使用UHPLC-HRMS联合方法对GBT1118在人体中的代谢特性进行全面分析，以用于兴奋剂检测

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Comprehensive metabolic characterization of GBT1118 in humans using a combined approach via UHPLC-HRMS for doping control

人工增强肌肉氧供是竞技体育中的主要作弊手段。GBT1118作为新型血红蛋白S多聚抑制剂，可有效提高血红蛋白对氧的亲和力，引发反兴奋剂监管挑战。本研究通过人肝微粒体体外模型结合多维数据挖掘策略，利用UHPLC-HRMS（DDA模式）结合计算预测和自建数据库，首次全面解析GBT1118的代谢特征，发现21种I相代谢物和8种II相代谢物，揭示酯水解、醛还原/氧化、羟基化（单/双）及葡萄糖醛酸化等代谢途径，其中>60%的代谢产物为葡萄糖醛酸结合物，提示需常规酶解处理。比较类似物体内代谢研究，建议原型药物及2种代谢物作为尿检标志物。本研究为HbS-PI类物质反兴奋剂提供关键代谢数据支撑，并建立代谢研究新范式。

　　

摘要

人工增强肌肉的氧气（O₂）输送是竞技体育中一种主要的作弊手段。GBT1118是一种新兴的血红蛋白S聚合抑制剂（HbS-PI），它通过提高血红蛋白对O₂的亲和力，显示出显著的性能提升效果，这引发了人们对其在体育运动中可能被滥用的担忧。然而，由于缺乏相关的代谢学知识以及对人类受试者的伦理限制，使得对GBT1118的有效兴奋剂控制变得困难。在这项研究中，通过结合体外人类肝脏微粒体模型和多维数据挖掘策略，对GBT1118的代谢过程进行了全面分析。利用基于Orbitrap的超高效液相色谱-高分辨率质谱（UHPLC-HRMS）技术，并采用数据依赖性采集（DDA）模式，检测了一级和二级反应产物；同时结合计算机模拟预测和自制的HbS-PI生物转化数据库进行了深入的代谢物筛查。经过重复数据排除、人工鉴定以及与合成标准物的比对验证，共发现了GBT1118的21种一级代谢物和8种二级代谢物。结构分析揭示了几个关键的代谢位点以及多种生物转化途径，包括酯类水解、醛类还原、醛类氧化、羟基化（单羟基化和双羟基化）、葡萄糖醛酸化以及这些途径的交叉作用。值得注意的是，葡萄糖醛酸化产物的比例较高（>60%），这表明在常规的反兴奋剂分析中需要引入酶促水解步骤。此外，根据代谢物的丰度以及与最近一项同类化合物的体内代谢研究的比较分析，该药物原型及其两种代谢物被提议作为监测滥用行为的潜在尿液标志物。本研究首次全面揭示了GBT1118在人体内的代谢特征，为兴奋剂控制提供了宝贵的参考，并为其他HbS-PI类化合物的人体代谢研究提供了有效工具。

图形摘要