在伯氏疟原虫（Plasmodium berghei）中鉴定与丝氨酸/精氨酸富集的剪接因子1（serine/arginine-rich splicing factor 1）相互作用的蛋白质

《Malaria Journal》：Identification of serine/arginine-rich splicing factor 1-interacting proteins in Plasmodium berghei

疟原虫SR1蛋白相互作用及定位研究。通过构建表达GFP-PbSR1的转基因Pb ANKA疟原虫并采用IP-MS技术，发现PbSR1与核蛋白（如RNA结合蛋白、小核核糖核蛋白）及细胞质蛋白（RhopH1/Clag3、RhopH2、RhopH3）相互作用。共定位分析表明PbSR1与RhopH2在裂殖子和小型血晶体阶段胞质共定位。

　　

摘要

背景

富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子1（SR1）是酵母中假想RNA结合蛋白（HRB1）的同源物，对恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）和伯氏疟原虫（P. berghei）的无性繁殖至关重要。然而，其在疟原虫中的相互作用蛋白仍不清楚。

方法

为了鉴定疟原虫中与SR1相互作用的蛋白，研究人员生成了表达绿色荧光蛋白与PbSR1融合蛋白（PBANKA_1232100）的转基因Pb ANKA细胞，并使用这些转基因细胞进行了免疫沉淀结合质谱分析（IP-MS）。为了研究PbSR1和RhopH2表达的发育阶段，还生成了同时表达PbSR1::GFP和RhopH2::mCherry融合蛋白的转基因细胞，并进行了Western blot分析和活细胞荧光成像。

结果

在疟原虫的细胞核中，PbSR1::GFP的荧光信号比在细胞质中更强。对转基因细胞的IP-MS分析表明，PbSR1与核蛋白（包括RNA结合蛋白和小核核糖核蛋白）以及细胞质蛋白（如RhopH1、RhopH2和RhopH3）发生相互作用。活细胞荧光成像显示，在滋养体和非成熟裂殖子中观察到PbSR1和RhopH2在细胞质中的共定位，而在成熟裂殖子和裂殖子中未观察到这种共定位。根据这些结果，滋养体、非成熟裂殖子和配子细胞是细胞质中的PbSR1与RhopH2相互作用的候选阶段。

结论

PbSR1与核蛋白和ropty蛋白发生相互作用。