基于液滴玻璃化技术的冷冻保存方法用于长期保存刺葫芦（Momordica dioica Roxb. ex Willd.）
《Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC)》：Droplet vitrification-based cryopreservation for long-term conservation of spiny gourd (Momordica dioica Roxb. ex Willd.)
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秋葵菜属植物离体保存与性别特异性茎尖低温保存技术建立，优化BAP（0.88-2.22 μM）、IBA（4.92 μM）及蔗糖（0.3 M）预处理，滴管 vitrification工艺使女性株系解冻存活率73.40%和再生率65.95%显著高于男性株系，SSR分析证实遗传纯度。
摘要
体外衍生外植体的冷冻保存为长期种质资源保存提供了一种安全且经济有效的策略，尤其适用于不适合传统种子储存的物种。Momordica dioica Roxb. ex Willd.是一种在营养和药用方面都具有重要价值的雌雄异株葫芦科植物，但由于其在低温储存条件下种子存活率低以及从种子衍生出的植株无法保持原有性状，因此面临着保存上的挑战。本研究建立了一种高效的体外繁殖方案，并首次为M. dioica开发了一种基于性别的茎尖冷冻保存方法。分别从发芽块茎的节段外植体中建立了雌性（SKNF）和雄性（RMDSG-2）基因型的无菌培养。在Murashige和Skoog（MS）培养基中添加0.88 μM的6-苄氨基嘌呤（BAP）时，能够最佳地诱导芽的形成。雌性基因型的最大增殖效果是在含有0.88 μM BAP和200 mg L?1酪蛋白水解物的MS培养基上实现的（每个外植体产生7.8个芽），而雄性基因型则在含有2.22 μM BAP的MS培养基上达到最大增殖效果（每个外植体产生7.4个芽）。生根效果最好的是在添加了4.92 μM吲哚-3-丁酸（IBA）的半浓度MS培养基中。对于长期储存，采用了体外衍生的腋芽进行液滴玻璃化处理。经过24小时用0.3 M蔗糖预处理的外植体在解冻后的存活率和再生能力最高，随后分别将它们置于加载溶液中并置于冷却的PVS2溶液中20分钟，其中雌性基因型的存活率和再生率最高（分别为73.40%和65.95%），而雄性基因型分别为57.86%和51.76%。通过使用八个简单序列重复（SSR）和表达序列标签（EST）- SSR引物对再生植物的遗传纯度进行了评估。所有引物均产生了单态的条带图案，在分析的位点上未检测到任何多态性，从而证实了再生植物与母本植物之间的遗传一致性。所开发的系统能够实现M. dioica的高效克隆繁殖和可靠的长期、基因型特异性保存，有助于保护其宝贵的遗传多样性。
体外衍生外植体的冷冻保存为长期种质资源保存提供了一种安全且经济有效的策略，尤其适用于不适合传统种子储存的物种。Momordica dioica Roxb. ex Willd.是一种在营养和药用方面都具有重要价值的雌雄异株葫芦科植物，但由于其在低温储存条件下种子存活率低以及从种子衍生出的植株无法保持原有性状，因此面临着保存上的挑战。本研究建立了一种高效的体外繁殖方案，并首次为M. dioica开发了一种基于性别的茎尖冷冻保存方法。分别从发芽块茎的节段外植体中建立了雌性（SKNF）和雄性（RMDSG-2）基因型的无菌培养。在Murashige和Skoog（MS）培养基中添加0.88 μM的6-苄氨基嘌呤（BAP）时，能够最佳地诱导芽的形成。雌性基因型的最大增殖效果是在含有0.88 μM BAP和200 mg L?1酪蛋白水解物的MS培养基上实现的（每个外植体产生7.8个芽），而雄性基因型则在含有2.22 μM BAP的MS培养基上达到最大增殖效果（每个外植体产生7.4个芽）。生根效果最好的是在添加了4.92 μM吲哚-3-丁酸（IBA）的半浓度MS培养基中。对于长期储存，采用了体外衍生的腋芽进行液滴玻璃化处理。经过24小时用0.3 M蔗糖预处理的外植体在解冻后的存活率和再生能力最高，随后分别将它们置于加载溶液中并置于冷却的PVS2溶液中20分钟，其中雌性基因型的存活率和再生率最高（分别为73.40%和65.95%），而雄性基因型分别为57.86%和51.76%。通过使用八个简单序列重复（SSR）和表达序列标签（EST）- SSR引物对再生植物的遗传纯度进行了评估。所有引物均产生了单态的条带图案，在分析的位点上未检测到任何多态性，从而证实了再生植物与母本植物之间的遗传一致性。所开发的系统能够实现M. dioica的高效克隆繁殖和可靠的长期、基因型特异性保存，有助于保护其宝贵的遗传多样性。
