《Cancer Immunology, Immunotherapy》：Dasatinib boosts γδ T cell expansion and memory phenotypes with enhanced antitumor immunity
编辑推荐：
本研究通过高通量药物筛选，发现临床常用的酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼（Dasatinib）可显著促进γδ2 T细胞（Vγ9Vδ2 T细胞）的体外扩增，并上调记忆相关标志物（如CD62L、CD127），减少细胞凋亡，提高TNF-α和IFN-γ的分泌。转录组学分析揭示了与T细胞生存和自我更新相关基因（如MYC、TCF7、MIR155HG）的上调。在功能上，经达沙替尼处理的γδ2 T细胞在体外对胶质母细胞瘤（GBM）和三阴性乳腺癌（TNBC）细胞展现出更强的细胞毒性，并且在延长培养后仍能维持活性。在多种原位肿瘤模型中，这些细胞表现出更好的肿瘤控制能力、减少的转移以及更长的荷瘤小鼠生存期。这项研究表明，达沙替尼为优化基于γδ T细胞的过继性细胞疗法，特别是针对实体瘤的治疗，提供了一种实用且易于转化的新策略。
研究背景：γδ T细胞是癌症免疫治疗的新星
γδ T细胞是癌症免疫治疗中极具前景的候选者，与传统的αβ T细胞相比具有独特优势。它们不依赖于主要组织相容性复合体（MHC）识别肿瘤抗原，能够抵抗常见的肿瘤免疫逃逸机制。此外，γδ T细胞还具有自然杀伤（NK）细胞样功能，能够感知并直接杀伤恶性细胞。人体外周血中主要的γδ T细胞亚群是Vγ9Vδ2 T细胞（也常称为γδ2 T细胞）。目前，利用唑来膦酸（Zol）联合白细胞介素-2（IL-2）体外扩增γδ2 T细胞是临床前和临床研究的常规方法。然而，长时间的体外培养可能导致细胞功能耗竭、记忆表型减弱和抗肿瘤功能下降，这限制了其治疗效果。因此，寻找能够增强γδ T细胞扩增并保持其功能的策略至关重要。
研究初衷：探寻增强γδ2 T细胞功能的新药物
本研究旨在深入表征γδ2 T细胞在体外扩增过程中的表型变化，并通过基于流式细胞术的高通量筛选，从一个包含892种美国食品药品监督管理局（FDA）已批准药物的化合物库中，寻找能够同时增强γδ2 T细胞扩增和维持其功能表型的药物。药物再利用策略具有利用临床已验证化合物的安全性、加速临床转化的优势。研究首先详细描绘了γδ2 T细胞在Zol/IL-2培养下的动态变化。
研究发现一：常规扩增导致γδ2 T细胞功能随时间衰减
研究人员从健康捐献者的外周血单个核细胞（PBMC）中扩增γδ2 T细胞。结果显示，供体间存在异质性：初始γδ2细胞比例高的“良好扩增者”最终扩增比例可达80-90%，而比例低的“不良扩增者”仅能达到40-60%。细胞数量在培养初期（第0-3天）有所下降，随后才快速增长，表明初始细胞群中既含有终末分化效应细胞，也含有可增殖的记忆细胞。通过多参数流式细胞术和聚类分析，研究人员在培养过程中鉴定出了9个表型不同的γδ2 T细胞亚群，并观察到随着培养时间延长（至第10天），与记忆（CD62L、CCR7、CD127）和细胞毒性（NKp44）相关的标志物表达逐渐下降。体外与胶质母细胞瘤细胞系Ln18的共培养实验也证实，培养超过7天后，γδ2 T细胞的杀伤能力逐渐减弱。这些发现表明，尽管Zol/IL-2方案能支持γδ2 T细胞扩增超过两周，但延长培养会损害其记忆表型和细胞毒性功能。
研究发现二：药物筛选锁定明星分子——达沙替尼
为了找到能改善上述问题的化合物，研究团队在培养第3天加入了FDA药物库中的各种化合物进行筛选。他们以γδ2 T细胞的绝对数量变化和记忆表型为指标，发现酪氨酸激酶抑制剂（TKI）类化合物，特别是达沙替尼（Dasatinib）和普纳替尼（Ponatinib），表现最为突出。在后续对五种靶向BCR-ABL1通路的TKI（达沙替尼、普纳替尼、博舒替尼、伊马替尼、尼罗替尼）的验证中，达沙替尼在多位供体中 consistently 表现出最强的扩增增强效果，且能显著提升“不良扩增者”的γδ2 T细胞产量。进一步的机制探索发现，达沙替尼处理并未显著改变细胞分裂速率，但显著降低了caspase-3/7的活性，表明其增强细胞产量的主要机制是减少细胞凋亡，而非促进增殖。
研究发现三：达沙替尼塑造具有“记忆”特征的γδ2 T细胞
为了解达沙替尼如何影响γδ2 T细胞，研究团队对分选出的经达沙替尼处理和对照处理的γδ2 T细胞进行了mRNA测序。差异表达基因分析显示，达沙替尼处理上调了多种细胞因子基因（如IL2、IFNG）和记忆相关标志物基因（IL7R/CD127）。其中，MIR155HG（编码miR-155前体）是上调最显著的基因。基因集富集分析表明，差异表达基因富集在T细胞受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用等免疫激活相关通路，而与细胞周期、DNA复制相关的通路则被负向富集。流式细胞术验证证实，达沙替尼处理的γδ2 T细胞表面记忆标志物CD62L和CD127的表达升高，同时产生肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（IFN-γ）的细胞比例以及多功能性细胞因子分泌细胞的比例也更高。此外，关键转录因子TCF1、MYC和T-bet的表达也显著上调。这些数据综合表明，达沙替尼能够促进γδ2 T细胞向具有更强存活能力和记忆样表型的方向发展。
研究发现四：经达沙替尼处理的γδ2 T细胞抗肿瘤战力更强
研究评估了达沙替尼培养的γδ2 T细胞（γδ2 T-Da）在体外的抗肿瘤能力。在短时间（5小时）共培养实验中，γδ2 T-Da细胞对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和两种胶质母细胞瘤细胞Ln18、GBM8901的杀伤能力在大多数供体来源的细胞中优于对照细胞。更重要的是，在长期培养（至第13天）后，γδ2 T-Da细胞仍能维持对GBM8901细胞的较强细胞毒性，而对照细胞的杀伤能力则随培养时间延长而明显下降。连续杀伤实验也表明，γδ2 T-Da细胞能更持久地发挥细胞毒性作用。这些结果说明，达沙替尼处理不仅能提升γδ2 T细胞的即时杀伤力，还能帮助其在长期培养中保持功能“续航”。
研究发现五：动物模型证实卓越的体内疗效
研究进一步在免疫缺陷小鼠中建立了原位肿瘤模型来验证γδ2 T-Da细胞的体内疗效。在三阴性乳腺癌模型中，瘤内注射γδ2 T-Da细胞虽然未使肿瘤体积显著缩小，但治疗后肿瘤内残留的人CD3+T细胞数量更多，且显著延长了肿瘤切除后的局部无复发生存期，并降低了远处转移的发生率。在更为致命的胶质母细胞瘤模型中，静脉输注γδ2 T-Da细胞能显著延长荷瘤小鼠的生存期。细胞追踪实验显示，输注后24小时，γδ2 T-Da细胞比对照细胞更能有效地分布到脾脏、肿瘤组织和淋巴结中。这些体内结果综合表明，经达沙替尼扩增的γδ2 T细胞具有更强的肿瘤控制能力和组织归巢能力。
总结与展望：为γδ T细胞疗法提供“增效”新策略
本研究系统地表征了γδ2 T细胞体外扩增的表型动力学，并通过大规模药物筛选，将临床已批准的酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼“老药新用”，鉴定为一种能有效增强γδ2 T细胞扩增、保持记忆表型并提升抗肿瘤功能的化合物。其作用机制可能与抑制细胞凋亡、上调miR-155等记忆相关分子，以及可能清除衰老细胞有关。该发现为优化基于γδ T细胞的过继性细胞免疫治疗，尤其是针对胶质母细胞瘤、三阴性乳腺癌等难治性实体瘤的治疗，提供了一种切实可行且易于向临床转化的新策略。由于达沙替尼本身已是FDA批准药物，这为将其整合到γδ T细胞产品的生产流程中，快速推进至临床研究奠定了坚实基础。
