DEQAS对用于测量1,25-二羟基维生素D的现有检测方法性能的评估

《The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology》：A DEQAS REVIEW OF THE CURRENT PERFORMANCE OF ASSAYS FOR THE MEASUREMENT OF 1,25DIHYDROXYVITAMIN D

维生素D外部质量评估计划（DEQAS）通过全球样本分发评估实验室检测1,25(OH)2D的性能。2024/25周期分析141家实验室数据，比较方法实验室 trimmed mean（MLTM）与 all laboratory trimmed mean（ALTM）作为目标值。结果显示ALTM测量不确定度更符合可接受标准（<30%标准差），尤其在样本浓度跨度大时表现更优，支持以ALTM±30%作为实验室性能评估基准。

　　

乔治亚·E·哈克尼 | 埃玛·L·威廉姆斯

DEQAS，帝国理工学院医疗NHS信托基金，查令十字医院，富勒姆宫路，伦敦，英国W6 8RF

摘要

维生素D外部质量评估计划（DEQAS）通过每季度在全球范围内分发样本，来评估参与者对维生素D代谢物（包括1,25-二羟基维生素D（1,25(OH)₂D）分析方法的性能。本文综述了当前1,25(OH)₂D方法的表现。分析了2024/25年度DEQAS分发周期内参与者提交的数据，并比较了不同检测方法之间的趋势。2024/25年度的四次分发涵盖了广泛的浓度范围，这要求参与者在完整的参考区间内报告结果。分析性能正在提高；然而，主要方法组之间的差异仍然存在。虽然基于准确性的评估计划被视为黄金标准，但目前尚无1,25(OH)₂D的参考测量程序。因此，参与者的性能是针对“方法实验室修剪均值”（Method Laboratory Trimmed Mean，MLTM）进行评估的。为了验证这种方法的有效性，计算了每种方法以及2024/25年度所有分发周期中的“所有实验室修剪均值”（All Laboratory Trimmed Mean，ALTM）的测量不确定性。计算出的测量不确定性均处于可接受范围内（小于标准差的30%），特别是对于DiaSorin Liaison XL组。对于参与者较少的方法组，MLTM作为目标值的不确定性超出了可接受范围，这表明ALTM提供了更稳健的目标值。这一发现支持使用ALTM来评估参与者的性能，其中可接受的性能定义为至少80%的分布样本的结果在ALTM的±30%范围内。这一性能目标代表了当前最先进方法所能达到的水平。

引言

维生素D外部质量评估计划（DEQAS）首次建立于1989年，旨在确保实验室测量维生素D代谢物分析方法的可靠性[1]。该计划的实施是由于文献中有多份报告指出，不同实验室在测量和报告25-羟基维生素D（25OHD）时存在较大差异，这些实验室难以区分正常和轻微升高的维生素D浓度[2]、[3]。最初，该计划仅评估25OHD的检测性能，后来在1997年扩展到包括1,25-二羟基维生素D（1,25(OH)₂D）。2013年增加了3-表位-25-羟基维生素D3（3-epi-25OHD3）的评估，2015年又增加了24,25-二羟基维生素D（24,25(OH)₂D3）[4]。

人类血清样本每季度分发给大约450个来自48个国家的参与者，用于分析维生素D代谢物（包括1,25(OH)₂D），参与者有五周的时间提交结果。在2024/25年度的分发中，有141个参与者提交了1,25(OH)₂D的结果。每次分发结束后，参与者会收到一份详细说明其性能的正式报告。如果实验室达到所需的性能目标，将每年颁发能力证书。对于25OHD，75%的结果应在CDC指定值的±25%范围内；对于1,25(OH)₂D，80%的结果应在MLTM的±30%范围内[4]。这些目标由一个在维生素D、质量评估计划和生物统计学方面具有专业知识的顾问小组定期审查，该小组可以为参与者和制造商提供咨询。DEQAS还与美国国家标准与技术研究院（NIST）和维生素D标准化计划（VDSP）密切合作[5]。

2013年4月，在美国国立卫生研究院膳食补充剂办公室的支持下，DEQAS成为基于准确性的计划，主要针对25OHD，目标值由NIST参考测量程序（RMP）确定[6]。目前，DEQAS使用疾病控制与预防中心（CDC）的RMP为每个血清样本提供目标值[7]。主要25OHD EQA计划的报告包括总25OHD以及25OHD2和25OHD3的RMP值。3-表位-25OHD3和24,25(OH)₂D3的值是使用CDC的常规LC-MS/MS方法确定的。包括这些代谢物使得使用LC-MS/MS进行测量的参与实验室之间可以进行比较。目前尚无1,25(OH)₂D的RMP，因此参与者是针对“方法实验室修剪均值”（MLTM）进行评估的。

在1,25(OH)₂D EQA计划中，有来自27个国家的141个参与者注册，DEQAS处于一个独特的位置，可以评估多个制造商和实验室的1,25(OH)₂D检测性能。由于缺乏1,25(OH)₂D的RMP，并且检测方法之间存在较大差异，DEQAS历来使用MTLM作为每个方法组的目标值进行评估。本文利用2024年4月至2025年1月连续四次分发的数据，回顾了参与者对1,25(OH)₂D的测量性能。为了验证MLTM作为目标值的有效性，评估了每个参与实验室相对于MLTM和ALTM的偏差百分比。同时确定了MLTM和所有实验室修剪均值（ALTM）的测量不确定性（Un）。参与者性能是针对MLTM和ALTM两个目标值进行评估的。这项分析旨在确定DEQAS是否应改为使用ALTM来评估1,25(OH)₂D计划的性能，而不是目前使用的MLTM方法。

部分摘录

血清来源

血清从BIO IVT（美国纽约州韦斯特伯里）购买，这些血清来自单个供体单位，按照临床和实验室标准协会（CLSI）指南C37-A采集和处理。这些血清经过筛查，确认不含乙型肝炎表面抗原、HIV 1和2抗体、HCV抗体、梅毒、西尼罗河病毒和克鲁兹螺旋体，并在干冰上冷冻后运送到DEQAS。

池液和分液的制备

使用DiaSorin Liaison免疫测定方法对每份血清捐赠的分液进行测量

结果

在2024/25年度的分发周期中，来自27个国家的141个实验室提交了1,25(OH)₂D的结果，其分析测量范围为82.0 pmol/L至198.1 pmol/L。因此，在统计修剪之前的数据集包含2,820个单独提交的结果。图1和图2分别显示了2024年4月至2025年1月期间提交的结果中主要方法组（至少有十个参与实验室的方法组）的平均偏差百分比和平均CV百分比。

讨论

维生素D是一组具有抗佝偻病活性的物质的通用名称。在人体中，主要的循环形式的维生素D是25-羟基化前激素25OHD3和25OHD2，它们分别来源于胆钙化醇和麦角钙化醇。维生素D在肝脏中的25-羟基化过程不受调控，血清中的总25OHD浓度反映了来自皮肤和口服来源的维生素D供应[10]。血清25OHD浓度的测量是

CRediT作者贡献声明

乔治亚·E·哈克尼：撰写——初稿、软件开发、调查、数据管理。埃玛·路易丝·威廉姆斯：撰写——审阅与编辑、监督、方法学、调查、概念化。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。