《Emerging Microbes & Infections》：Natural history of latent brucellosis and diagnostic performance of B-SPOT: a 24-month prospective cohort study based on large-scale screening in northern China
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本研究关注布鲁氏菌病潜伏感染（latent brucellosis）的存在、自然转归及早期诊断难题。研究人员建立了一种基于宿主特异性免疫的新型布鲁氏菌病ELISpot检测方法（B-SPOT），并在中国北方布鲁氏菌病流行区开展了大规模筛查（n=2459）及为期24个月的前瞻性队列随访。结果表明，流行区居民潜伏感染率为3.3%，其中33.3%的潜伏感染者在两年内进展为急性布鲁氏菌病，且前6个月为高危期。B-SPOT诊断急性感染的灵敏度为95.1%，特异性为98.2%，且在预测潜伏感染进展方面（HR=10.94）显著优于传统血清凝集试验（SAT）。该研究明确了潜伏感染的自然病史，并提供了优于传统方法的检测和风险评估新工具。
布鲁氏菌病，一种由布鲁氏菌（Brucella spp.）引起的人畜共患病，在全球范围内每年造成高达160万至210万新发病例，是威胁人类健康的重大公共卫生问题。该病临床表现多样，从发热、乏力、关节肌肉疼痛，到累及中枢神经系统、泌尿生殖系统乃至心脏瓣膜，严重时可能导致多器官持续损伤。早期诊断和干预对于优化其防治策略至关重要。然而，传统的诊断“金标准”——从临床样本中分离培养布鲁氏菌——阳性率极低。血清学检测，如目前国内最常用的血清凝集试验（Serum Agglutination Test, SAT），虽广泛使用，但其抗体滴度在有效治疗后仍可能长期保持阳性，无法准确反映当下的疾病活动状态。更为关键的是，关于布鲁氏菌病是否存在一个无症状的“潜伏感染”阶段，即个体从未出现相关症状但SAT检测阳性，以及这个阶段是否会发展为活动性疾病，长期以来在学术界存在争议。既往研究大多基于医院、患者家属或高危人群（如兽医、养殖户），缺乏基于大规模普通人群的流行病学数据。解决上述问题，不仅有助于更精准地评估疾病负担，也为在高危人群中实现“关口前移”，即在症状出现前进行干预提供了理论依据。为此，研究人员开展了一项旨在阐明潜伏期自然史并评估新型诊断方法的开创性研究，相关成果发表在《Emerging Microbes & Infections》期刊。
为回答这些问题，研究者采用了两种队列研究结合多种实验室检测技术的综合方案。首先，他们在非流行区（上海）建立了一个测试队列，纳入了41名布鲁氏菌病患者和57名非患者，以评估新建的B-SPOT方法的诊断效能。随后，在流行区（沈阳康平县16个村庄）开展了大规模横断面筛查，对2459名居民进行了SAT和玫瑰红平板试验（Rose Bengal Plate Test, RBPT）筛查，并在此基础上对血清学阳性的潜伏感染者（n=81）进行了为期24个月的前瞻性随访，观察其自然发展过程。研究建立了一种新型的布鲁氏菌特异性ELISpot检测方法（B-SPOT），其核心是使用化学合成的布鲁氏菌外膜蛋白Omp25和Omp31肽段库刺激外周血单个核细胞，通过检测分泌的干扰素-γ（IFN-γ）来量化抗原特异性T细胞的免疫应答。整个研究严格遵循伦理规范，并进行了样本量估算以确保统计效力。
研究结果
测试队列中B-SPOT对布鲁氏菌病的诊断效能评估
研究人员建立了针对布鲁氏菌外膜蛋白25/31家族的特异性肽段库，并确定了刺激外周血单个核细胞的最佳浓度，从而建立了B-SPOT检测方法。在测试队列中，以血培养和SAT的联合结果作为金标准，B-SPOT检测的受试者工作特征曲线下面积（AUC）高达0.986。当以6个斑点形成细胞（Spot Forming Cells, SFCs）为最佳阈值时，B-SPOT诊断布鲁氏菌病的灵敏度为95.1%，特异性为98.3%。进一步分析显示，B-SPOT与SAT结果具有高度一致性。然而，PCR检测的阳性率较低，可能与样本储存时间较长有关。此外，研究发现B-SPOT的SFCs在未治疗、治疗中和慢性布鲁氏菌病患者中存在差异，特别是未治疗组的SFCs（中位数87）显著高于慢性组，表明B-SPOT在评估疾病活动状态方面具有一定潜力。
中国北方地区潜伏性布鲁氏菌病的大规模横断面筛查及24个月前瞻性队列研究
在流行区的筛查中，共分析了2459名居民，其中81人（3.3%）SAT和RBPT检测呈阳性，被定义为潜伏性布鲁氏菌病。对其中73例阳性样本和84例匹配的阴性样本进行B-SPOT检测，结果显示B-SPOT与SAT在诊断潜伏感染方面同样具有高度一致性。在为期24个月的前瞻性随访中，63名潜伏感染者中有21人（33.3%）进展为急性布鲁氏菌病，而402名血清学阴性对照者中无人发病，差异具有统计学意义。在21名进展者中，有16人（76.2%）在前6个月内进展，14人（66.7%）以关节疼痛为首发症状，提示潜伏感染诊断后的前六个月是疾病进展的关键窗口期，且关节疼痛是主要初始症状。
B-SPOT对布鲁氏菌病进展的预测价值
对比潜伏感染者和测试队列中未治疗患者，B-SPOT的SFCs在两组间无显著差异，而SAT滴度则在未治疗患者中更高，表明SAT在区分潜伏感染与急性感染方面表现更佳。然而，生存分析显示，在预测潜伏感染进展方面，B-SPOT阳性（或SAT与B-SPOT双阳性）的风险比高达10.94，显著高于仅SAT阳性3.04的风险比。这表明，B-SPOT在预测潜伏性布鲁氏菌病进展为活动性疾病的风险方面，具有优于传统SAT的预测能力。
结论与讨论
本研究的结论是明确且具有重要价值的。首先，研究证实了在布鲁氏菌病流行区，潜伏感染确实存在，其患病率约为3.3%。更重要的是，这些潜伏感染者并非“无害携带者”，他们中有高达三分之一（33.3%）会在两年内进展为有症状的活动性疾病，且进展风险在确诊后的前半年内最高。这为公共卫生部门识别和管理高风险人群提供了明确的流行病学依据。
其次，研究成功建立并验证了一种新型的细胞免疫检测方法——B-SPOT。该方法在诊断活动性布鲁氏菌病时表现出高灵敏度（95.1%）和高特异性（98.2%），可作为现有诊断方法的有力补充。尽管B-SPOT本身无法有效区分潜伏感染、未治疗感染和慢性感染（这可能与T细胞免疫记忆的长期存在有关），但其最大的亮点在于卓越的预测价值。B-SPOT阳性是潜伏感染进展为活动性疾病的强预测因子，其预测效能显著优于目前广泛使用的SAT。这意味着B-SPOT不仅是一个诊断工具，更是一个风险评估工具，有助于临床医生识别出那些更可能“由潜伏转活动”的高危个体，从而考虑进行更密切的监测或早期干预。
本研究也存在一些局限性，如在诊断队列中样本量有限，筛查队列中未对所有参与者进行B-SPOT检测，且随访时间仅为2年。此外，研究仅观察了自然史，未进行干预，未来是否需要对高危潜伏感染者进行抗生素预防性治疗，以及采用何种方案，仍需进一步研究探索。尽管如此，这项研究首次在大人群中系统描绘了布鲁氏菌病潜伏感染的自然史，并开发出一种优于传统血清学方法的预测工具，为深化布鲁氏菌病的防控、实现早期预警和精准管理奠定了重要基础。
