10基因mRNA标志物qMIDSNPC：一种不依赖EBV状态的鼻咽癌快速预后分层新方法

《Cancers》：A Multigene Signature for Prognostic Stratification of Nasopharyngeal Carcinoma Yingying Liang, Zhiwen Mo and Muy-Teck Teh

为解决鼻咽癌早期诊断困难，尤其在EBV DNA阴性/低水平患者中缺乏有效生物标志物的问题，研究团队重新利用已验证的16基因头颈癌mRNA检测技术qMIDSV2，开发出10基因检测工具qMIDSNPC，其在区分正常鼻咽黏膜与鼻咽癌（包括晚期）时展现出优异的诊断和预后分层能力（AUC高达0.936），为不依赖EBV状态的快速临床管理提供了新策略。

　　

鼻咽癌是一种原发于鼻咽部黏膜上皮的鳞状细胞癌，在全球的分布呈现明显的区域性特征，在华南、东南亚等地尤为高发。其发生与爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）感染密切相关，血浆EBV DNA检测是目前临床广泛使用的诊断、风险分层和疾病监测的生物标志物。然而，一个不容忽视的临床困境是，高达15%-40%的鼻咽癌患者表现为EBV DNA阴性或低水平，尤其在非流行区。有研究估算，在流行人群中，仅依靠血浆EBV DNA进行筛查，可能会漏诊高达60.0%的I期患者，导致诊断延误和治疗机会的错失。此外，EBV DNA水平在患者康复后的复发监测中，尤其是在低水平时，其阳性预测值也较低。新近证据还表明，新冠病毒（SARS-CoV-2）感染可能导致EBV水平出现不可靠的波动，这使得单独依赖EBV DNA监测根治性治疗后的复发变得不再可靠。因此，临床上迫切需要一种不依赖EBV状态、客观、可重复的分子检测方法，用于EBV阴性或低水平鼻咽癌患者的诊断和预后评估。

传统病理学检查耗时且依赖病理医师的主观判读，而新兴的单细胞多组学等技术虽然能提供高分辨率数据，但转化为成本效益高、临床应用广泛的工具仍面临挑战。在此背景下，研究团队将目光投向了一种此前已成功应用于头颈鳞状细胞癌（HNSCC）和口腔鳞状细胞癌（OSCC）的快速多基因mRNA检测技术——定量恶性指数诊断系统（qMIDS）。该研究旨在重新利用其第二代技术（qMIDS^V2），评估其在鼻咽癌检测和风险分层中的潜力，以期找到一种独立于EBV状态的新型分子工具。

本研究在技术上主要运用了实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）来精确定量样本中特定基因的mRNA表达水平。研究团队采用了来自中国队列的62名参与者的组织样本，包括18例正常鼻咽黏膜和44例鼻咽癌组织。通过系统性的生物信息学分析和统计模型，对一组预先选定的16个基因（14个靶基因+2个内参基因）的表达数据进行分析，并利用特定的算法计算出一个“恶性指数”，用于癌症风险的判别和分层。

3.1. 参与者人口统计学和鼻咽癌临床病理学特征

本研究队列分析显示，鼻咽癌患者与捐赠正常黏膜的参与者在年龄上无统计学差异。然而，在女性鼻咽癌患者中，复发/转移性肿瘤患者比无复发患者更年轻。男性鼻咽癌发病率显著高于女性。在肿瘤分期分布上，无复发肿瘤主要为I-III期，而复发性/转移性肿瘤主要为IVa和IVb期。家族史和EBV DNA水平在有无复发/转移的患者间无显著差异。

3.2. OSCC生物标志物在鼻咽癌中的分子谱

通过对14个靶基因的mRNA表达进行相对定量分析，发现仅三个基因在正常组织和癌组织间差异表达。然而，通过受试者工作特征曲线分析，INHBA、CXCL8和FOXM1等基因在区分两者时表现出较好的诊断效能。与之前研究过的中国和英国口腔鳞癌队列相比，鼻咽癌队列显示出独特但部分共享的分子特征谱，这为后续优化专门针对鼻咽癌的基因组合提供了依据。

3.3. qMIDS诊断测试在鼻咽癌检测中的优化

研究团队通过系统性的基因组合滴定分析，从16个基因开始逐一剔除，评估不同组合区分正常与癌组织的诊断性能。最终发现，一个包含8个靶基因（NEK2, INHBA, FOXM1, TOP2A, BIRC5, CXCL8, NR3C1, IVL）和2个内参基因（YAP1, POLR2A）的10基因组合表现最优，其曲线下面积达到0.909。该优化组合被命名为qMIDS^NPC。统计分析证实，该组合的诊断效能显著，且与EBV DNA水平仅呈中等相关，提示其作用机制部分独立于EBV。

3.4. qMIDS^NPC在不依赖EBV状态检测鼻咽癌中的预后潜力

qMIDS^NPC在区分不同鼻咽癌分期方面展现出强大的预后潜力。它能显著区分正常组织与III期、IV期癌症，也能区分早期（I+II期）与晚期（III、IV期）。重要的是，qMIDS^NPC能够显著区分正常组织与EBV阴性鼻咽癌（AUC=0.825）以及EBV阳性鼻咽癌（AUC=0.905），证实了其不依赖于EBV状态的生物标志物价值。

3.5. qMIDS^NPC在鼻咽癌中的诊断和预后测试性能

qMIDS^NPC在区分正常鼻咽黏膜与所有鼻咽癌时，在最佳截断值下表现出91%的灵敏度、78%的特异度、87%的准确度、91%的阳性预测值和78%的阴性预测值。在预后风险分层方面，其区分正常组织与III期、IV期晚期鼻咽癌的性能最佳，曲线下面积高达0.936，阳性预测值和阴性预测值分别达到92%和84%。NPC prognostic test performance analyses for different tumor stages of NPC.">

本研究成功地将一个经过验证的多基因mRNA检测技术重新用于鼻咽癌，并优化出一个独特的10基因标志物组合——qMIDS^NPC。该检测方法在区分正常组织与鼻咽癌，特别是晚期（III-IV期）鼻咽癌时，展现出卓越的诊断和预后分层能力。其最关键的意义在于，qMIDS^NPC能够有效检测EBV阴性鼻咽癌，提供了一种不依赖于EBV状态的替代或辅助检测工具，有望填补当前临床实践中对这部分患者缺乏有效生物标志物的空白。该检测基于快速（1小时）RT-qPCR平台，仅需微量组织，具备转化为无创刷取或擦拭取样的潜力，且无需低温冷链运输，特别适用于资源有限地区的筛查和长期监测。尽管本研究受限于单一中国队列和样本量，但其结果为后续在更大规模、多中心、多族群队列中验证qMIDS^NPC的临床应用价值奠定了坚实基础。该研究为鼻咽癌，特别是EBV阴性或低水平患者的精准诊断和风险分层，提供了一种快速、客观且颇具前景的分子解决方案。