在抗体澄清过程中二硫键的还原：一种台式规模检测方法及相应的缓解措施

《Biotechnology Progress》：Disulfide bond reduction of antibodies during clarification: A bench-scale assay and a mitigation tool

单阶段AEX纤维澄清系统在CHO细胞培养物中展现出优于传统双阶段深度过滤系统（如3M? Zeta Plus?）的性能，在抗体回收率、杂质去除率、处理效率及能耗方面更具优势。研究证实双阶段系统因操作压力较高易引发抗体二硫键还原（DSBR），而单阶段AEX系统通过静电吸附和低压运行有效抑制DSBR。通过建立工艺模型验证了该澄清方法在2000L规模生产的可行性。

　　

摘要

我们对比研究了使用两级深度过滤系统与单级电荷色谱净化器对多种中国仓鼠卵巢（CHO）细胞培养物的净化效果。结果表明，在产品回收率、去除工艺相关杂质以及处理量方面，单级纤维阴离子交换（AEX）净化方法的表现达到了或超过了传统两级深度过滤系统的水平。单级阴离子净化方法占地面积更小、设置时间更短、操作更简便、消耗的缓冲液冲洗量更少，并且运行时的压差也低于传统系统。在200升规模的对比实验中，通过深度过滤系统净化的细胞培养液（CCF）中的抗体出现了由于二硫键还原（DSBR）导致的产品质量下降，而通过AEX纤维方法净化的抗体则没有这种现象。我们推测，较低的运行压差和阴离子净化系统的静电吸附机制减少了产品发生DSBR的可能性。我们开发了一个实验室规模的过程模型，用于评估DSBR并预测工艺结果。随后利用该模型证明，使用两级3 M? Zeta Plus?深度过滤系统净化抗体时会发生抗体降解，而使用阴离子净化系统则不会。这一实验室规模的DSBR评估使我们能够对不同单克隆抗体（mAbs）的二硫键还原潜力进行排序，并展示了纤维净化方法在2000升规模生产中对易发生降解的抗体培养物的保护作用。

利益冲突声明

所有作者在研究期间均为拜耳健康护理有限责任公司（Bayer Healthcare LLC）的员工。作者们未发现任何可能影响本研究客观性的隶属关系、会员资格、资助或财务利益。

同行评审

为了保证透明度，与本文相关的同行评审文件可在以下链接查看：https://doi.org/10.1002/btpr.88507。

第三轮评审
编辑决定函	2026/03/10
第一编辑建议	2026/03/10
第二轮评审
编辑决定函	2026/02/27
第一编辑建议	2026/02/27
第一轮评审
编辑决定函	2025/12/30
第二审稿人报告	2025/12/21
第一审稿人报告	2025/12/17

数据可用性声明

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