《Viruses》：Methodological Approaches to Dengue Virus Detection in Wastewater: A Systematic Review and Meta-Analysis of Positivity Rate
Siti Aishah Rashid,
Sakshaleni Rajendiran,
Nurul Farehah Shahrir,
Nurul Athirah Naserrudin,
Terence Tan Yew Chin,
Janice Chan Sue Wen,
Imanul Hassan Abdul Shukor and
Nurul Amalina Khairul Hasni
登革热具有高比例的无症状感染，构成了重大的全球公共卫生挑战，传统监测系统常低估其流行情况。基于废水的流行病学监测已成为监测非肠道病毒引发的传染病的有效补充工具。登革热病毒通过尿液、粪便和唾液排出，这为在临床监测之外进行废水检测提供了生物学依据。本系统评价与荟萃分析综合了当前关于废水中登革热病毒（DENV）检测的证据，并评估了影响废水流行病学监测中检测成功率的方法学因素。通过使用选定数据库和预定关键词进行系统性文献检索，并进行资格筛选，最终纳入了十项研究，涵盖社区监测和试验性试验。登革热病毒RNA在废水固体中最常被检测到且富集度最高，表明该基质是最可靠的监测材料。在浓缩方法中，超滤实现了最高的病毒回收效率，而与逆转录定量聚合酶链式反应相比，逆转录数字聚合酶链式反应（RT-dPCR）表现出更优异的灵敏度和精度，尤其在低病毒浓度下。在-80°C下储存对于保持RNA完整性至关重要。在排除异常值后，荟萃分析得出登革热病毒的合并阳性率为24%（95% CI：20–28%）。总体而言，在纳入的研究中，固相分析结合RT-dPCR代表了最灵敏的方法学途径。需要协调统一的操作规程，以支持未来将登革热病毒废水监测转化为社区监测，因为现有证据主要证明了其方法学上的可行性，并为未来的公共卫生整合提供了技术基础。因此，需要进一步的纵向和多点验证，以确立其在登革热监测中更广泛的适用性。
1. 引言
登革热病毒（DENV）因其地理范围的扩大和发病率的上升，构成了不断升级的全球公共卫生威胁。该病毒现已在超过100个国家成为地方性疾病，据估计每年导致3.9亿例感染，其中大部分为无症状感染。流行病学数据估计，50-80%的登革热感染为无症状或亚临床感染，其症状缺失或表现为轻微、非特异性症状，常因漏诊或就医行为不足而逃避临床检测。有症状和无症状个体均能传播登革热病毒，但无症状感染因常规临床报告系统检测有限，使监测工作复杂化。鉴于登革热可通过无症状个体无声传播，而传统监测主要依赖临床报告病例，登革热病毒感染的真正流行率常被低估，使得早期发现疫情更具挑战性。
针对这些局限性，基于废水的流行病学（WBE）已成为一种潜在、无创的补充工具，用于人群水平的疾病监测。WBE已被证明在追踪肠道和呼吸道病原体（包括脊髓灰质炎病毒和严重急性呼吸综合征冠状病毒2型）方面是有效的。这种方法依赖于检测有症状和无症状携带者排入废水的RNA，提供补充临床病例报告的数据。先前研究已证明，登革热病毒可在有症状和无症状个体的尿液、粪便等体液中检测到，这支持了其在废水监测中的可行性。废水信号与其他虫媒病毒（如寨卡病毒和日本脑炎病毒）的临床病例趋势之间的相关性，进一步凸显了其作为补充监测方法的潜力。
已有几篇关于虫媒病毒WBE的综述提供了有价值的见解，但针对登革热WBE应用的系统性综合研究仍然有限。一项研究评估了影响可行性的关键因素，包括病毒脱落、持久性和回收效率，而另一项研究强调了检测黄热病病毒及相关虫媒病毒的方法学挑战与进展。相比之下，一篇近期文章提醒，将WBE应用于登革热和疟疾等媒介传播疾病时，需要仔细考虑病原体生物学、地理环境和污水基础设施。尽管具有潜力，但登革热病毒WBE的相对重要性仍未得到充分研究。主要瓶颈是废水中登革热病毒的显著稀释，这需要稳健而智能的浓缩方法来获得可靠信号。检测率的变化，加上缺乏标准化和优化的操作流程，使解释工作进一步复杂化。因此，目前对于最有效的方法学途径尚无共识。
目前，尚未有系统评价汇总废水中登革热病毒检测的方法学因素，或量化不同环境下的合并检测成功率。因此，本研究旨在检视登革热病毒WBE相关的方法学和关键发现，同时指出关键的知识缺口。本综述重点关注描述当前方法学的变异性，测量废水中的登革热病毒阳性率以评估方法学可行性，并概述其对未来公共卫生应用的影响。
2. 材料与方法
本综述根据系统评价和荟萃分析优先报告条目声明进行和报告。本综述已在国际前瞻性系统评价登记册中注册，可在线访问协议。
2.1. 研究问题的确定
指导本综述的研究问题包括：
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登革热病毒WBE研究报告了哪些方法学和关键发现？
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根据现有研究，废水中检测到的登革热病毒流行率或浓度是多少？
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当前登革热病毒WBE研究中存在哪些关键知识空白？
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登革热病毒WBE如何应用于支持或指导公共卫生行动？
2.2. 识别相关研究
两名独立评审员按照预定的资格标准，在PubMed、Scopus、Web of Science和Embase数据库进行了系统性检索。检索策略包括结合医学主题词和与“登革热”及“废水流行病学监测”相关的自由词。使用布尔运算符组合关键词并细化检索结果。此外，还进行了人工筛查参考文献的手工检索。纳入研究的时间范围从各数据库建立之初至2025年10月。所有检索结果的筛选和报告均遵循PRISMA指南。检索策略的完整细节可获取。
2.3. 研究选择与资格标准
本综述纳入了经过同行评审的描述性、实验性、纵向、时间序列或横断面设计的研究，这些研究调查了废水中登革热病毒RNA的存在。仅考虑以英文发表且可获取全文的文章。使用PICO框架定义了资格标准。
2.3.1. 纳入标准
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人群：从服务于社区集水区的污水处理厂收集的废水或污水样本，包括有排污管网区域的居民区和机构场所。
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干预措施：WBE，包括采样方法的差异、检测方法和血清型分析。
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对照：方法学途径的差异；无论是否报告对照组的均纳入研究。
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结局：病毒载量测量值，以及不同背景下评估的结果，包括采样方法、检测方法和地理区域。此外，报告血清型分析、阳性率、流行病学趋势以及登革热病毒分子特征的研究也被纳入。
2.3.2. 排除标准
排除的文献包括：
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综述、新闻报道、评论、社论、预印本、会议摘要、病例报告、技术报告、书籍或书籍章节
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非英文出版物
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涉及动物、细胞或组织的体内或体外实验研究。
2.3.3. 筛选
两名评审员基于预定的PICO标准，对剩余文章的标题和摘要进行初步独立筛选。随后，使用预定的纳入和排除标准独立评估全文文章的资格。使用一致性百分比评估评审者间一致性，在标题/摘要筛选和全文筛选阶段均表现出高度一致性。全文筛选阶段排除的原因经过讨论并记录。研究选择过程通过PRISMA流程图进行记录，如图所示。
2.4. 数据提取
使用标准化表格进行广泛的数据提取，以系统收集每项研究的信息。这包括：
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研究特征
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采样方法学
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检测方法
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血清型分析
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病毒载量浓度和阳性率
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检测限/定量限
阳性定义根据每项研究中采集的样本总数进行标准化。若报告，也提取了检测限和定量限。为确保数据的可靠性，由两名独立评审员进行提取，分歧通过讨论或咨询第三位评审员解决。
2.5. 偏倚风险评估（RoB）
使用非随机干预研究偏倚风险评估工具评估纳入研究的质量。该工具评估七个领域的偏倚风险。每个领域被评估为低、中、高或严重偏倚风险。两名独立评审员评估所有领域，任何不一致之处通过第三位评审员协商解决。每项研究的总体偏倚风险使用“最差评分规则”确定，即最终判断反映任何单个领域中识别出的最高水平偏倚。对于RoB评估，使用Microsoft Excel制表记录每项研究的结果，以便跨领域清晰比较。
2.6. 统计分析
使用STATA V18.0进行统计分析。进行了荟萃分析以确定总体阳性率，生成合并比例及相应的95%置信区间。使用I2统计量评估异质性。若I2超过80%，则应用随机效应模型；否则，使用固定效应模型。进行亚组分析以探讨异质性的潜在来源。使用留一法进行敏感性分析。统计学显著性定义为p < 0.05。对于荟萃分析，使用STATA生成的森林图直观显示合并估计值和单个研究结果。
3. 结果
3.1. 纳入研究特征总结
在四个数据库中进行全面检索，确定了97篇与本系统综述目标相关的文章。经过标题和摘要筛选，以及基于资格评估的全文筛选后，最终选出十项研究纳入。图1详细展示了基于PRISMA协议的筛选过程。
尽管考虑的时间线很广，但符合条件的研究数量仍然很少，大部分发表于2020年后，这与冠状病毒病的流行开始时间相对应。表1总结了本综述纳入的研究。纳入研究的地理分布涵盖八个国家。本综述将纳入研究分为两大类：基于人群的监测研究和实验性加标研究。采样地点范围从污水处理厂到检查井，覆盖人口从100人到超过100万人。采用了瞬时采样和混合采样，收集体积从30毫升到1000毫升不等。样本通常在4°C下运输，而病毒RNA和其他材料的长期储存则在-25°C或-80°C下进行，以保持样本完整性用于下游分析。
3.2. 登革热WBE中基于人群和实验方法的概述
纳入的研究中有六项直接调查了基于人群的废水监测，旨在检测登革热病毒RNA并监测登革热疫情，并评估WBE作为加强临床监测的补充工具的潜力。两项研究特别关注了废水固体中登革热病毒RNA的检测，与其他使用原始废水样本的研究形成对比。仅有一项研究将登革热与其他重点病毒一起纳入，以展示基因组监测在人群水平监测中的应用。其余四项研究调查了病毒加标的废水，以表征病毒持久性和衰减，同时优化澄清、浓缩方法和提取方法的技术。这为了解病毒在各种环境条件下的稳定性提供了见解。一项研究直接检测了登革热病毒、寨卡病毒和黄热病病毒在未处理废水中的衰减动力学。近期研究比较了不同的病毒回收方法，以得出优化工作流程的优选技术。另一项研究探讨了几种虫媒病毒（包括登革热病毒）的分配行为，并强调了在低流行率环境下使用固体作为基质的优势。
3.3. 基于人群的登革热WBE研究的检出率结果与方法学评估
多项监测研究报告了废水中登革热病毒RNA的检测，阳性率因地区、疫情强度和方法学因素而异。意大利中部在本地疫情衰退期报告了最高检出率33.3%，其次是巴西在2023年2月至3月间医院污水和市政废水的检出率。葡萄牙在2022年5月至2023年4月期间从11个处理厂收集的样本中，登革热病毒RNA检出率为25%，观察到两个季节性高峰。美国佛罗里达州在2023年6月至9月期间观察到21%的阳性率，与临床发现一致。相反，中国广州的目标人群水平监测显示检出率较低，为2.3%，而尼泊尔报告尽管进行了广泛的废水检测，但未检测到可测量的信号。
WBE中的检测成功率受采样方法、样本类型、浓缩方法和分子检测技术的影响。研究一致表明，与液体部分相比，废水固体提供了更高的病毒富集度，突显了样本类型选择的重要性。采用了多种浓缩方法，包括超滤、磁珠、中空纤维装置和电负性膜过滤，不同研究的回收效率存在差异。例如，在意大利中部，研究人员报告评估了四种浓缩方法，但登革热病毒RNA仅在固体部分中检测到，与实时逆转录聚合酶链式反应相比，RT-dPCR显示出更高的灵敏度。在巴西，电负性膜过滤结合RT-qPCR和杂交捕获测序实现了全基因组登革热病毒1型的鉴定。在葡萄牙，使用中空纤维超滤结合RT-qPCR和测序检测到登革热病毒RNA，但由于测序片段短，无法确定血清型。在美国佛罗里达州的研究中，使用RT-ddPCR成功地在固体部分中检测到登革热病毒RNA。而在中国广州，基于磁珠的浓缩结合RT-qPCR导致检测有限，与当地低传播率一致。相反，尼泊尔的研究采用了电负性膜涡旋浓缩法结合RT-qPCR和RT-dPCR，但未实现检测。除了定量检测，测序被用于提供分子流行病学背景。这些研究共同表明，尽管废水中的登革热病毒检测在不同地区和疫情强度下仍然不一致，但将固体部分分析与先进分子技术（特别是RT-dPCR）相结合的方法，为基于废水的登革热监测提供了更高的灵敏度、特异性和可靠性。
3.4. 通过加标研究检测登革热病毒
四项纳入的研究在澄清、浓缩流程、膜材料、处理体积和分析平台方面显示出广泛的方法学异质性。血清型覆盖范围也不同。在浓缩之前，废水通常经过澄清以去除可能堵塞设备或干扰检测的悬浮固体。Roldan-Hernandez等人的研究确定，通过0.22 μm过滤器过滤优于离心，导致病毒损失显著降低。或者，离心用于分离固体和液体部分以研究病毒分配。这项研究强调，过滤澄清可最大程度减少病毒损失，而高速离心可实现液固分配，揭示固体中病毒富集度显著更高。
至于样本浓缩部分，离心超滤实现了最高的回收率，优于聚乙二醇沉淀和膜捕获。使用硅胶柱试剂盒进行RNA提取显示出稳定的产量。然而，超滤性能在很大程度上因设备配置和膜材料而异，而不仅仅取决于截留分子量。在比较评估中，使用30 kDa再生纤维素膜的超滤装置实现了最高的平均回收率。相比之下，具有相同标称截留分子量但不同膜化学性质和几何形状的替代离心装置产生的回收率较低且变化更大。所有研究都使用了基于PCR的检测方法，其中三项使用RT-qPCR，一项使用RT-ddPCR。这些发现表明，RT-qPCR和RT-ddPCR都能有效检测废水中的加标登革热病毒，而RT-ddPCR在低拷贝数下提供了更优的灵敏度。所有研究都包含了过程和提取对照，以评估回收和提取效率。
3.5. 质量控制与检测阈值
在登革热废水研究中，方法学途径在分析检测限或定量限、质量控制和对未检出结果的处理方面存在差异。不同研究使用不同的指标报告了检测限或定量限值，而定量限很少被指定，有几项研究依赖定性扩增阈值来定义阳性。基于数字PCR的研究应用最小液滴或分区阈值来确保数据质量，液滴低于10,000的孔在基于液滴的平台中被排除，而纳米板系统报告每次反应的有效分区比例高。定义阳性检测的标准也不同，范围从至少三个阳性液滴的最低计数到统计推导的检测限。处理未检出结果的方法各异：一些研究应用插补，使用检测限的一部分或全部值，或将未检出结果替换为检测限，其他研究将未检出结果从定量总结中排除，而几项研究在未检测到病毒RNA时，将结果定性报告为低于检测限。这些变化突显了登革热病毒WBE在数据处理和报告方面缺乏标准化实践。
3.6. 偏倚风险评估
使用ROBINS-I评估七个领域的偏倚风险。与干预措施相关的领域被认为不适用于某些观察性研究设计。三项研究被评估为总体低偏倚风险，而两项研究具有中等风险。四项研究被评为具有严重的总体偏倚风险，主要与混杂偏倚和样本选择偏倚有关。特别是在污水处理厂收集的样本涉及更长的运输距离和时间，这可能导致病毒RNA降解和稀释，从而增加偏倚估计的风险。值得注意的是，一项研究因缺乏控制混杂因素的标准化技术信息，以及样本选择和结果报告选择性方面的严重风险，被判定为具有严重偏倚风险。ROB评估结果如图所示。
RoB评估用于指导结果的解释，并未用于决定研究排除。所有符合条件的研究均保留在综合结果中，以反映有限的证据基础。然而，在解释包括合并估计值在内的结果时，考虑了RoB，并对具有严重或严重偏倚风险的研究发现持谨慎态度。被认为存在潜在混杂或选择偏倚的研究可能对异质性有贡献，并可能使总体估计产生偏差。通过ROBINS-I评估确定的方法学局限性也用于讨论结果间的差异。
3.7. 荟萃分析结果
总共六篇文章被确定与当前荟萃分析的目的相关。异质性很高，I2值为96.18%。随后，使用留一法进行敏感性分析，在省略两项研究后，I2值为0%。被省略的研究因特定环境条件导致样本完整性受损且未达到灵敏度阈值。将这些研究纳入会引入显著的异质性，因为它们的阴性或接近阴性的结果源于方法学局限性，而非病毒的真正缺失或WBE技术在最佳条件下的普遍失败。因此，最终的荟萃分析得出阳性率为24.71%（95% CI: 20.63–28.68%），如图所示。
由于荟萃分析中仅包含4项研究，无法进行漏斗图检测发表偏倚。此外，根据采样点类型和检测方法进行的亚组分析在本研究中不适用。
4. 讨论
4.1. 通过WBE检测登革热病毒概述
鉴于这些感染的高度漏报率，WBE在疾病监测中的应用对虫媒病毒尤其重要。全球疾病负担估计表明，无症状登革热感染在数量上远超有症状病例。此外，实验室确诊病例可能无法完全捕获实时社区传播动态，因为确认和报告过程可能滞后于持续的病毒传播。多地区的研究提供了证据表明，可以在废水中检测到登革热病毒RNA，凸显了其作为补充监测工具的潜力。然而，观察到的阳性率差异显著，反映了疫情强度、采样方法和方法学选择的差异。报告的检测率范围很广。这种变异性强调，虽然WBE为登革热监测提供了潜力，但一致的检测在技术上仍然具有挑战性。
4.2. 检测成功率的方法学决定因素
登革热病毒WBE的性能主要受方法学变异性的影响，例如样本类型、浓缩方法和分子检测方法。登革热病毒是一种有包膜病毒，其稳定性和行为需要使用优化的浓缩和提取技术。与病毒相关的RNA主要包含在完整或部分降解的病毒颗粒和病毒-颗粒复合物中，优先分配到废水固体中，导致从固体部分回收的病毒量高于液相。固体中的富集度通常比液体中高几个数量级。因此，阳性检测通常主要或完全出现在固体部分，而配对的液体样本通常无法检测到信号。这种对固体的优先回收与病毒颗粒和RNA片段吸附到颗粒物上相一致，这一过程导致许多病毒的病毒浓度在废水固体中比在液相中高几个数量级，并提高了WBE的分析灵敏度。各种浓缩方法，包括电负性膜过滤、磁珠捕获和超滤，产生的灵敏度显著不同。基于磁珠和中空纤维超滤方法显示出强大的回收效率和适应大体积的能力，而小体积过滤方法在病毒载量极低或RNA降解严重时，其效率常降低。
4.3. 关键发现
4.3.1. 全球检出率趋势与变异性
研究报告的废水检测异质性突显了登革热信号强度与基础流行病学背景之间的密切关系。在明确的疫情期间，当病毒排入污水系统的量达到峰值时，通常观察到更高的检出率。相反，登革热活动水平较低或刚开始的地区表明，当人群感染水平较低时，废水信号自然会下降。在欧洲观察到的季节性趋势进一步证明，废水信号可以追踪登革热活动的时间变化。总体而言，WBE的有效性受多种相互关联的因素影响，包括病毒脱落动态、环境RNA持久性以及所收集废水样本的代表性，这些因素通常具有地区和疫情特异性。深入了解这些参数在不同环境下的相互作用，对于优化WBE框架和加强早期预警与疫情应对至关重要。
4.3.2. 血清型鉴定与基因组见解
在本综述中明确应用测序的三项研究中，基于废水的测序通过提供遗传验证、谱系解析和更广泛的病原体背景，补充了基于PCR的检测。在广州，全基因组和Sanger测序证实了废水信号与匹配的血清/尿液一致，并解析了流行的登革热病毒1型基因型，揭示了先于临床诊断的隐性传播，并突显了废水中比临床基质中更高的RNA降解。在巴西，杂交捕获全基因组测序分析了污水病毒组，检测到猴痘病毒以及多个病毒科，并证实了RT-qPCR结果，从而支持了在社区和医院层面早期识别新发病原体。在葡萄牙，扩增子测序验证了登革热病毒/基孔肯雅病毒检测，并通过与参考序列的高度同源性提供了非流行环境下的系统发育背景，为潜在的输入途径提供了信息。这些研究表明，测序提高了特异性并支持分子流行病学，但受到RNA降解、测序深度有限和成本的限制。因此，在WBE中解析血清型仍然具有挑战性，特别是当RNA稀缺或片段化时。例如，在葡萄牙检测到登革热病毒RNA，但由于测序读长短，未能确定血清型。当RNA完整性和测序深度足够时，血清型鉴定是可行的。鉴于虫媒病毒相对于肠道病毒的脱落量较低，通常需要处理更大体积的废水才能获得足够的灵敏度。
4.3.3. 临床与媒介监测的整合
大多数纳入研究并未在正式的公共卫生决策框架内运作废水数据。然而，它们提供了重要的方法学见解。这些拟议的整合途径代表了未来的方向，而非现有文献验证的实践。WBE的潜力超越了简单的检测，它提供了对人群水平感染动态的近实时反映，可用于公共卫生行动。当与临床通报和昆虫学指标结合时，废水数据可以贡献于多层监测网络，其中预先确定的废水阈值或特定污水流域病毒RNA的持续增加可以触发先发制人的伊蚊控制强化、有针对性的诊断检测、加强的症状监测和定制化的社区信息传递。废水病毒趋势与媒介指数之间的时间一致性，在与其他监测系统整合时，可能有助于早期预警框架和疫情准备。
目前，支持登革热WBE相对于临床或昆虫学监测具有一致早期预警优势的证据仍然有限。现有研究主要基于概念验证或针对特定疫情的调查，很少有研究证明在不同的流行病学环境下具有可重复的领先时间优势。此外，病毒脱落的低水平和可变性，加上方法学的异质性，可能影响废水信号的灵敏度和时间可靠性。因此，登革热WBE目前更适合作为补充监测方法，而非独立的早期预警系统，有待通过纵向和多点研究进一步验证。
在美国，废水中登革热病毒3型RNA的共检测与临床病例的增加同时发生，表明WBE可能与临床监测同时提供支持性或补充性信号。在葡萄牙也实现了类似的整合，废水检测显示出与临床病例趋势的时间一致性，暗示了潜在的早期信号。当与伊蚊监测结合时，WBE可以为地理靶向干预提供信息，优化媒介控制资源分配，并加强流行区和非流行区的准备框架。
4.3.4. 荟萃分析解释与局限性
目前，废水中登革热病毒检测尚无标准化的“金标准”方法，因此无法跨研究计算标准化的检测概率。“阳性率”是评估在截然不同的方法学途径下监测可行性的唯一共同指标。本分析揭示，“阳性”在很大程度上是所使用的特定基质和采样策略的函数，而不仅仅是疾病流行率。
24%的合并阳性率（95% CI：20–28%）表明，可以通过WBE检测到登革热病毒和其他虫媒病毒，但检测窗口较窄。研究间观察到的异质性并非反映随机变异性，而是揭示了病毒生物学、传播强度和方法学设计之间持续的相互作用。由于登革热病毒在废水中的脱落是稀疏和偶发性的，其浓度大约比严重急性呼吸综合征冠状病毒2型低100倍，其RNA的可检测性很大程度上取决于采样和浓缩流程是否与社区传播高峰期相匹配。在发病率低的地区，瞬时采样、小体积以及为无包膜病毒优化的浓缩技术共同降低了捕获本已微弱信号的可能性。此外，样本量小以及由于纳入荟萃分析的研究数量少而无法创建漏斗图，也加剧了这种情况。
排除长期、低流行率数据集反映了这种方法学-生物学耦合，因为次优条件下的长期储存和低传播水平可能抑制了可检测的信号。总的来说，这些发现表明，提高虫媒病毒WBE的性能将需要监测系统明确考虑有包膜RNA病毒的不稳定性，包括需要更大的样本量、适当的浓缩策略以及与流行病学高峰期相吻合的采样设计。通过将生物学限制与方法学优化相结合，未来的废水监测框架可以更可靠地支持登革热及相关虫媒病毒的改进监测和态势感知。
荟萃分析的稳健性依赖于样本量和发表偏倚。因此，所分析的四项研究的小样本量并未产生大的“研究效应”。此外，由于研究数量少，无法进行Egger回归检验来确定发表偏倚，这可能导致合并效应存在严重偏倚。
4.4. 研究局限性
登革热病毒WBE的主要限制在于废水中病毒载量低，估计大约比严重急性呼吸综合征冠状病毒2型低两个数量级。登革热病毒是包膜单链RNA病毒，使其极易降解，尤其是在热带条件下或长期储存期间。pH值、温度和有机质含量等环境因素进一步加速RNA衰变，导致检测灵敏度降低。对存档废水样本的回顾性检测，特别是对于登革热病毒等有包膜RNA病毒，极易发生信号丢失，并可能导致假阴
