三种血清解冻方法的比较评估及其对代谢组完整性和生物标志物发现的影响

《Journal of Analysis and Testing》：Comparative Evaluation of Three Serum Thawing Methods and Their Effects on Metabolome Integrity and Biomarker Discovery

　　

摘要

血清样本在代谢组学研究中被广泛使用，收集后通常储存在-80°C的环境中。因此在样品制备之前解冻冷冻血清是一个不可避免的预分析步骤，这可能会影响代谢组学数据的质量和生物标志物的发现。先前的研究报道了解冻效果存在差异，这主要反映了分析平台、代谢组覆盖范围、定量准确性、样本大小和研究设计等方面的差异。直接评估解冻对生物标志物发现的影响仍然很少见。在这里，我们系统地评估了三种常用的血清解冻方法——室温解冻、4°C解冻和冰浴解冻——对血清代谢组谱和生物标志物发现的影响，使用了高效化学同位素标记（CIL）液相色谱-质谱（LC-MS）技术。我们对95名健康个体（54名男性和41名女性）的血清样本在每种条件下进行了分析。在少数代谢物中观察到三种解冻方法之间存在统计学上显著且可重复的差异，表明解冻条件确实会对代谢物水平产生可测量的影响。然而，与内在的生物变异相比，这些影响较为微小。监督建模和其他统计分析显示，包括性别依赖性的代谢分离在内的生物学上有意义的模式在所有解冻条件下都得到了保持。这些发现表明，虽然解冻方法可能会引入可检测的代谢物水平差异，但在一项研究中一致应用单一解冻方法时，它不会显著影响生物标志物的发现性能。因此，只要保持一致性，实际操作中可以使用这三种解冻方法中的任何一种，选择主要应基于物流考虑。