开发并临床应用一种高灵敏度的血清学检测方法，用于识别特发性膜性肾病中的血栓调节蛋白1型结构域含7A抗体的存在

《Journal of Immunological Methods》：Development and clinical application of a highly sensitive serological assay for detecting thrombospondin type-1 domain-containing 7A antibodies in idiopathic membranous nephropathy

　　

郑天宇|唐宣丽|高尚斌|田楠楠|严玉峰|连典|严灿龙|秦源|周秀梅|王一刚|王国琴|黄彪

摘要

目的

建立一种高灵敏度的血清学检测方法，用于检测特发性膜性肾病（IMN）患者血清中的血栓调节蛋白1型结构域含7A抗体（THSD7A-Ab），以填补现有诊断生物标志物方面的空白。

方法

通过将THSD7A蛋白固定在固相上，建立了一种时间分辨荧光免疫测定法（TRFIA），该方法能够捕获血清样本中的THSD7A-Ab。使用铕（Eu³⁺）标记的二次抗体进行检测。测量了THSD7A阳性IMN患者和M型磷脂酶A2受体（PLA2R）阴性IMN患者的血清THSD7A-Ab水平，并确定了相应的血清阳性率。

结果

TRFIA-THSD7A-Ab检测方法的灵敏度为0.13 RU/mL，线性范围为0.13至600 RU/mL。检测内精密度为3.35%至4.63%，检测间精密度为5.21%至9.07%。回收率为93.78%至107.20%。THSD7A相关IMN患者的血清THSD7A-Ab水平（176.54 ± 224.77 RU/mL）显著高于PLA2R相关IMN患者（11.38 ± 4.76 RU/mL，P < 0.0001）和健康对照组（7.86 ± 2.92 RU/mL，P < 0.0001）。区分THSD7A相关IMN的临界值为13.70 RU/mL。在PLA2R阴性IMN患者中，THSD7A-Ab的阳性率为1.6%。

结论

首次成功建立了一种高灵敏度的TRFIA方法用于检测血清THSD7A-Ab，该方法在识别THSD7A阳性患者方面表现出优异的区分能力。