《PLOS One》：Development of a Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) for the screening of Candida auris
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为解决耳念珠菌（C. auris）快速筛查难题，研究人员开发了Candida Pan/auris LAMP检测技术。该技术可在64℃、40分钟内实现物种鉴别，临床灵敏度达97.14%，特异性100%，为医院感染控制提供了高效工具。
背景：为何要“追杀”耳念珠菌？
在重症监护室（ICU）和免疫缺陷患者的噩梦里，耳念珠菌（Candida auris）绝对是一个高频出现的“反派角色”。这种2009年才被首次发现的酵母菌，如今已成为全球公共卫生领域的“顽敌”。它不仅能引起血流感染等侵袭性疾病，导致高达30%–72%的死亡率，更棘手的是它“打不死”的特性：对多种抗真菌药物（如氟康唑）天然耐药，且能在医院环境表面存活数周甚至数月，极易引发院内暴发流行。
传统的生化鉴定方法（如VITEK 2）常常会把它误认成其他念珠菌，而更精准的MALDI-TOF MS（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）或qPCR（实时荧光定量PCR）虽然准确，但对设备要求高、耗时长或成本昂贵，难以在基层或资源有限地区普及。因此，开发一种快速、准确且“接地气”的筛查工具，成为了阻断耳念珠菌传播的关键。
技术路线概览
为了攻克上述难题，研究团队（依托韩国高丽大学九老医院）建立了一套多重环介导等温扩增（multiplex LAMP）检测体系。该研究回顾性分析了129份临床样本（含血液、尿液、耳拭子），通过设计针对ITS区域（Candida Pan）和28S rRNA基因（C. auris特异性）的双靶点引物探针系统，在64℃恒温条件下进行40分钟反应，并与常规qPCR进行了头对头比较。
研究结果深度解读
1. 优化与设计：如何“一箭双雕”识别病原体
结论：成功建立了可在单管反应中同时检测“念珠菌属”和“耳念珠菌种”的LAMP方法。
研究人员没有采用复杂的温度循环，而是将反应体系锁定在64℃。他们设计了特殊的引物组合：一组靶向念珠菌属保守的ITS1–5.8S–ITS2区域（Pan靶点），另一组特异性靶向耳念珠菌的28S rRNA基因。通过优化 primer 比例为 1:1，该体系实现了精准的物种判别：C. albicans（白念珠菌）仅激活Pan通道，而C. auris则同时激活Pan和auris两个通道，从而在荧光信号上直接完成“属+种”的鉴定。
2. 灵敏度比拼：LAMP vs. qPCR
结论：针对耳念珠菌，LAMP的检测灵敏度（102–103 cells/mL）显著优于qPCR（10?–10? cells/mL），提升达1–2个数量级。
在模拟临床样本（人工添加菌液的血液、拭子、尿液）测试中，C. auris特异性LAMP探针表现出了惊人的“嗅觉”，最低能捕捉到每毫升几百个细胞的微量存在。相比之下，传统的qPCR方法在低浓度区间显得力不从心。虽然针对广谱的Candida Pan检测，qPCR（10? cells/mL）略优于Pan LAMP（10? cells/mL），但在核心目标——抓出耳念珠菌这件事上，LAMP完胜。
3. 临床实战：准确率与特异性验证
结论：临床灵敏度97.14%，对耳念珠菌阳性样本检出率100%，且与常见细菌无交叉反应。
面对真实的医院样本（35份念珠菌阳性标本），Pan LAMP成功揪出了34份（97.14%），而Pan qPCR只找到32份（91.14%）。更关键的是，在9份耳念珠菌阳性标本中，LAMP全部检出（9/9，100%），而qPCR漏检了3份（6/9，66.7%）。此外，94份阴性对照和所有测试的细菌分离株（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）结果均为阴性，证明了该方法极高的特异性，不会因“草木皆兵”而产生假阳性。
结论与意义
这项发表于《PLOS One》的研究证实，Candida Pan/auris LAMP assay 并非只是一个实验室里的“花架子”。它具备三大颠覆性优势：
- 1.
极速响应：40分钟出结果，远快于传统培养或复杂PCR，利于医院快速启动隔离措施。
- 2.
设备亲民：仅需简单的恒温设备，无需昂贵的热循环仪，极大降低了基层医院的准入门槛。
- 3.
性能强悍：灵敏度甚至反超金标准qPCR，且能耐受临床样本中常见的抑制物。
对于正在遭受耳念珠菌侵袭性感染威胁或需要进行主动监测（active surveillance）的医疗机构而言，这项技术提供了一把锋利且易得的“手术刀”，有望成为遏制超级真菌传播的新利器。
