针刺划线法：一种简单且准确的方法，用于快速从水稻叶片中分离出稻黄单胞菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）

《Australasian Plant Pathology》：Needle-stabbing-streaking: a simple and accurate technique for rapid isolation of Xanthomonas oryzae pv. oryzae from rice leaves

水稻细菌叶枯病原菌Xoo的针头划刺分离法研究：比较七种培养基及两种传统方法，发现该法能快速高效分离Xoo（最多36个菌落/皿），4天内无污染，且在储存样本（最长15天）和不同水稻品种田间样本中均适用，通过colony PCR验证。

　　

摘要

Xanthomonas oryzae pv. oryzae（简称Xoo）是一种破坏性病原体，会导致水稻细菌性叶枯病（BLB）。除了Xoo之外，受BLB感染的叶片上还栖息着许多其他细菌种类，这些细菌在培养基上形成的菌落形态相似，这使得分离Xoo变得十分困难。在本研究中，我们测试了一种简单且经过改良的划线技术——即针刺划线法，以快速准确地分离Xoo。我们使用了七种不同的培养基：生长因子琼脂（GFA）、营养肉汤酵母提取物琼脂（NBYEA）、蛋白胨蔗糖琼脂（PSA）、酵母葡萄糖白垩琼脂（YDCA）、改良的Xanthomonas oryzae专用培养基（mXOS）、改良的Wakimoto培养基（MWM）以及营养琼脂（NA）。我们采用先前报道的Xoo特异性引物，标准化并实施了菌落聚合酶链反应（colony PCR）检测方法来进行分类鉴定。同时，我们还对比了另外两种传统技术：渗出划线法和直接叶片划线法。在所有测试的方法中，针刺划线法在所有培养基上都能获得最多的Xoo菌落数量；其中，PSA（n = 36）、NBYEA（n = 35）和NA（n = 30）培养基上的菌落数量最多，并且在接种后4天内所有培养基的污染程度均较低或为零。我们还测试了这些方法从储存样本中分离Xoo的有效性，结果发现针刺划线法即使在采样后15天内仍能检测出阳性Xoo菌落，表明该方法具有更广泛的应用潜力。此外，该方法还通过实地采集的三种商业水稻品种的BLB感染叶片样本得到了验证。因此，针刺划线法简单、快速、高效，并且不受水稻品种和培养基类型的影响，能够准确分离Xoo。