由于生物素过量可能导致可见颜色发生改变，从而影响CRISPR-dCas9-sgRNA侧向流动分析法对HPV16和HPV18的检测结果：检测结果为阴性

《Scientific Reports》：Probable hindrance of visible colour due to excess biotin with CRISPR-dCas9-sgRNA lateral flow assay detection of HPV16 and HPV18: a negative finding

　　

摘要

为了开发一种基于CRISPR-dCas9的侧向流动分析（LFA）方法，用于检测人乳头瘤病毒16型（HPV16）和人乳头瘤病毒18型（HPV18）基因型，以实现即时分子诊断。该分析方法计划通过将生物素标记的dCas9-sgRNA组装体固定在链霉亲和素包被的硝化纤维素膜上来实现。分析流程包括依次加入生物素化的HPV16和HPV18 PCR扩增产物、链霉亲和素-碱性磷酸酶结合物以及BCIP/NBT底物以进行比色检测。然而，在实验设置中并未观察到颜色变化，这与阳性对照（生物素、链霉亲和素-碱性磷酸酶结合物和BCIP/NBT底物）的结果形成对比。失败的原因在于dCas9-sgRNA复合物和HPV PCR扩增产物中存在过量的生物素，导致链霉亲和素结合位点的竞争、结合构型异常、蛋白质折叠紊乱以及生物素-链霉亲和素相互作用的干扰。研究表明，在基于CRISPR-dCas9的LFA中使用多种生物素化分子可能会因竞争性结合和空间位阻而导致分析失败。研究结果建议使用两种不同的分子分别用于固定和信号生成，并强调需要独立优化结合组分和报告组分，以建立功能性的基于CRISPR-dCas9的LFA平台。