利用根癌农杆菌（Agrobacterium Rhizogenes）介导的稳定转化技术，结合GFP和GUS报告基因，对绿豆（Mungbean）中一种优先在根部表达的应激响应基因VrWRKY32的启动子进行了分离与功能特性分析

《Journal of Plant Growth Regulation》：Isolation and Functional Characterization of a Root-preferential Stress Responsive VrWRKY32 Gene Promoter in Mungbean using Agrobacterium Rhizogenes-mediated Stable Transformation with GFP and GUS Reporters

抗旱育种中，通过分离mungbean根特异性启动子VrWRKY32并利用农杆菌发根系统验证其活性，发现该启动子能有效驱动GFP和GUS报告基因在根组织中的特异性表达，为培育抗旱作物提供新工具。

　　

摘要

水分不足仍然是限制绿豆生长和产量提高的主要因素。基因工程的进步促进了耐旱绿豆品种的开发，通常是通过引入受强组成型启动子（如CaMV35S）调控的应激响应基因来实现的。然而，来自病毒或细菌的组成型启动子会对植物的生长和发育产生负面影响，并引发生物安全问题。相比之下，植物特异性启动子能够实现可控的基因表达，避免系统性副作用，并且由于与宿主转录机制的更高兼容性，在作物中表现更好。根特异性启动子为根部靶向基因表达提供了有力工具，有助于改善植物的养分吸收和水分吸收，从而提高其抗旱和耐盐能力。在本研究中，我们从绿豆根组织中分离出一个优先在根部表达的启动子，该启动子能够调控转录因子VrWRKY32。通过Agrobacterium rhizogenes介导的转化技术在绿豆根组织中对这一启动子进行了克隆和功能鉴定。为了评估其活性，我们将VrWRKY32启动子与GFP（eGFP）和GUS（uidA）报告基因融合，并将其引入绿豆品种K-851中。通过PCR和Southern杂交技术确认了转基因毛状根中这些转基因的成功整合。半定量RT-PCR进一步验证了由VrWRKY32启动子驱动的GUS和GFP在转基因毛状根中的表达情况。此外，组织化学染色也显示了转基因毛状根中该启动子的强烈活性。综合这些结果表明，VrWRKY32启动子在绿豆根组织中具有很强的活性，具有驱动目标基因（尤其是与抗旱和耐旱相关的基因）在根部优先表达的潜力。