《Parasitology Research》：Tick-borne pathogens in meat sheep from Brazil: first report of Theileria ovis in sheep in latin America
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针对巴西绵羊蜱媒血寄生虫病诊断与病原鉴定的难题，研究人员开展了针对羊群中蜱媒病原体的临床、血液学、超声及分子检测（PCR、测序）研究。结果在患病羊群中首次在拉丁美洲鉴定出绵羊泰勒虫（Theileria ovis）以及一种与暂定种波利安氏无形体（Candidatus Anaplasma boleense）密切相关的无形体感染，并经治疗后临床缓解。该研究为巴西乃至拉丁美洲的绵羊蜱媒疾病防控与监测提供了重要的首个数据支撑。
在广阔的牧场和农场中，一种不起眼却威胁巨大的“吸血鬼”——蜱，正悄无声息地传播着多种疾病，不仅危害牲畜健康，也给畜牧业经济带来沉重打击。蜱媒血寄生虫病（Tick-borne hemoparasitic diseases, TBHDs）在全球范围内影响着公共卫生和畜牧经济。特别是在巴西，由牛微小扇头蜈（Rhipicephalus microplus）等蜱传播的疾病每年造成的经济损失高达数十亿美元。对于绵羊和山羊而言，主要的TBHD病原体包括无形体（Anaplasma）、埃立克体（Ehrlichia）、巴贝虫（Babesia）和泰勒虫（Theileria），它们可能导致从无明显症状到死亡的各种临床表现。尽管在非洲、亚洲和欧洲的绵羊中，绵羊泰勒虫（Theileria ovis）的感染已有广泛报道，但在整个美洲大陆，无论是绵羊还是山羊，均未有其确诊病例的报告。同时，在巴西的绵羊群体中，关于血寄生虫的调查研究也相对匮乏。这种认知上的空白，使得当羊群出现发热、结膜炎、淋巴结肿大、贫血等非特异性症状时，准确的诊断和有效的防控面临挑战。为了填补这一知识空白，明确巴西绵羊中是否存在新型或未被报告的蜱媒病原体，并为未来的疾病监测提供依据，一项针对巴西某农场绵羊的调查研究就此展开。
这项研究由研究人员在巴西卡舒埃拉斯-迪马卡库的一个山羊和绵羊实验研究单位开展。研究团队对来自同一农场的16只成年圣伊内斯母羊进行了全面评估。为了探究羊群的健康状况及潜在的病原感染，研究人员运用了多种技术方法。首先，对所有羊只进行了系统的临床检查。其次，采集了全血样本进行血常规分析，并制作血涂片在显微镜下观察有无血寄生虫。同时，使用便携式B超设备对脾脏、肝脏等器官进行了超声扫描，以评估内脏异常。此外，研究人员还从羊体表采集了蜱样本，并通过形态学钥匙进行了种类鉴定。最关键的一步是分子诊断：从血细胞和蜱样本中提取总DNA，随后使用针对不同病原体（包括伯氏疏螺旋体Borrelia spp.、无形体Anaplasma spp.、埃立克体Ehrlichia spp.和梨形虫目Piroplasmida）的特异性引物进行聚合酶链式反应（PCR）筛查。对PCR扩增出的预期大小产物，进一步进行了桑格测序（Sanger sequencing），并将获得的基因序列与GenBank数据库中的序列进行比对和系统发育分析，以精确鉴定病原体种类。
临床、血液学、超声和寄生虫学发现
通过临床检查发现，56%的母羊表现出结膜炎、鼻腔分泌物、咳嗽、淋巴结肿大、发热和蜱感染等症状。血液学分析显示，69%的母羊出现异常，包括中性粒细胞增多、轻度正细胞正色素性贫血、血小板增多、反应性淋巴细胞和/或淋巴细胞内包涵体。超声检查证实了三只母羊存在脾脏和肝脏异常（体积增大和回声增强），这三只羊后续的PCR检测也呈阳性。粪便检查显示虫卵数较低。总共44%的母羊被发现感染了蜱，鉴定为丹氏革蜱、牛微小扇头蜈和雕斑钝眼蜱。
分子发现
所有蜱样本的分子检测均为阴性。在16只用PCR筛查蜱媒病原体的绵羊中，37%对梨形虫目检测呈阳性。在这些感染梨形虫的动物中，33%显示出与无形体共感染。所有样本对埃立克体或伯氏疏螺旋体检测均为阴性。分子分析和序列比对显示，病原体为绵羊泰勒虫以及与暂定种波利安氏无形体密切相关的无形体。针对绵羊泰勒虫18S rRNA基因的序列与土耳其绵羊中分离的T. ovis分离株具有100%的一致性。针对无形体16S rRNA基因的序列则与从中国蚊子中鉴定出的暂定种波利安氏无形体分离株C13具有100%的一致性。而23S rRNA基因片段序列与阿尔及利亚牛中鉴定的嗜吞噬细胞无形体菌株相似性为97.88%。系统发育分析将本研究的绵羊泰勒虫序列与来自土耳其、埃及、中国、伊朗、伊拉克和阿尔及利亚的绵羊泰勒虫分离株聚集在一个独立的进化支中。对于无形体，基于16S rRNA基因的序列与暂定种波利安氏无形体聚类在一起。
治疗结果
所有母羊接受了三剂土霉素治疗。治疗十四天后，新的血涂片未发现细胞包涵体，且所有重新采集的全血样本PCR检测均为阴性。约三个月后，所有动物体重增加并恢复至维持状况，观察期间无动物死亡。
在结论与讨论部分，研究者指出，本研究首次在拉丁美洲的绵羊中报告了绵羊泰勒虫感染，并记录了与暂定种波利安氏无形体密切相关的无形体的检测。这一发现填补了美洲大陆该病原体感染报告的空白。尽管研究中在羊体表发现了丹氏革蜱、牛微小扇头蜈和雕斑斑眼蜱，但这些蜱并非绵羊泰勒虫的已知主要传播媒介（如璃眼蜱属），因此本次羊群中的具体感染途径尚不明确，可能需要考虑机械传播、同居感染或其他未知媒介的可能性。而检测到的无形体与暂定种波利安氏无形体的密切关联，连同在羊体表发现的牛微小扇头蜈，提示这种蜱可能在巴西乃至南美小型反刍动物中传播此类病原体方面扮演潜在角色。本研究还展示了PCR技术相较于传统血涂片镜检在检测梨形虫感染方面具有更高的敏感性。此外，绵羊泰勒虫和无形体的共感染在本次研究中较为常见，并与发烧、白细胞增多等临床症状相关，这与在其他地区的研究观察一致。在治疗方面，使用土霉素后患病羊群出现了临床症状的缓解和病原检测转阴，表明该治疗方案有效，但研究者也提醒需注意抗菌素耐药性的潜在问题。总之，这项研究强调了对巴西的蜱传病原体开展进一步研究和持续监测的必要性。这些工作对于确定潜在的疾病热点区域、收集关键的流行病学数据以及未来制定有效的防控措施至关重要。该研究成果已发表在《Parasitology Research》期刊上。
