通过 qPCR 方法量化黑莓和树莓温室及防雨棚中空气中的灰葡萄孢（Botrytis cinerea）分生孢子，并检测其在花朵和果实中的潜在存在

《Journal of Plant Diseases and Protection》：Quantification of Botrytis cinerea airborne conidia in blackberry and raspberry greenhouses and rain covers by qPCR and its latent presence in flowers and fruits

　　摘要：黑莓和树莓种植的迅速扩张受到了Botrytis cinerea的挑战，这种真菌病原体会导致灰霉病，造成严重的作物损失，并对种植者构成持续威胁。尽管这两种水果在经济发展中具有重要意义，但目前的监测和管理策略仍然有限。基于日历的杀菌剂使用方法，而非基于风险的方法，促进了化学物质的过度使用，并加速了Botrytis cinerea对杀菌剂的抗性发展。该病原体复杂的疾病周期使得感染风险预测和及时干预变得困难，因此迫切需要精确的监测工具和综合策略，以优化杀菌剂的效果，并结合其他控制措施。本研究评估了温室和雨棚系统下，空气中的Botrytis分生孢子、潜伏感染与环境因素（如温度和湿度）之间的关系。通过使用旋转臂孢子捕捉器结合qPCR的敏感方法，我们监测了空气中的孢子水平，并在两个种植周期内评估了花和果实组织上的潜伏感染情况。研究结果表明，温室环境中的孢子浓度和潜伏感染率低于雨棚系统。然而，树莓温室的孢子水平和潜伏感染率高于黑莓温室。在雨棚系统中，孢子浓度、相对湿度和潜伏感染之间存在强烈的正相关关系，这表明孢子监测在管理Botrytis爆发方面具有预测价值。相比之下，温室环境中的相关性较弱，可能是由于空气流通受限和稳定的微气候限制了孢子的扩散。本研究为真菌流行病学提供了见解，并支持更精准、可持续的浆果作物病害管理策略。

引言：近年来，黑莓（Rubus fruticosus）和树莓（Rubus idaeus）的种植经历了显著增长，这得益于它们的经济价值和营养价值（Bhatt等人，2023年）。由于富含维生素、抗氧化剂和多酚化合物，这些水果已成为超市中的畅销品，符合消费者对营养食品的偏好（Paredes-López等人，2010年）。如今，树莓和黑莓的种植主要在保护性结构下进行，这延长了生产季节，保护果实免受雨水影响，并确保无论天气条件如何都能稳定收获，从而为零售商提供稳定的供应。在比利时和其他几个欧洲国家，浆果生产通常在同一地点进行两个年度周期：一个在春夏季节，另一个从夏末持续到秋季。尽管有这些生产优势，但由于其高度易腐的性质，采后处理带来了重大挑战，需要开发改进的种植和保存策略。Botrytis cinerea是一种普遍存在的真菌病原体，是导致黑莓和树莓灰霉病的主要原因（Tournas和Katsoudas，2005年；Williamson等人，2007年）。这种多食性生物能够感染超过1400种植物物种，导致严重的采前和采后损失，严重影响浆果作物的质量和产量（Elad等人，2016年；Garfinkel，2021年）。在Rubus属植物中，Botrytis cinerea可以感染植物的任何地上部分，但对成熟果实尤其具有破坏性（Kozhar和Peever，2018年；Spada等人，2024年）。这种病原体的经济影响深远，全球每年的损失估计达数十亿美元（Dean等人，2012年；Elad等人，2016年）。灰霉病被认为是黑莓和树莓种植中最重要的病害，平均可能导致10-20%的产量损失，在有利条件下损失甚至可达70%（Isaza等人，2019年；Xu等人，2012年）。Botrytis cinerea的疾病周期复杂，涉及空气中的分生孢子（无性孢子）和越冬的菌核（Braun和Sutton，1987年）。感染可以在植物的不同生长阶段发生，幼叶和花朵常常携带潜伏感染。接近成熟时，受感染的果实会腐烂，与衰老的叶子一起成为二次接种源（Sutton，1990年）。天气条件、作物物候和管理措施显著影响疾病的发展。鉴于浆果种植的重要性以及Botrytis cinerea带来的持续威胁，有效的监测和管理策略对于可持续生产至关重要。控制措施通常结合了文化措施（如改善通风、冠层管理和选址）和化学干预（Elad等人，2007年；Mundy等人，2022年）。然而，在保护性浆果作物中管理Botrytis cinerea受到对该病原体动态了解不足的阻碍，常常导致杀菌剂过度使用和抗性的产生（Moorman和Lease，1992年；Leroux，2007年）。种植者通常依赖传统的施药计划，缺乏减少用药量或引入生物替代品的实证依据，这可能会影响果实质量。这种过度依赖还受到杀菌剂覆盖不足和抗性出现的问题，一些Botrytis cinerea菌株能够存活于通常能抑制其生长的处理中，可能是由于之前的杀菌剂暴露或固有的抗性。解决这些问题需要采取综合方法，强调对感染模式的深入理解，并制定基于风险的、科学合理的方案，以优化杀菌剂的使用并增强灰霉病的控制。有效的综合灰霉病管理需要全面了解Botrytis cinerea分生孢子的来源、数量和动态。一个关键组成部分是理解空气中孢子的时间和分布模式，它们是疾病爆发的主要贡献者，也是大气颗粒物的重要组成部分。在不同作物地点监测空气中的孢子可以为流行病预测提供重要数据，使种植者能够预测疾病爆发并实施及时、有针对性的干预措施。这种方法为旨在减少疾病对作物产量影响的高效和有效管理策略奠定了基础。然而，由于真菌的多样性以及难以区分不同种类，准确识别空气中的真菌仍然是一个挑战（Pyrri等人，2024年）。传统方法通常依赖显微镜，耗时较长，且可能只能识别到属水平，这对于有效的疾病管理来说是不够的。分子定量技术的进步，特别是定量PCR（qPCR），彻底改变了真菌病原体的监测。与传统方法不同，qPCR可以快速准确地识别真菌孢子的种类水平，提供了对农业环境中病原体存在的更精确理解（Carisse等人，2014年；Yuan等人，2024年）。这些分子方法可以检测低量的DNA，并在整个样本中量化真菌或细菌，对研究人员和种植者都非常有用（Luo等人，2007年；Duvivier等人，2010年）。本研究的主要目的是通过qPCR测量空气中的Botrytis cinerea孢子，并通过在不同的黑莓和树莓种植系统（包括温室环境和雨棚田）上培养花朵和果实来评估潜伏感染情况。先前的研究表明，环境条件在Botrytis cinerea感染的流行中起着关键作用（Smith，1998年；Kozhar和Peever，2018年）。通过分析孢子浓度、潜伏感染、温度和相对湿度之间的关系，我们旨在了解环境因素如何影响Botrytis cinerea的动态，并评估孢子浓度是否可以单独作为可靠的感染风险指标，从而改进疾病监测和预警系统。这些知识有助于有针对性的干预，减少对合成杀菌剂的依赖，并促进生物或替代解决方案的使用。

材料与方法：
**植物材料**
种植系统包括在温室条件下（2021年和2022年）以及带有雨棚的户外田地（2021年）种植的黑莓和树莓植物。每个种植周期开始时都会建立植物。对于所有第一周期的试验，包括2021年的温室和雨棚实验以及2022年的温室黑莓种植，种植发生在3月。对于第二周期的树莓温室试验（2021年和2022年），种植发生在8月。温室位于比利时Sint-Truiden的Proefcentrum voor de Fruitteelt（pcfruit）研究设施内，那里维持着受控的环境条件，如温度和相对湿度。雨棚试验在比利时Borgloon地区的商业树莓和黑莓农场进行。这些雨棚由大型农业遮蔽物组成，具有耐用的塑料屋顶和木制支柱，提供雨水保护，同时允许自然空气流通。在温室和雨棚中，树莓植物种植在20升的盆中，间距为0.5米，每个盆中种植两株长茎树莓。黑莓植物也种植在20升的盆中，间距为0.4米，每个盆中种植一株。两种作物的行间距约为2米。植物按照标准商业做法进行了杀菌剂处理。研究的品种包括黑莓的‘Loch Ness’和树莓的‘Kwanza’。使用数据记录器在所有种植系统中记录了每小时的温度和相对湿度数据。具体来说，温室使用的是PRIVA记录器（Priva B.V.，De Lier，荷兰），雨棚下使用的是CRODEON记录器（Crodeon Technologies BV，Ghent，比利时）。

**孢子捕捉器**
在不同种植系统中收集空气中的孢子使用了Chandelier等人（2014年）设计的两种旋转臂孢子捕捉器，每种水果类型和年份各使用一个。图1提供了旋转臂的图片。旋转臂采样器放置在植物总高度的中等位置，大约在行高的中间，以确保在作物冠层内代表性采集孢子。这种放置方式可以捕捉来自植物下部和下部的孢子，同时与主要感染部位（如花朵和果实）对齐，最小化地面杂物的干扰。每个设备配备了一个12伏的电动机，以50公里/小时的速度循环运行，驱动一个4厘米半径的臂，该臂上装有两个可更换的丙烯酸采样棒。采样棒覆盖有60平方毫米（30×2毫米）的双面胶带（Tesa?，汉堡，德国），用于孢子收集。为了防止样本之间的交叉污染，从每个孢子捕捉器收集的两个采样棒立即放入2毫升的试管中，并储存在-20°C的冷冻柜中直到DNA提取，两个棒一起提取。每周使用两种旋转臂孢子捕捉器对每种种植系统和水果类型收集三次空气中的孢子（周一、周三和周五）。数据分析时，孢子量化值被平均到每两周的周期内，每个周期代表六天的采样。因此，每个两周的数据点代表了12对采样棒的平均值。采样在整个作物生长周期内持续进行（从早期开花到收获，大约从BBCH 60开始）。

**DNA提取和qPCR分析**
使用NucleoSpin? Soil试剂盒（Macherey-Nagel）按照用户手册进行DNA提取，稍作调整。使用Buffer SL2进行裂解，并用Precellys?24组织匀浆器（模式5）代替步骤三中的涡旋混合以改善匀浆效果。DNA用50微升的洗脱缓冲液洗脱，然后进行1分钟的离心，而不是协议中规定的30秒。在评估了文献中的各种引物（Suarez等人2005年；Rigotti等人2006年；Sikdar等人2013年；Malarczyk等人2020年）后，选择了Malarczyk等人（2020年）的引物和探针，因为它们在我们从pcfruit的植物病理学部门收集的真菌样本上进行测试时表现出高特异性，没有出现非特异性扩增现象。该引物和探针组合包括正向引物5’-AGACCGATAGCGmACAAG-3’、反向引物5’-CTTGGTCCGTGTTTCAAG-3’以及水解探针5’-6FAM-TCAGGGTCTCGTACCCTGTGTACTT-BHQ1-3’。qPCR实验在96孔白色板中进行，每个孔含有20微升的Master Mix。Mix由12.5微升Maxima Probe/ROX qPCR Master Mix（Thermo Fisher）、5微升无RNase和DNase的水（Omega Bio-Tek Inc.）、每种引物各1微升（正向和反向，0.4微摩尔）以及0.5微升探针（0.2微摩尔）组成。每个样本加入5微升DNA。qPCR使用Qiaquant 96（Qiagen）系统进行，具体步骤为：首先在95°C下变性5分钟，然后进行40个循环，每个循环包括95°C的DNA变性阶段和60°C的引物退火和延伸阶段。每次qPCR实验还包括两个无模板对照和一条标准曲线，所有实验中使用相同的DNA样本以确保量化的准确性。

为了定量未知样本中的孢子含量，我们使用已知浓度的孢子溶液生成了一条标准曲线。孢子来自Bruno Cammue教授提供的B. cinerea B05-10菌株，该菌株在含有链霉素的土豆葡萄糖琼脂（PDA，Eur. Pharm., VWR Chemicals, Avantor）上培养。准备了3倍稀释系列，浓度范围从98,415到5个孢子。每个标准样品包含两个棒状物，模拟未知样本，并加入计算出的孢子数量后让其干燥。所有标准样品都重复制备两次。为了防止污染，孢子的添加和标准样品的制备都在PCR柜内进行。DNA提取方法如前所述，从标准曲线中提取的DNA被纳入每个qPCR实验中以进行绝对定量。结果随后表示为每立方米空气中的孢子数量。

为了研究Botrytis的定殖动态，从开花期开始直到收获期间，从黑莓和树莓植株上收集了20个每周的样本，包括花朵、未成熟果实或成熟果实（根据植物的发育阶段）。花朵样本在开花初期（BBCH 60–61）采集，未成熟果实样本在果实发育期间（BBCH 71–75）采集，成熟果实样本在成熟阶段（BBCH 81–85）采集。样本通过依次浸入70%乙醇（由99%乙醇配制；VWR Chemicals, TechniSolv?, 85823.440, Avantor, Radnor, PA, USA）1分钟、10%漂白剂（La Croix, Colgate-Palmolive Company, Colombes, France）10秒和蒸馏水1分钟进行消毒。之后，将花朵或果实纵向切开，切面朝下放置在土豆葡萄糖琼脂（PDA）板上，每个板上放置两个切开的果实。这种消毒过程旨在消除表面污染物。大约一周后，通过观察菌落颜色、分生孢子梗形态和分生孢子外观来评估Botrytis的潜伏感染。当菌落身份不确定时，会收集孢子进行显微镜检查以确认其形态。如果板上出现除B. cinerea以外的真菌，也会记录它们的存在。这些样本是在放置旋转臂孢子捕捉器的相同位置采集的。图1的右侧展示了一个包含两个切开未成熟黑莓果实的PDA板示例，以便于评估潜伏的Botrytis感染。

数据分析旨在评估空气中的孢子浓度、潜伏感染与环境条件之间的关系。孢子定量结果是在两周的时间内平均得出的，代表六个采样日（12个棒状物对重复实验）及其相关的平均值标准误差。潜伏感染数据表示为每周潜伏感染样本的百分比，基于分析的20个花朵或果实。进行了相关性分析，以评估孢子定量、潜伏Botrytis感染、温度和相对湿度之间的关联。由于数据分布非正态，采用了Spearman等级相关性来更稳健和准确地反映这些关联。所有统计分析，包括数据标准化和相关性分析，都是使用JMP Pro 17.0.0统计软件（SAS Institute Inc., Cary, NC, USA）进行的。数据的图形表示使用DataGraph v5.4（MacOS, Chapel Hill, NC, USA）和SigmaPlot 13.0（Systat Software, San Jose, CA, USA）制作，以展示采样期间的趋势和关系。

通过3倍系列稀释B. cinerea分生孢子（每个棒状物上添加了5到98415个孢子）生成的标准曲线呈线性，效率为86%，回归系数为0.99。图2展示了用于绝对定量生成的标准曲线，相应的回归方程用于计算分析样本中的孢子数量。

2021年，在受控温室和雨覆盖的露天条件下，对黑莓和树莓种植区进行了Botrytis cinerea空气孢子的定量。对于黑莓的两种栽培系统（温室和雨覆盖），我们遵循了从2021年4月到8月的第一个栽培期（图3A, B）。温室中的孢子浓度始终较低，不超过100个孢子/立方米。相比之下，雨覆盖下的孢子浓度高达6165个孢子/立方米。换句话说，两种栽培系统之间的总孢子数量有显著差异（图3A, B）。此外，在研究期间温室中没有观察到明显的孢子趋势或模式。然而，在雨覆盖下，孢子定量显示出明显模式：春季初期孢子数量较低，随着夏季的到来显著增加，并持续上升到成熟和收获期结束。这种增加与温度和相对湿度的上升相吻合。相对湿度在几个月内逐渐增加，夏季的温度明显高于春季。

2021年，对黑莓和树莓作物在温室和雨覆盖系统下生长的情况进行了双周平均分析，包括Botrytis cinerea空气孢子浓度（孢子/立方米，对数刻度）、花朵和果实中的潜伏Botrytis感染百分比、平均温度（°C）和平均相对湿度。孢子浓度的误差条表示平均值的标准误差（SEM）。(A) 2021年黑莓温室，(B) 2021年黑莓雨覆盖，(C) 2021年树莓温室，(D) 2021年树莓雨覆盖。对于树莓栽培，2021年的第一个栽培期在雨覆盖下进行监测，而第二个栽培期在温室中进行（图3C, D）。值得注意的是，树莓温室中的孢子浓度略高于黑莓温室。与黑莓温室类似，树莓温室中也未观察到明显的孢子趋势。相反，在雨覆盖下，孢子浓度趋势与黑莓栽培相似，从植物建立初期开始较低，逐渐增加直到栽培期结束。树莓雨覆盖下的绝对孢子值显著高于黑莓雨覆盖下的值，峰值达到15,287个孢子/立方米。

除了定量空气中的分生孢子外，我们还在2021年和2022年整个栽培系统的宿主植物物候发育过程中，对花朵和果实组织中的潜伏B. cinerea感染进行了评估。这些数据在图3和图4的图表中进行了可视化。这项评估是为了阐明栽培期间的潜伏感染进展。雨覆盖黑莓和树莓中的潜伏B. cinerea感染随时间增加，与空气中的孢子浓度、环境温度和相对湿度同步增加（图3B, C）。温室在所有地点和年份中始终显示出较低的潜伏感染水平，没有明显的时间趋势。值得注意的是，树莓温室的潜伏感染水平相对较高（图3A和C以及图4A）。此外，虽然图表中未显示，但2022年树莓温室样本中还含有大量的Cladosporium spp.和Penicillium spp.，以及少量的Mucor spp.。2022年黑莓温室样本中也显示了少量的Penicillium spp.和Cladosporium spp.的定殖。

为了验证温室环境中观察到的低孢子浓度，2022年使用新建立的植株重复了实验。对于黑莓作物，监测了第一个年度的栽培（图4A），而对于树莓，则评估了第二个周期（图4B）。与之前的发现一致，总体孢子水平保持在较低的数量级，峰值不超过150个分生孢子/立方米，并且低于2021年观察到的水平。此外，在整个植物发育阶段都没有观察到明显的孢子浓度时间趋势。

除了定量空气中的分生孢子外，我们还在2021年和2022年整个栽培系统中，对花朵和果实组织中的潜伏B. cinerea感染进行了评估。这些数据在图3和图4的图表中进行了可视化。这项评估是为了阐明栽培期间的潜伏感染进展。雨覆盖黑莓和树莓中的潜伏B. cinerea感染显示出相似的时间模式，随着时间推移与空气中的孢子浓度、环境温度和相对湿度同步增加（图3B, C）。温室在所有地点和年份中始终显示出较低的潜伏感染水平，没有明显的时间趋势。值得注意的是，树莓温室的潜伏感染水平相对较高（图3A和C以及图4A）。此外，尽管图表中未显示，2022年树莓温室样本中还含有大量的Cladosporium spp.和Penicillium spp.，以及偶尔的Mucor spp.。2022年黑莓温室样本中也显示出少量的Penicillium spp.和Cladosporium spp.的定殖。

进行了全面的成对相关性分析，以检查Botrytis孢子水平、潜伏感染与各种栽培系统和年份中测量的温度和相对湿度之间的关系。完整的关联矩阵详细列出了所有成对比较，见表1。对这些数据的分析显示，2021年在雨覆盖下生长的作物之间存在显著的相关性。具体来说，对于这两种作物，空气中的Botrytis孢子浓度与潜伏感染花朵/果实的百分比之间存在强正相关（黑莓r=0.7463，p=0.0053；树莓r=0.8975，p=0.0010）。此外，在这些条件下，相对湿度与孢子浓度也有中等程度的正相关（黑莓r=0.4076，p=0.0045；树莓r=0.3759，p=0.0260）。相比之下，2021年和2022年在温室中生长的作物没有发现显著的相关性。值得注意的是，温度在任何情况下都与Botrytis孢子浓度没有显著相关性。

在欧洲，树莓和黑莓主要在雨覆盖下种植，以保护它们免受不利天气条件的影响，并通过提供受控环境来提高果实质量，而温室仅因成本较高和能耗较大而偶尔使用（Ali 2012；Linnemannst?ns 2020）。为了预防如B. cinerea这样的真菌病害，种植者通常在整个季节持续使用化学杀菌剂，这会产生显著的经济成本并带来环境问题。为了提高对B. cinerea的风险评估并改进Rubus作物的预警系统，我们开发了一种经济实惠、灵敏且高效的空气分生孢子检测方法，能够分析不同栽培系统中的多个样本。通过使用旋转臂采样器和新型qPCR检测方法，我们实现了5个子囊孢子的检测限，与之前的研究结果相当（Carisse等人2014年；Chandelier等人2014年；Billones-Baaijens等人2018年；Torfs等人2019年）。我们还评估了花朵和果实中的潜伏感染，以确认B. cinerea的存在。结果表明，无论是黑莓还是树莓作物，温室中的B. cinerea感染都比在雨覆盖下更好地得到了控制。B. cinerea的分生孢子主要通过空气传播，其释放受温度、湿度、雨水飞溅和空气流动等因素的影响（Thomas等人1988年；Williamson等人2007年）。在适宜的条件下，大量的分生孢子会在病斑、枯萎组织和植物残渣上产生，并通过气流和水花传播。温室通常能够更好地控制温度和湿度。我们的研究结果确实显示，温室内的温度和相对湿度波动比在雨棚系统中要小。在2022年的第二个生长周期中，覆盆子温室作物中的平均相对湿度较高；然而，这种环境中有限的空气流动可能降低了空气中的孢子浓度，从而解释了为什么在温室条件下观察到较少的分生孢子和潜伏感染。比较黑莓和覆盆子温室中的孢子浓度时，覆盆子温室中的孢子水平更高，这与较高的潜伏感染率相对应。黑莓作物在一年中的前半段被监测，而覆盆子作物则在同一温室中种植过其他覆盆子植物后的后半段被研究。尽管在两个生长周期之间会进行常规清洁和消毒，但前一周期残留的孢子可能是导致后半段覆盆子作物中孢子浓度较高的原因。相比之下，在第一个生长周期中，雨棚下的孢子浓度在覆盆子田地中也高于黑莓田地。这种差异可能受到植物形态、微环境条件或前茬作物残留接种体的影响。需要进一步的研究来确定这些因素是否是导致孢子浓度较高的原因，或者是否存在其他机制在起作用。然而，尽管覆盆子田地中的孢子水平较高，但在雨棚条件下，黑莓和覆盆子作物的潜伏感染率相似。两种作物在种植期结束时都显示出非常高的感染率，这似乎表明达到一定水平的分生孢子压力就足以引发潜伏感染。

关于潜伏感染的评估，检测到高比例的潜伏感染并不一定意味着所有感染都会发展成显性病害。这种方法将果实置于适合真菌生长的最佳环境中，从而创造了有利于症状发展的理想条件。这种方法可以提供关于果实内潜伏孢子负荷及其在适宜条件下引发感染潜力的有价值估计。我们关于雨棚下B. cinerea潜伏感染随时间增加的研究结果与Xu等人（2012年）的研究一致，他们也报告了覆盖隧道和未覆盖的覆盆子田地中花部感染随时间的增加。虽然未覆盖的田地感染率较高，但差异并不总是显著，这表明仅靠覆盖物并不能完全防止B. cinerea的侵袭。我们的研究同样观察到，雨棚下的覆盆子和黑莓仍然有相当高的潜伏感染率，这可能归因于覆盖物下的持续湿度。另一方面，与雨棚相比，温室中的潜伏感染率较低，尽管覆盆子温室中仍观察到Cladosporium spp.和Penicillium spp.的明显感染和定殖。尽管空气中的分生孢子减少，但感染率仍然高于基于孢子量化的预期（两者之间没有相关性），这表明温室中的稳定环境条件可能限制了湿度波动，但仍允许病害持续存在。这可能是由于微气候因素或前茬作物残留的接种体所致。我们的研究揭示了雨棚栽培系统中空气中的Botrytis孢子浓度、相对湿度和潜伏感染之间的显著相关性。我们观察到湿度与孢子浓度的相关性比温度更强，这进一步强调了水分在Botrytis感染动态中的关键作用，因为它促进了孢子的存活和传播。这些结果与Carisse等人（2018年）的研究一致，他们发现开放田地中的覆盆子中，空气中的孢子浓度与湿度相关因素结合时与病害严重程度的相关性最高。值得注意的是，雨棚下孢子与潜伏感染之间的相关性突显了孢子监测在这些系统中预测病害爆发的潜力。这些信息对于开发优化杀菌剂施用和病害管理策略的预测模型非常有用。相比之下，温室中观察到的较弱相关性表明，在这些环境中需要考虑其他因素来提高病害预测的准确性。尽管在高温和高相对湿度的时期，分生孢子浓度或潜伏感染的增加较少，这可能是由于空气流动受限，限制了孢子的传播和植物感染。因此，我们的方法和结果预计在雨棚系统中比在温室中更适用于病害评估。

我们认识到，这里呈现的发现反映了本研究的具体品种、采样时间和环境条件，时间和方法上的限制可能影响了极低水平或短期感染事件的检测。尽管如此，所提出的框架为解释保护性Rubus作物中的空气传播接种体动态和潜伏感染模式提供了一个有用的模型。总体而言，我们的研究更好地描述了不同栽培系统中的真菌流行病学特征。通过阐明环境因素如何影响Botrytis分生孢子的动态和感染模式，我们为制定更有针对性的病害管理方法做出了贡献。未来的研究应通过纳入更多的环境和生物变量来完善预测模型，特别是在病害动态更为复杂的控制环境中。