益生菌粪肠球菌（M74）作为替代抗生素用于控制肉鸡坏死性肠炎的方法

《Scientific Reports》：Probiotic Enterococcus faecium (M74) as an alternative to antibiotics for controlling necrotic enteritis in broiler chickens

　　摘要：由产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎仍然是肉鸡生产中的一个主要挑战，尤其是在抗生素使用受到限制的情况下。本研究评估了粪肠球菌（M74）作为益生菌替代抗生素在实验性感染产气荚膜梭菌的肉鸡中的预防和治疗效果。将鸡分为阴性对照组、阳性对照组、预防组和治疗组，并评估了生长性能、细菌计数、血液学和生化指标、免疫反应、肠道形态学以及组织病理学。添加粪肠球菌（M74）显著降低了肠道细菌负荷，与感染对照组相比，产气荚膜梭菌和总大肠菌群的数量分别减少了约88%和84%。最终体重和体重增重提高了约30-31%，而饲料转化率提高了约25%。绒毛高度增加了约43%，同时组织病理学损伤评分显著降低（退化评分降低了高达82%）。处理组的肾脏和肝脏功能指标显著改善，免疫参数也显著增强。预防方案始终显示出比治疗应用更优的效果。尽管该研究仅限于一种益生菌菌株和实验条件，但这些发现表明粪肠球菌（M74）是一种有前景的益生菌候选者，可用于缓解肉鸡的坏死性肠炎，并可能成为抗生素的可行替代品或补充策略。

引言：肠道疾病对家禽业构成了重大挑战，因为它们与经济损失、生长性能下降、死亡率增加以及动物福利受损有关，此外还可能污染供人类消费的家禽产品。在这些疾病中，坏死性肠炎（NE）被认为是全球肉鸡生产中最具经济重要性的肠道疾病之一。该疾病主要由产气荚膜梭菌引起，这是一种革兰氏阳性、产孢子的厌氧细菌，可产生多种毒素，包括禽类特异性的坏死性肠炎β毒素（NetB），这种毒素在肠道组织损伤和疾病发病机制中起关键作用。几十年来，抗生素在家禽生产中被广泛使用，以改善生长性能、提高饲料效率并控制肠道细菌感染。现场观察表明，即使是低剂量的抗生素（如林可霉素）也能显著降低NE的发生率。然而，长期和广泛使用抗生素导致了耐抗生素细菌的出现和传播，引起了科学家、监管机构和消费者的严重担忧。抗菌素耐药性（AMR）现在被公认为一个重大的全球公共卫生威胁，对动物生产中抗生素使用的限制不断增加，从而加剧了对有效和可持续替代品的搜索。在这种背景下，益生菌作为一种有前景的非抗生素策略，受到了广泛关注，用于维持肠道健康和提高家禽的疾病抵抗力。根据联合国粮食及农业组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）的定义，益生菌是“当以适当剂量给予时，能够为宿主带来健康益处的活微生物”。一种有效的益生菌菌株应能够在胃酸和胆盐中存活，定植于胃肠道，对病原体产生抗菌或竞争排斥作用，并在加工、储存和现场应用过程中保持活性，同时在经济上也要可行，适用于大规模使用。

尽管益生菌具有潜在的好处，但其使用仍需谨慎考虑安全性。某些肠球菌菌株已知携带毒力因子和抗生素抗性基因，存在水平基因转移到其他肠道微生物群成员的理论风险。这种基因转移可能导致肠道生态系统内不良特征的传播，从而引发合理的安全担忧。因此，选择用于益生菌的肠球菌菌株应基于严格的安全评估，并应在体内条件下确认其有效性和安全性。粪肠球菌（M74）是一种乳酸菌，是胃肠道的天然居民，已被提出作为动物生产中有前景的益生菌候选者。先前的研究表明，饮食中添加粪肠球菌（M74）可以减少产气荚膜梭菌的粪便排泄，并增加双歧杆菌和乳杆菌等有益细菌的数量。这些发现表明该菌株在改善肠道微生物平衡和增强对肠道感染的抵抗力方面具有潜在作用。然而，大多数现有研究仅关注一般性能参数或体外抗菌活性，缺乏关于其在实验性感染条件下对抗NE的保护效果的体内证据。更重要的是，目前缺乏直接比较粪肠球菌（M74）预防性和治疗性应用对肉鸡由产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎的效果的研究，同时评估生长性能、免疫反应、肠道形态学、组织病理学改变和细菌负荷。这代表了当前文献中的一个明显空白，特别是在寻找安全有效的NE控制抗生素替代品方面。因此，本研究旨在评估粪肠球菌（M74）在实验性感染产气荚膜梭菌的肉鸡中的预防和治疗效果，并对其对生长性能、血液学和生化参数、免疫反应、肠道形态学、组织病理学及细菌重新分离的影响进行综合评估。

材料与方法：
本研究遵循ARRIVE指南（动物研究：体内实验报告）进行。所有涉及动物的实验程序均符合机构和国际标准的动物护理和使用规定。实验方案由埃及德尔塔科技大学药学院机构动物护理和使用委员会（IACUC）审查并批准（批准编号：FPDU36/2026）。所有实验工作均在埃及扎加齐格大学兽医学院的实验动物设施中进行，基于机构合作协议。动物处理、麻醉和安乐死程序均符合两机构的伦理标准。尽一切努力减少动物痛苦，降低压力，并使用最小数量的动物以达到统计有效性。

材料：
- 粪肠球菌M74：该产品根据理事会指令70/524/EEC暂时被授权作为饲料添加剂，用于犊牛和仔猪，有效期至2004年1月6日（首次授权：委员会法规（EC）编号2690/1999）。动物营养科学委员会（SCAN）对“Lactiferm”在这些动物类别中的安全性发表了积极意见。Medipharm AB（瑞典）为其微生物产品E. faecium M74申请了作为育肥鸡饲料添加剂的授权，属于同一类别。
- 粪肠球菌M74（NCIMB 11181）是一种属于“微生物”产品类别的微生物益生菌，专门用于育肥鸡。该产品由Medipharm AB（瑞典）开发并提交授权。在本研究中，通过饮用水给予脱水的E. faecium M74，剂量相当于1.5 × 10? CFU/kg，遵循先前的建议。

接种：
第19天，所有感染组通过口服接种1 mL的A型产气荚膜梭菌野外菌株（1.9 × 10? 个/毫升），该菌株来自埃及吉萨Dokki的动物健康研究所厌氧菌部门。参考菌株（A型产气荚膜梭菌，ATCC? 13124?）在肉汤中培养，并在37°C下使用GasPak系统在厌氧条件下培养24-48小时。然后将细菌细胞重新悬浮在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。

益生菌剂量的合理性：
选定的剂量（1 g/L饮用水；相当于1.5 × 10? CFU/kg）基于制造商的建议，并得到了先前同行评审研究的支持，这些研究表明该剂量可实现最佳的肠道定植、病原体抑制和免疫刺激作用，且无不良影响。据报道，这一浓度足以提供足够的活细菌数量以承受饮用水中的稀释，同时确保有效传递到胃肠道。

确认饮用水中的益生菌活性：
在添加粪肠球菌M74（1 g/L）的新鲜制备的饮用水中，每天进行微生物分析。制备后立即（0小时）以及稀释后6小时和12小时，从饮水器中无菌采集1毫升水样进行微生物分析。样品在无菌磷酸盐缓冲盐水中连续稀释10倍，并分别接种在de Man、Rogosa和Sharpe（MRS）琼脂板上。平板在37°C下有氧培养24小时，之后计数菌落并表示为CFU/mL。在整个监测期间，活菌计数始终保持在10? CFU/mL以上，表明益生菌在实验条件下保持了足够的活性。每12小时更换一次饮用水，并彻底冲洗和风干饮水器，以防止生物膜形成和细菌意外繁殖。

实验对象：
共获得120只一天大的商业Hubbard肉鸡雏鸡（38-42克），来自Al-Kahira Poultry Company（埃及Ramadan City第10区）。雏鸡在标准卫生和环境条件下饲养，自由提供饲料和水。所有鸡在第7天和第18天使用Hitchner B1和LaSota活病毒疫苗（Intervet Boxmeer，荷兰；每剂10? EID??，每1000剂溶解在30毫升生理盐水中，作为眼药水）接种新城疫疫苗。第15天使用Holland Gumboro疫苗（Rhone-Mérieux，法国；每1000只鸡溶解在50毫升盐水中）接种甘博罗病疫苗。实验在埃及扎加齐格大学兽医学院的实验动物设施中进行，温度条件为25 ± 2°C。所有管理措施均遵循，以确保鸡不受压力。该研究获得了埃及扎加齐格大学机构动物护理和伦理委员会的批准。

实验设计：
实验包括四个组（每组30只鸡）：
1. 阴性对照组：仅喂食基础饲料的未感染鸡。
2. 阳性对照组：喂食基础饲料并在第19天口服感染2 mL的产气荚膜梭菌肉汤培养物（1.9 × 10? 个/毫升）的鸡。
3. 预防性粪肠球菌M74组：从第1天到实验结束，鸡通过饮用水接受脱水的粪肠球菌M74（1 g/L，1.5 × 10? CFU/kg），并在第19天感染产气荚膜梭菌。
4. 治疗性粪肠球菌M74组：鸡在第19天感染产气荚膜梭菌，随后在出现临床症状后连续五天通过饮用水接受粪肠球菌M74（1 g/L，1.5 × 10? CFU/kg）治疗。

采样：
在采样和尸检之前，使用氯胺酮-赛拉嗪组合对肉鸡进行麻醉。氯胺酮的剂量为35 mg/kg体重，赛拉嗪的剂量为5 mg/kg体重，通过肌肉注射到大腿肌肉中。该方案确保了处理和组织收集过程中的充分镇痛和反射反应丧失。麻醉时鸡的年龄为35天，平均体重为1.8-2.2公斤。实验结束时，根据AVMA和机构动物福利指南进行人道安乐死。通过颈椎脱位进行安乐死，以确保死亡前完全失去意识。这种方法被认为是家禽研究中的批准和人道程序。

血液样本：
在感染后第2天、第9天和第16天（预防组）以及治疗后第2天、第9天和第16天（治疗组）从每组五只鸡中采集血液样本。每个样本分为两部分：一部分收集在二钾EDTA（1 mg/mL血液）中用于血液学分析；另一部分收集在普通离心管中用于生化 and 免疫学检测。

组织样本：
在牺牲后收集小肠片段用于组织病理学检查。

方法：
**血液学分析**：
使用Auto Hematology Analyzer（Rayto 7200，MEDINICS R）测定总红细胞和白细胞计数及血红蛋白浓度（Hb）。

**生化分析（肝功能）**：
使用半自动临床化学分析仪（Chem 7，Erba R）根据标准测定血清中的AST、ALT、ALP、总蛋白、白蛋白和球蛋白水平。

**肾脏功能测试**：
使用同一分析仪根据标准测定血清中的尿素、肌酐、尿酸和钾浓度。

**免疫参数**：
使用ELISA试剂盒（ChroMate 4300，Microplate Reader，Biotek India）根据制造商说明定量血清免疫球蛋白（IgM、IgA）、细胞因子（IL-2、IL-4、TNF-α）和T细胞标记物（CD4、CD8）。记录450 nm处的吸光度（A???），并根据校准曲线计算抗体浓度。

**生长性能**：
每周监测生长参数，包括体重（BW）、体重增重（BWG）、饲料摄入量（FI）和饲料转化率（FCR）。BWG = 最终体重 - 初始体重。FCR = 饲料摄入量（g）/ 体重增重（g）。

**组织病理学检查**：
肠道组织在10%中性缓冲福尔马林中固定12小时，通过分级乙醇脱水，用二甲苯（1:1）清洗，然后嵌入石蜡（熔点56°C）中。第(5 μm)节组织使用切片机（Leica RM2255，德国）切割，然后用苏木精和伊红（H&E）染色，并通过显微镜（Olympus CX41，东京，日本）进行观察。操作过程遵循了14中的方法。重新分离产气荚膜梭菌（C. perfringens）：在35日龄时收集肠道样本（每组10个）。制备了连续10倍的稀释液，并将0.1 mL的样本接种在血液琼脂上（5%羊血+100 mg/L新霉素硫酸盐）。培养板在37°C下厌氧培养16-24小时。通过革兰氏染色计数和鉴定α-和β-溶血菌落。计数结果以log?? CFU/g肠道内容物的形式表示15。

**统计分析**
数据使用SPSS（版本25.0，IBM公司，芝加哥，IL，美国）和GraphPad Prism（版本9.4）进行分析。应用了一元方差分析（one-way ANOVA），结果表示为平均值±标准误差（SE）。统计显著性设定为p ≤ 0.05。

**结果**

**血液学参数**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著改善了感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡的血液学状况。如表1所示，预防组和治疗组的总白细胞（WBC）计数、红细胞（RBC）计数、血红蛋白浓度（Hb）和红细胞压积（PCV）均显著高于阳性对照组（p ≤ 0.05）。例如，WBC从阳性对照组的14.2 ± 0.5 × 10?/L增加到预防组的17.5 ± 0.3 × 10?/L。相反，平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白（MCH）和平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）保持在正常生理范围内，表明血液生理和携氧能力有所改善。这些结果表明，早期给予粪肠球菌M74有助于维持血液学稳态，并在产气荚膜梭菌感染期间增强免疫准备。

**表1** A型产气荚膜梭菌感染后（第19天），粪肠球菌M74对肉鸡血液学参数的影响。

**肝功能参数**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著减轻了A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）引起的肝脏损伤。如表2所示，预防组和治疗组的血清AST、ALT和ALP水平显著低于阳性对照组（p ≤ 0.05），接近阴性对照组的值。例如，AST从阳性对照组的82.4 ± 7.2 U/L降至预防组的51.1 ± 1.3 U/L。此外，总蛋白、白蛋白和球蛋白水平在处理过的鸟类中也显著恢复。总蛋白从阴性对照组的3.36 ± 0.2 g/dL增加到预防组的3.7 ± 0.05 g/dL，而白蛋白和球蛋白显示出类似的恢复趋势。这些发现反映了肝脏功能的改善和肝细胞渗漏的减少，表明粪肠球菌M74在产气荚膜梭菌感染期间有效支持肝脏健康。

**表2** A型产气荚膜梭菌感染后（第19天），粪肠球菌M74对肉鸡肝功能参数的影响。

**肾功能参数**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著保护了感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡的肾功能。如表3所示，阳性对照组表现出血清尿素、肌酐、尿酸和钾水平升高，表明肾功能受损。预防组和治疗组这些参数均显著降低（p ≤ 0.05），接近阴性对照组的值。例如，尿素从阳性对照组的46.7 ± 3.41 mmol/L降至预防组的29.6 ± 2.32 mmol/L，肌酐从1.34 ± 0.21 mg/dL降至0.85 ± 0.13 mg/dL。这些结果表明，粪肠球菌M74在产气荚膜梭菌感染期间对肾脏生理具有保护作用。

**免疫学参数**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著增强了感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡的体液免疫和细胞免疫反应。如表4所示，预防组和治疗组的血清免疫球蛋白（IgA、IgM）、细胞因子（IL-4、TNF-α）和T细胞标志物（CD4?、CD8?）水平显著高于阳性对照组（p ≤ 0.05）。预防组的增强效果最为明显，证实了早期给予粪肠球菌可以增强免疫力。例如，IgM从阴性对照组的1.0 ± 0.20 mg/mL增加到预防组的10 ± 2.32 mg/mL，CD8? T细胞从阴性对照组的180.5 ± 1.0增加到预防组的450.7 ± 1.8。

**生长性能**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著改善了感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡的生长性能。如表5所示，预防组的最终体重（FBWT）、体重增重（BWG）和饲料转化率（FCR）最高，其次是治疗组。相比之下，阳性对照组的生长性能最差。例如，FBWT从阳性对照组的1,465 ± 45.67 g增加到预防组的1,904 ± 39.79 g，而BWG从1,430 ± 45.67 g增加到1,880 ± 39.79 g，FCR从阳性对照组的1.74降低到预防组的1.30，表明营养利用效率更高。这些结果表明，粪肠球菌可以增强感染肉鸡的生长和肠道效率。

**肠道形态学（绒毛高度和隐窝深度）**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著改善了感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡的肠道形态。如表6所示，预防组和治疗组的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比率显著高于阳性对照组（p ≤ 0.05）。预防组的绒毛延长最为明显，表明吸收能力和肠道健康得到改善。例如，绒毛高度从阳性对照组的580.67 ± 64.46 μm增加到预防组的828.33 ± 56.37 μm，而绒毛高度/隐窝比率从5.83增加到7.73，反映了更有效的肠道吸收表面。

**组织病理学病变评分**
对空肠组织的显微镜检查显示，感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡出现了明显的组织病理学改变。阳性对照组表现出严重的黏膜坏死、绒毛侵蚀和炎症细胞浸润。相比之下，补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）的肉鸡肠道结构完好，炎症减少。预防组表现出接近正常的形态，仅有轻微的退化，证实了这种益生菌的保护作用。如表7所示，充血评分从阳性对照组的3.2 ± 0.2降至预防组的0.8 ± 0.13，而退化评分从3.4 ± 0.22降至0.6 ± 0.22，反映了黏膜的显著恢复。图1展示了空肠组织的代表性显微照片，提供了这些组织学改善的视觉证据。

**图1** A型产气荚膜梭菌感染后（第19天）肉鸡肠道的组织病理学病变评分的代表性显微照片（H&E ×200）。

**细菌重新分离和肠道微生物群**
补充粪肠球菌M74（15 × 10? CFU/kg）显著减少了感染A型产气荚膜梭菌（1.9 × 10? CFU/mL）的肉鸡的肠道病原体负荷。如表8所示，预防组和治疗组的产气荚膜梭菌和总大肠菌群计数显著低于阳性对照组（p ≤ 0.05）。这种病原菌的减少伴随着有益肠道微生物群的比例增加，证实了粪肠球菌的抗菌和微生物群平衡作用。例如，总大肠菌群计数从阳性对照组的4.9 ± 0.1 CFU/mL降至预防组的0.8 ± 0.19 CFU/mL，而肠道细菌计数从5.8 ± 0.1降至0.7 ± 0.21 CFU/mL。

**讨论**
家禽生产是全球畜牧业中增长最快的领域，也是世界动物蛋白供应的主要贡献者。该行业的显著扩张得益于遗传选择、营养改善、更好的管理实践，以及历史上抗生素作为生长促进剂和预防剂的使用。然而，抗生素的滥用和过度依赖导致了抗菌素耐药性的出现，成为全球健康问题16。因此，迫切需要开发有效的替代品，以维持动物健康和生产力，同时减少对抗生素的依赖。
坏死性肠炎（NE）主要由产气荚膜梭菌引起，是家禽中最具经济破坏性的肠道疾病之一，每年造成的全球损失估计超过20亿美元17,18。产气荚膜梭菌是一种普遍存在的革兰氏阳性、产孢子的厌氧菌，存在于土壤、垫料、水中以及动物的胃肠道中。这种细菌产生多种毒素——特别是坏死性肠炎β毒素（NetB）——会破坏肠道上皮细胞，扰乱肠道稳态并导致严重的肠道损伤19,20,21。
易感因素如球虫感染、不良的饲料配方、环境压力和肠道黏膜损伤会进一步增加NE的易感性。临床上，鸟类表现出脱水、抑郁、腹泻和小肠中的特征性坏死病变22。许多国家禁止使用抗生素生长促进剂（AGPs），这增加了寻找控制NE替代策略的紧迫性23,24。

**益生菌作为抗生素的替代品**
益生菌是活的微生物，当以适当剂量给予时，可以对宿主产生健康益处6。它们维持肠道微生物平衡，改善营养利用，并刺激免疫反应。粪肠球菌是一种常见的乳酸菌，已成为最有效的益生菌候选者之一。M74菌株已被欧盟和美国FDA批准作为饲料添加剂，因其对动物健康的证明安全性和有益效果7,12。

**血液学发现**
在本研究中，感染产气荚膜梭菌导致阳性对照组中的红细胞（RBCs）、血红蛋白（Hb）和红细胞压积（PCV）显著下降，同时伴有白细胞增多（leukocytosis），表明贫血和全身性炎症。这与28的研究结果一致，他们报告了感染肉鸡的类似血液学变化。补充粪肠球菌（M74），特别是在预防组中，显著恢复了血液学参数至正常值，表明氧气运输能力和免疫能力得到增强。

**肝脏和肾脏功能**
肝脏酶（AST、ALT、ALP）是肝细胞完整性的关键指标。阳性对照组中观察到的酶水平升高反映了由于产气荚膜梭菌毒素引起的肝细胞损伤和氧化应激。接受粪肠球菌的鸟类显示出酶活性显著降低，血清蛋白、白蛋白和球蛋白水平恢复，表明肝脏得到保护，代谢性能改善29,30。这些发现与先前关于肉鸡残留物消耗和血液生化变化的药理学研究一致51。
同样，感染鸟类中尿素、肌酐、尿酸和钾水平的升高表明肾脏受损。粪肠球菌的补充使这些参数恢复正常，表明具有肾保护作用，如31,32先前所述。这些效果可能是由于益生菌能够解毒细菌代谢物并维持电解质平衡。

**免疫反应**
免疫参数显示，粪肠球菌处理组的IgA和IgM水平以及细胞因子（IL-4、TNF-α）显著增强。CD4?和CD8? T细胞计数的增加表明体液免疫和细胞免疫的激活得到改善。这些发现与33,34,35的研究一致，他们报告称粪肠球菌调节细胞因子分泌，增强肠道IgA的产生，并增强黏膜免疫防御。
益生菌诱导的免疫调节可能涉及模式识别受体（如Toll样受体（TLRs）的刺激，从而控制促炎和抗炎途径的激活。如37,38所述，益生菌调节紧密连接基因和黏膜完整性，减少肠道通透性和病原体入侵。

**生长性能和饲料效率**
补充粪肠球菌的鸟类在体重增重、饲料摄入量和饲料转化率（FCR）方面表现出显著改善。预防组的表现最好，表明早期给予可带来最大益处。这些发现与44,45,46,47,48的研究结果一致，他们报告称益生菌补充可以改善生长性能和营养吸收效率。饲料转化率的提高可能是由于消化改善、更好的肠道形态和减少的肠道炎症。在水生物种中，使用功能性饲料添加剂也报告了类似的保护和生长促进效果52。

**肠道形态学和绒毛结构**
组织学分析显示，粪肠球菌组中的肠道绒毛高度和绒毛高度/隐窝比率显著改善。这些形态学改善转化为更大的吸收表面积、更好的营养吸收和黏膜完整性。研究结果与44,50的研究一致，他们发现添加粪肠球菌（E. faecium）可以增加空肠和回肠的绒毛高度并降低隐窝深度。组织病理学检查和病变评分显示，产气荚膜梭菌（C. perfringens）感染会导致广泛的绒毛坏死、上皮脱落和炎症浸润。然而，无论是预防性还是治疗性添加粪肠球菌，都能显著降低充血和变性的病变评分。先前关于林可霉素在患有坏死性肠炎的肉鸡中的药理学研究也支持了干预后观察到的组织病理学改善效果53。除了绒毛长度增加外，所有处理组中仅观察到轻微的变性变化。对盲肠的检查显示感染后淋巴组织元素增多，反映了黏膜免疫活性的增强。病变评分采用标准化盲法进行（0–4分：0=正常，4=严重）。最近的研究强调了益生菌在减轻肉鸡坏死性肠炎病变方面的潜在益处54。这些观察结果与39的研究相符，他们报告称饮食中的粪肠球菌可以改善肠道微绒毛结构，促进黏膜发育，并影响负责消化、吸收和上皮成熟的基因。在添加粪肠球菌的组中，产气荚膜梭菌和总大肠菌群的数量均显著减少，证实了其抗菌和调节微生物群的特性。

粪肠球菌（M74）的益处可以归因于几个互补机制：
1. 竞争性排斥产气荚膜梭菌和其他病原体；
2. 产生乳酸和细菌素以抑制有害细菌；
3. 通过细胞因子调节增强黏膜免疫力；
4. 改善肠道形态和营养吸收。
这些机制共同作用，建立了更健康的肠道微环境，提高了全身免疫力，并促进了生长性能。

结论
添加粪肠球菌（M74）对感染A型产气荚膜梭菌的肉鸡具有益处。这种益生菌改善了生长性能、血液学指标、肝肾功能、免疫反应和肠道形态。组织病理学检查表明黏膜损伤减少，组织恢复增强，同时肠道病原菌的数量显著降低。尽管这些结果突显了粪肠球菌（M74）的保护和支持作用，但它应主要被视为一种天然辅助手段或预防措施，而不是抗生素的完全替代品。建议进行更大样本量、更长时间实验和田间试验的进一步研究，以充分确立其作为控制家禽坏死性肠炎替代策略的潜力。