采用基于荧光的对苯甲醛衍生化方法，对血浆新蝶呤作为过敏性鼻炎免疫活化生物标志物的临床评估

《Scientific Reports》：Clinical evaluation of plasma neopterin as a biomarker of immune activation in allergic rhinitis using a fluorescence-based o-phthaldehyde derivatization method

　　

摘要

过敏性鼻炎是一种常见的鼻黏膜慢性炎症疾病，其发病机制与IgE介导的过敏反应有关。尽管该疾病涉及Th2细胞因子、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞，但目前可用于检测全身免疫活性和氧化应激的可靠生物标志物仍然有限。新蝶呤是一种由巨噬细胞产生的标志物，可反映干扰素-γ诱导的免疫激活状态及氧化失衡情况，但现有的血浆检测方法要么成本过高，要么灵敏度不足，难以在临床中常规使用。本研究开发了一种基于荧光的技术，通过在弱碱性条件下使用2-巯基乙醇对氧代甲醛进行衍生化处理，从而测定血浆中的新蝶呤含量。该反应会生成一种具有强荧光的稳定异吲哚衍生物（λ_ex＝335纳米，λ_em＝455纳米），使得天然新蝶呤的量子产率从0.24上升至NPT–OPA衍生物的0.65。该方法的检测范围为1至20纳克/毫升（r2＝0.9996），检测限为0.22纳克/毫升，定量限为0.66纳克/毫升。检测结果的准确率在99.0%到100.8%之间，精密度则始终低于1.0%。生物蝶呤、叶酸、核黄素和黄蝶呤等物质不会对该检测结果造成干扰，因为它们对新蝶呤信号的贡献均低于5%。研究对26名过敏性鼻炎患者和26名健康对照组的血浆新蝶呤水平进行了检测，结果显示过敏性鼻炎患者的新蝶呤浓度（2.9±0.7纳克/毫升）明显高于对照组（1.5±0.3纳克/毫升，p＜0.001）。新蝶呤水平与症状严重程度（r＝0.44，p＝0.015）以及嗜酸性粒细胞数量（r＝0.41，p＝0.022）存在相关性，这表明免疫激活状态与疾病的严重程度之间存在关联。这种基于荧光的技术为血浆新蝶呤的定量提供了灵敏、选择性高且快速的检测方法，有助于将新蝶呤视为过敏性鼻炎中免疫激活和氧化应激的潜在生物标志物。