和PCDTR 04854900/2022）为第一作者和最后一位作者提供的奖学金和财政支持，以及CAPES为第二位作者提供的奖学金。
