利用LC–HRMS技术检测马血浆中的三种可电离脂质：这些脂质可作为长期监测LNP（脂质纳米颗粒）介导的基因掺假行为的替代指标

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：LC–HRMS detection of three ionizable lipids in equine plasma: surrogate markers for long-term LNP-mediated gene-doping surveillance

　　

摘要

脂质纳米颗粒（LNPs）是基于信使核糖核酸（mRNA）疗法的重要递送载体。然而，它们在赛马和马术运动中可能被滥用作基因增强剂，因此需要密切的 analytical 监控。本研究提出了一种高灵敏度的 Orbitrap 技术驱动的液相色谱-高分辨率质谱（LC–HRMS）方法，用于同时检测三种具有临床意义的可电离脂质：ALC-0315、SM-102 和 DLin-MC3-DMA（MC3），这些脂质是已批准的 RNA 疗法和疫苗的关键成分。通过对马血浆进行改良的 Bligh 和 Dyer 提取后，这些分析物被高灵敏度地检测出来。根据官方赛马化学家协会（Association of Official Racing Chemists）的指导标准，ALC-0315、SM-102 和 MC3 的检测限分别为 0.05、0.01 和 0.05 ng/mL。相比之下，它们的识别限（LOIs）在 0.05 至 0.1 ng/mL 之间。该方法的应用通过一项体内给药研究得到了验证。在这项研究中，一匹马被注射了含有 N1-甲基假尿苷修饰的促红细胞生成素 mRNA 的 LNP。结果表明，SM-102 在给药后 4 天内仍可获得确认，并在血浆中可检测到长达 14 天。据我们所知，这是第一个基于 LC–MS 的策略，能够明确识别作为 LNP 介导的基因增强剂的可电离脂质替代标志物。这种方法提供了目前已知的最长的 LNP 成分检测窗口，显著提升了马药检实验室的诊断能力。

图形摘要

此图像的替代文本可能是由 AI 生成的。

脂质纳米颗粒（LNPs）是基于信使核糖核酸（mRNA）疗法的重要递送载体。然而，它们在赛马和马术运动中可能被滥用作基因增强剂，因此需要密切的 analytical 监控。本研究提出了一种高灵敏度的 Orbitrap 技术驱动的液相色谱-高分辨率质谱（LC–HRMS）方法，用于同时检测三种具有临床意义的可电离脂质：ALC-0315、SM-102 和 DLin-MC3-DMA（MC3），这些脂质是已批准的 RNA 疗法和疫苗的关键成分。通过对马血浆进行改良的 Bligh 和 Dyer 提取后，这些分析物被高灵敏度地检测出来。根据官方赛马化学家协会（Association of Official Racing Chemists）的指导标准，ALC-0315、SM-102 和 MC3 的检测限分别为 0.05、0.01 和 0.05 ng/mL。相比之下，它们的识别限（LOIs）在 0.05 至 0.1 ng/mL 之间。该方法的应用通过一项体内给药研究得到了验证。在这项研究中，一匹马被注射了含有 N1-甲基假尿苷修饰的促红细胞生成素 mRNA 的 LNP。结果表明，SM-102 在给药后 4 天内仍可获得确认，并在血浆中可检测到长达 14 天。据我们所知，这是第一个基于 LC–MS 的策略，能够明确识别作为 LNP 介导的基因增强剂的可电离脂质替代标志物。这种方法提供了目前已知的最长的 LNP 成分检测窗口，显著提升了马药检实验室的诊断能力。

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