用于通过荧光各向异性退极化技术高通量研究肽-脂质体相互作用的重组蛋白平台

《Communications Chemistry》：Recombinant protein platform for high-throughput investigation of peptide-liposome interactions via fluorescence anisotropy depolarization

　　

摘要

许多对膜运输和功能至关重要的胞质蛋白包含一个无结构的结构域，该结构域能够与特定膜结合，并在结合膜后转变为两亲性螺旋结构。这些可诱导形成的两亲性螺旋在细胞器的识别及其后续功能中起着关键作用，但目前用于表征其与特定膜亲和力的方法效率较低，且依赖于这些两亲性螺旋的溶解度。在这里，我们介绍了一种模块化的重组蛋白平台，该平台利用高通量荧光各向异性测量技术，能够快速测定可诱导两亲性螺旋与多种膜组成和曲率之间的结合亲和力。可诱导的两亲性螺旋通过一种带有荧光标记的小型泛素样修饰蛋白（SUMO）进行溶解，其与膜的结合通过荧光各向异性的变化来量化——这种现象之前已被观察到，但尚未得到充分解释。通过荧光各向异性衰减测量、溶液核磁共振（NMR）实验以及溶液荧光共振能量转移（FRET）技术，我们推断这种现象可能是由于在低盐条件下，囊泡膜电荷的作用使得荧光团在结合膜后的运动增强所致。这种重组蛋白平台可以方便地应用于任何感兴趣的可诱导两亲性螺旋，从而有助于研究促进其结合的具体膜生化参数。