《Viruses》：A Newly Established ELISA for the Surveillance of Rift Valley Fever in Dromedary Camels and Their Owners, Kenya 2018
Shannon L. M. Whitmer,
Jessica Rowland,
Emir Talundzic,
Deborah Cannon,
Aridth Gibbons,
Cynthia Ombok,
Jennifer L. Harcourt,
Natalie J. Thornburg,
Clayton Onyango and
John D. Klena
+ 8 authors
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为解决单峰驼作为人畜共患病潜在宿主的公共卫生风险，研究人员开展了一项横断面调查，通过建立骆驼特异性间接酶联免疫吸附试验（ELISA），检测肯尼亚马萨比特县单峰驼及其饲养者的裂谷热病毒（RVFV）IgG抗体。结果显示，15.6%的骆驼和7.6%的饲养者呈RVFV IgG阳性，表明骆驼可作为RVFV的扩增宿主，而从事农业活动及成年饲养者感染风险更高。该研究为骆驼相关人畜共患病的监测提供了新工具，并强调需加强骆驼养殖的健康安全指南。
在肯尼亚北部，气候变化导致的干旱迫使越来越多的牧民从养牛转向养驼。到2024年，肯尼亚已有478万头骆驼，成为全球第二大骆驼奶生产国，骆驼产品成为许多牧民的主要收入来源。然而，骆驼与人类密切接触，可能成为人畜共患病传播的桥梁。此前的研究已证实，单峰驼是中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）的动物宿主，并能将病毒传播给人类。但另一种由蚊子传播、也能通过接触感染动物组织传播的裂谷热病毒（RVFV）在骆驼中的流行情况及其对饲养者的风险，却鲜为人知。RVFV在非洲超过30个国家流行，人类感染后通常表现为发热、头痛等流感样症状，但约有≤5%的病例会发展为严重的出血热、脑膜炎甚至死亡。在肯尼亚，处理或食用感染动物的肉、奶等产品是重要传播途径。基于MERS-CoV的经验和骆驼与饲养者极为密切的接触，研究人员推测，骆驼也可能传播RVFV等其他 zoonotic 病毒。为了厘清这一问题，一项在肯尼亚马萨比特县开展的调查研究应运而生，其成果发表在学术期刊《Viruses》上。
为了开展这项研究，研究人员主要运用了以下几项关键技术方法：首先，他们于2018年在肯尼亚马萨比特县进行了一项横断面调查，收集了493份骆驼血清和197份人类（骆驼饲养者）血清样本。其次，他们基于已有的人RVFV IgG检测方法，开发并优化了一种用于检测骆驼RVFV IgG抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。该方法使用RVFV感染的全病毒抗原，并通过蛋白A/G-HRP或抗美洲驼IgG-HRP进行检测，同时设立了严格的阳性和阴性判定标准（包括信号强度阈值和剂量依赖性滴定验证）。最后，他们利用实时定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）对所有骆驼血清样本进行了RVFV RNA检测，并运用统计学方法（如卡方检验、费希尔精确检验）分析了与血清阳性率相关的因素，还通过地理信息系统（ArcGIS）绘制了血清阳性样本的空间分布图。
3.1. 开发RVFV特异性骆驼IgG ELISA
研究人员通过优化检测条件（如使用抗美洲驼IgG-HRP作为二抗），建立了一套骆驼特异性的RVFV IgG间接ELISA方法。该方法通过设定信号强度阈值（高于背景和阴性对照3个标准差）并要求样本呈现剂量依赖性滴定响应，来准确区分阳性、阴性和假阳性结果。
3.2. 肯尼亚北部骆驼和人类饲养者中的RVFV血清阳性率
应用上述标准，在493份骆驼血清中，15.6%（77份）为RVFV IgG阳性，7.6%（15份）的人类血清为阳性。阳性骆驼主要为成年雌性，而阳性人类则多与农业活动相关且年龄大于18岁。所有骆驼血清的RVFV RNA检测均为阴性。
3.3. 与RVFV IgG血清阳性率相关因素的分析
单变量分析显示，对于骆驼，雌性、大规模畜群（>50头）以及特定地理位置（如地点2和6）与更高的RVFV IgG血清阳性率显著相关。对于人类饲养者，从事农业活动和年龄大于18岁是血清阳性的显著风险因素，而性别或自我报告的与骆驼接触情况则无显著关联。
3.4. RVFV血清阳性在骆驼和人类中的空间分布
地理空间分析表明，骆驼和人类血清阳性率较高的地区（如地点2、5、6）主要集中在马萨比特县中部卡拉雷区的农田和森林地带。
这项研究得出结论，单峰驼可以作为RVFV（或抗原性相似的白蛉病毒属病毒）的感染宿主和潜在扩增宿主。在肯尼亚马萨比特县，骆驼中存在不可忽视的RVFV血清阳性率，且与大规模畜群、雌性骆驼及特定生态环境相关。人类饲养者的感染风险则与农业活动密切相关，而非仅与直接骆驼接触有关。这突显了在畜牧业从牛转向更耐旱的骆驼过程中，对人畜共患病进行持续监测的紧迫性。研究所开发的骆驼特异性RVFV IgG ELISA为这类监测提供了新的工具。论文在讨论部分进一步指出，肯尼亚现有的骆驼产品健康安全指南执行乏力，存在公共卫生风险。随着针对RVFV的人用和兽用疫苗的研发，在支持当地骆驼经济的同时，限制病毒传播成为可能。该研究强调了将骆驼纳入人畜共患病监测体系的重要性，并为制定相关的公共卫生干预措施提供了科学依据。
