从Brucea javanica (L.) Merr.的枝条和叶子中分离出apotirucallane和tirucallane类三萜化合物的方法及其抗炎活性研究

《Phytochemistry》：Guide isolation of apotirucallane and tirucallane triterpenoids from the branches and leaves of Brucea javanica (L.) Merr. and their anti-inflammatory activities

巴西木枝叶通过分子网络和Moldiscovery策略分离出9个新三萜类化合物，结构经光谱和计算验证，化合物4抑制一氧化氮生产IC50为15.03±0.03 μM。

　　

郭珊珊|段志康|高长生|徐海英|林斌|姚国栋|黄晓晓|宋绍江

辽宁省计算化学基础天然抗肿瘤药物研究开发重点实验室；辽宁省天然药物活性分子研究开发工程研究中心；沈阳药科大学中药学院天然生物活性化合物发现与修饰重点实验室，中国辽宁省沈阳市110016

摘要：

本研究采用分子网络分析、Moldiscovery策略和传统植物化学技术相结合的综合方法，对Brucea javanica的枝叶化学成分进行了研究。该策略成功分离并鉴定了九种先前未描述的萜类化合物，命名为brujavaneos A–I（1–9）。通过广泛的光谱分析和电子圆二色性计算，明确了这些化合物的结构。此外，还评估了这些化合物的抗炎活性。其中几种化合物表现出中等抗炎活性，其IC₅₀值通过基于机器学习的InflamNat工具得到了可靠预测。值得注意的是，化合物4在LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中显著抑制了一氧化氮的生成，其IC₅₀值为15.03 ± 0.03 μM。

引言

Brucea javanica（L. Merr）是一种属于Simaroubaceae科的常绿灌木，生长在温暖潮湿的气候条件下，广泛分布于印度尼西亚、泰国、马来西亚和中国等南部沿海地区（Chen等人，2024年；Li等人，2021年）。其成熟的果实呈棕色至黑色，在中医中被称为“Yadanzi”，因其性寒味苦而被用于治疗炎症性疾病、疟疾和阿米巴性痢疾（Simamora等人，2019年）。植物化学研究表明，B. javanica中含有多种生物活性化合物，如萜类、喹啉类和生物碱（Duan等人，2021年；Yan等人，2016年；Bawm等人，2016年）。

尽管对B. javanica非果实成分的研究尚有限，但已有研究表明萜类是其主要成分之一（Dong等人，2013年；Hu等人，2022年）。传统上，通过柱层析法从复杂混合物中分离萜类化合物是一种常用的方法。然而，基于质谱的分子网络分析技术（如Global Natural Products Social Molecular Networking，GNPS平台）已成为识别具有特定结构特征的微量生物活性化合物的强大工具（Yousof等人，2024年；Hu等人，2025年；Xi等人，2025年）。Moldiscovery是一种质谱数据库搜索方法，通过概率建模将小分子与其质谱数据进行匹配，从而提高鉴定效率（Cao等人，2021年；Wang等人，2023年）。

在本研究中，结合使用分子网络分析和Moldiscovery技术从B. javanica的组分中分离出富含萜类的部分，并进一步分离出目标萜类化合物并评估了它们的抗炎潜力。

现代萜类化合物分析方法

为了鉴定B. javanica枝叶中的萜类化合物，对第4.3节所述的Fr. A-D组分进行了LC-MS/MS分析。LC-MS/MS数据通过MZmine 2软件处理后上传至GNPS平台（Du等人，2020年；Divisekara等人，2023年）。利用Moldiscovery在GNPS平台上生成了化学多样性丰富的分子网络，并通过Cytoscape 3.9.1软件进行可视化（图1a）。

分析结果显示，大多数萜类化合物集中在Fr. B组分中（如图所示）

结论

通过分子网络分析和Moldiscovery技术，从B. javanica中鉴定出了九种先前未描述的萜类化合物（1-9）。通过包括HRESIMS和NMR光谱在内的综合光谱分析，明确了这些化合物的结构。所有化合物的绝对构型通过将实验得到的电子圆二色性数据与计算结果进行比对来确定。

此外，还评估了部分化合物的抗炎效果

通用实验方法

¹H NMR和¹³C NMR光谱使用Bruker AV III-600光谱仪在DMSO-d₆溶剂中记录，TMS作为内标，化学位移以ppm（δ）表示。HRESIMS数据由Bruker Micro Q-TOF光谱仪获取。紫外光谱在Shimadzu UV-2600i光谱仪上测量（Shimadzu，日本京都）。旋光度在JASCO DIP-370数字旋光仪上测定（JASCO，日本东京）。Bio-Logic MOS-450光谱仪用于光学测量（Bio-Logic Science公司）

作者贡献声明

郭珊珊：撰写初稿、数据可视化。黄晓晓：撰写、审稿与编辑、数据可视化、指导。宋绍江：撰写、审稿与编辑、数据可视化。姚国栋：撰写、审稿与编辑、数据可视化。林斌：数据可视化、验证、软件操作。徐海英：数据可视化、数据管理。高长生：数据可视化、数据管理。段志康：撰写、审稿与编辑、撰写初稿、数据可视化

未引用的参考文献

Bawm等人，2008年；Wang等人，2025年。

利益冲突声明

作者声明没有可能影响本文研究的财务利益或个人关系。

致谢

本研究得到了国家重点研发计划（项目编号：2024YFC3506600）、国家自然科学基金区域创新与发展联合基金（编号：U22A20381）、辽宁省自然科学基金（编号：2024-MS-086）、沈阳市中青年科技人才培养专项U40杰出青年项目（编号：RC230803）、中国博士后科学基金（编号：2025M783939）等项目的支持。