手足口病和疱疹性咽峡炎中的肠道病毒检测：一种高灵敏度的单循环VP4–VP2逆转录聚合酶链反应检测方法，采用重新设计的反向引物 藤本刚人（Tsuguto Fujimoto）、 荻美纪（Miki Ogi）、 北川和弘（Kazuhiro Kitakawa）、 佐野孝子（Takako Sano）、 西村洋弘（Yorihiro Nishimura）、 北村公一（Kouichi Kitamura）、 菊地南（Minami Kikuchi Ueno）以及 有田峰太郎（Minetaro Arita）

《Viruses》：Enterovirus Testing in Hand, Foot, and Mouth Disease and Herpangina: A Highly Sensitive Single-Round VP4–VP2 Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction Assay with a Redesigned Reverse Primer Tsuguto Fujimoto, Miki Ogi, Kazuhiro Kitakawa, Takako Sano, Yorihiro Nishimura, Kouichi Kitamura, Minami Kikuchi Ueno and Minetaro Arita

　　

摘要

肠道病毒（EVs）的分子分型对于监测手足口病（HFMD）至关重要。传统的针对VP4–VP2区域的逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法灵敏度可能不足，从而降低了对A型肠道病毒（EV-A）的检测能力。我们开发了一种基于改良反向引物设计（C3R）的单轮RT-PCR检测方法，以实现快速检测和基因分型。通过使用EV-A71和1型脊髓灰质炎病毒参考株，在60份EV阳性的临床样本中评估了该方法的灵敏度。结果表明，C3R方法的灵敏度比传统方法高约1000倍（检测限：6.6个拷贝/反应）。在单轮检测中，C3R方法能够检测出98.3%（59/60）的临床样本，而传统方法仅能检测出45.0%（27/60），且在Ct值较高时检测能力显著下降。对于Ct值低于40的临床样本，C3R方法仍能保持完全的检测能力。大多数扩增产物能够产生适合基因分型的高质量序列。这种基于C3R的RT-PCR方法克服了现有协议的灵敏度限制，能够从低病毒载量的样本中可靠地进行基因分型，因此适用于常规诊断和大规模的手足口病监测。