一种基于单叠氮化丙啶的qPCR检测方法的建立与验证，该方法通过矩阵匹配校准，可实现对多菌株益生菌粉中存活的罗伊氏乳杆菌的选择性定量分析

《Journal of Microbiological Methods》：Development and validation of a propidium monoazide-qPCR assay with matrix-matched calibration for selective quantification of viable Limosilactobacillus reuteri in multi-strain probiotic powders

　　

Jinho Lee|Jin Seok Moon

韩国京畿道平泽市17957，Ildong Bioscience公司

摘要

在商业产品中准确统计存活的益生菌细胞数量对于质量控制、标签合规以及产品开发而言至关重要。传统的平板计数法耗时且主要能检测可培养的细胞，而定量PCR技术则操作快速、具有菌株特异性，还能检测活细胞和死细胞的DNA。我们针对用于多菌株产品的工业益生菌菌株——Limosilactobacillus reuteri IDCC 3701（RE）的独特基因组区域，开发并验证了一种具有菌株特异性的单氮丙啶（PMA）-qPCR检测方法。该检测方法在纯培养物和混合培养物中进行了测试，同时也应用于单菌株和四菌株的冻干益生菌粉中，为减少基质差异，我们使用了直接从RE冻干粉中生成的校准曲线。PMAxx染料处理能有效抑制死细胞DNA的扩增（抑制率为99.985%），同时对活细胞DNA的扩增影响极小。该检测方法能够对浓度为10⁴–10⁹?CFU/mL的培养物中的RE存活细胞进行菌株特异性定量，而对于基于粉末的样本，则在≥10⁵?CFU/mL的验证过的线性范围内可进行定量分析。这一方法为含RE的益生菌的质量控制提供了实用的工具，同时也为将经过粉末校准的PMA-qPCR技术应用于其他工业菌株奠定了基础。