《Renal Failure》：MEF2A nuclear translocation mediated by ROCK phosphorylation promotes EZH2 expression and peritoneal fibrosis
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长期腹膜透析（Peritoneal Dialysis, PD）常引发腹膜纤维化（Peritoneal Fibrosis, PF）。本研究旨在明确Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil containing protei
长期腹膜透析（Peritoneal Dialysis, PD）常引发腹膜纤维化（Peritoneal Fibrosis, PF）。本研究旨在明确Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil containing protein kinase, ROCK）信号通路及其下游效应分子MEF2A和EZH2在PF中的作用。体内实验中，研究人员对大鼠PD模型给予ROCK抑制剂法舒地尔（fasudil）或腺相关病毒介导的MEF2A敲低处理；体外实验中，高糖刺激的人腹膜间皮细胞（Human Peritoneal Mesothelial Cells, HPMCs）接受MEF2A敲低、EZH2过表达或法舒地尔干预。结果显示，高糖暴露显著上调HPMCs中总MEF2A及其磷酸化形式（p-MEF2A）的表达，并促进其核转位。MEF2A敲低可抑制高糖诱导的EZH2上调及上皮-间充质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT），而EZH2过表达可逆转该保护作用。双荧光素酶报告实验和染色质免疫共沉淀定量PCR（Chromatin Immunoprecipitation Quantitative PCR, ChIP-qPCR）证实，MEF2A结合至EZH2启动子区域并激活其转录。ROCK通路抑制剂法舒地尔可逆转高糖诱导的MEF2A上调，抑制其磷酸化及核转位。体内实验中，MEF2A敲低减轻了长期PD大鼠的PF进展；一致地，口服法舒地尔可抑制透析诱导的MEF2A及EMT标志物上调。上述结果揭示了PF发病中一条新的ROCK/MEF2A/EZH2轴，提示MEF2A可作为潜在治疗靶点。
《Renal Failure》刊发的这项研究针对长期腹膜透析引发的腹膜纤维化这一临床难题展开深入探索。腹膜透析是终末期肾病患者重要的肾脏替代治疗方式，但长期暴露于高糖透析液会导致腹膜结构和功能进行性改变，最终诱发腹膜纤维化，造成超滤衰竭与治疗失败，严重影响患者预后。尽管既往研究提示Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）信号通路参与多种器官纤维化进程，但其在腹膜纤维化中的精确下游效应分子与作用机制尚未阐明。本研究旨在解析ROCK通路调控腹膜纤维化的具体分子机制，为临床防治提供新靶点。
研究人员通过体内动物模型与体外细胞实验相结合的策略，系统探究了ROCK/MEF2A/EZH2信号轴在腹膜纤维化中的作用。研究采用6-8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠构建PD模型，设置对照组、PDF模型组、AAV敲低组、阴性对照组及法舒地尔干预组，通过组织学染色、免疫组化及蛋白印迹评估纤维化程度与分子表达变化。体外实验使用人腹膜间皮细胞系HMrSV5，予高糖刺激模拟病理环境，结合基因敲低、过表达及药物干预，运用蛋白印迹、免疫荧光、核质分离、双荧光素酶报告实验及染色质免疫共沉淀等技术验证分子互作机制。
关键技术方法包括：建立大鼠腹膜透析纤维化模型（样本来源为SD大鼠腹膜组织）与人腹膜间皮细胞高糖损伤模型；采用腺相关病毒介导的基因敲低技术与质粒过表达技术调控MEF2A与EZH2表达；运用核质蛋白分离、免疫荧光定位技术分析蛋白亚细胞分布；通过双荧光素酶报告实验与染色质免疫共沉淀定量PCR验证转录因子与靶基因的调控关系；采用组织学染色（HE、Masson）与免疫组化评估体内纤维化表型。
研究结果如下：
3.1 高糖上调HPMCs中MEF2A与p-MEF2A表达并促进p-MEF2A核转位
研究人员发现高糖刺激显著上调人腹膜间皮细胞中总MEF2A及其磷酸化形式水平，核质分离与免疫荧光结果显示磷酸化MEF2A主要富集于细胞核内。
3.2 抑制MEF2A减轻高糖诱导的HPMCs中EZH2上调与EMT
MEF2A敲低有效抑制高糖诱导的EZH2表达升高，同时维持上皮标志物E-钙黏蛋白表达，降低间质标志物α-平滑肌肌动蛋白与波形蛋白水平，缓解EMT进程。
3.3 EZH2过表达逆转si-MEF2A对高糖诱导EMT的保护作用
EZH2过表达可抵消MEF2A敲低对EMT的抑制作用。双荧光素酶报告与ChIP-qPCR实验证实MEF2A直接结合EZH2启动子并激活其转录。
3.4 抑制ROCK通路逆转高糖诱导的HPMCs中MEF2A上调与EMT
ROCK特异性抑制剂法舒地尔处理显著降低高糖诱导的ROCK、MEF2A、p-MEF2A及EZH2表达，同时改善EMT表型。
3.5 抑制ROCK信号通路阻断高糖诱导的MEF2A磷酸化与核转位
法舒地尔干预减少胞质MEF2A积累，并完全阻止磷酸化MEF2A向细胞核内转位。
3.6 体内敲低MEF2A减轻腹膜透析相关腹膜纤维化
AAV介导的MEF2A敲低显著减少大鼠腹膜厚度与胶原沉积，下调α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与EZH2表达，上调E-钙黏蛋白水平。
3.7 抑制ROCK通路在体内抑制腹膜透析相关腹膜纤维化与MEF2A过表达
口服法舒地尔治疗显著缓解大鼠腹膜纤维化，同步抑制ROCK、MEF2A、p-MEF2A及EZH2的异常升高。
讨论与结论部分指出，本研究首次揭示高糖通过激活ROCK通路，促进MEF2A磷酸化及核转位，进而转录激活EZH2表达，驱动腹膜间皮细胞EMT与纤维化进展。该ROCK/MEF2A/EZH2轴为理解腹膜纤维化发病机制提供了新视角，其中MEF2A有望成为延缓腹膜纤维化的重要治疗靶点。研究进一步支持ROCK抑制剂法舒地尔在临床抗纤维化治疗中的应用潜力。
