PGT-A技术揭示了在正常受精的卵子中存在三倍体胚胎：其发生频率及囊胚特征

《Journal of Assisted Reproduction and Genetics》：PGT-A reveals triploid embryos among normally fertilized oocytes: frequency and blastocyst features

　　

摘要

引言

随着囊胚培养的广泛采用和基因检测技术的进步，使得能够可靠地确定胚胎的倍性状态，传统的正常受精概念正在被重新评估。尽管传统上认为存在两个原核（2PN）表示受精正常，但并非所有由2PN形成的胚胎都是二倍体。在通过下一代测序（NGS）进行植入前遗传检测（PGT-A）的滋养层（TE）活检中，有一部分被鉴定为三倍体。

研究目的

确定特定的形态学和形态动力学特征是否能够区分由2PN形成的三倍体囊胚和二倍体囊胚。

研究方法

这是一项回顾性研究，涵盖了2019年至2023年间在我们试管婴儿中心接受NGS和单核苷酸多态性（SNP）基因分型检测的2666名18-45岁患者的3369个周期。在分析的12,395个囊胚中，有59个被鉴定为三倍体，它们来自57个PGT-A周期，属于54名患者。重新评估了受精情况。对三倍体胚胎进行了分析，考虑了第二极体排出时间、活检时间（第5天 vs 第6天）、滋养层质量以及内细胞团（ICM）的质量，还有形态动力学参数（从2细胞到5细胞阶段的裂殖时间）。分类变量以比例表示。连续变量使用Student’s t检验进行统计分析，P值小于0.05被视为具有统计学意义。

研究结果

基因分析确定了50个由2PN合子形成的三倍体囊胚。这些三倍体囊胚可以分为两个亚群：2个原核且含有2个极体（2PN 2 PB）的三倍体囊胚和2个原核但只含有1个极体（2PN/1 PB）的三倍体囊胚。与它们的二倍体同类胚胎相比，三倍体胚胎表现出：(a) 显著的原核不对称性，其中一个原核明显大于另一个；(b) 形态动力学参数延迟，从第一次裂殖开始细胞分裂速度较慢（t2：28.59 ± 3.74 h 对 25.70 ± 2.90 h；t3：39.76 ± 3.48 对 36.75 ± 3.03 h；t4：40.75 ± 4.07 对 37.25 ± 3.66 h；t5：54.85 ± 8.07 对 46.34 ± 5.54 h；P < 0.05）；(c) 胚胎质量较低，表现出高质量滋养层的囊胚比例较少。

结论

研究结果主要强调了对于那些看似正常（2PN）受精过程中产生的三倍体胚胎，需要提高对其风险的认识。虽然形态学和形态动力学参数与三倍体相关，但它们提供的区分准确性不足以替代直接的基因检测，后者仍然是排除三倍体的唯一可靠方法。大多数由2PN形成的三倍体胚胎似乎是由于第二极体未被排出所导致的，这突出了准确检查受精过程的重要性，特别是在不进行PGT-A的周期或检测平台无法确定倍性的情况下，因为三倍体是妊娠早期流产最常见的非整倍体形式。不同试管婴儿实验室中2PN合子发生三倍体的比例可能有所不同。鉴于鉴定出的三倍体胚胎数量有限，这些发现应谨慎解读。

引言

随着囊胚培养的广泛采用和基因检测技术的进步，传统的正常受精概念正在被重新评估。尽管传统上认为存在两个原核（2PN）表示受精正常，但并非所有由2PN形成的胚胎都是二倍体。在通过下一代测序（NGS）进行植入前遗传检测（PGT-A）的滋养层（TE）活检中，有一部分被鉴定为三倍体。

研究目的

确定特定的形态学和形态动力学特征是否能够区分由2PN形成的三倍体囊胚和二倍体囊胚。

研究方法

这是一项回顾性研究，涵盖了2019年至2023年间在我们试管婴儿中心接受NGS和单核苷酸多态性（SNP）基因分型检测的2666名18-45岁患者的3369个周期。在分析的12,395个囊胚中，有59个被鉴定为三倍体，它们来自57个PGT-A周期，属于54名患者。重新评估了受精情况。对三倍体胚胎进行了分析，考虑了第二极体排出时间、活检时间（第5天 vs 第6天）、滋养层质量以及内细胞团（ICM）的质量，还有形态动力学参数（从2细胞到5细胞阶段的裂殖时间）。分类变量以比例表示。连续变量使用Student’s t检验进行统计分析，P值小于0.05被视为具有统计学意义。

研究结果

基因分析确定了50个由2PN合子形成的三倍体囊胚。这些三倍体囊胚可以分为两个亚群：2个原核且含有2个极体（2PN 2 PB）的三倍体囊胚和2个原核但只含有1个极体（2PN/1 PB）的三倍体囊胚。与它们的二倍体同类胚胎相比，三倍体胚胎表现出：(a) 显著的原核不对称性，其中一个原核明显大于另一个；(b) 形态动力学参数延迟，从第一次裂殖开始细胞分裂速度较慢（t2：28.59 ± 3.74 h 对 25.70 ± 2.90 h；t3：39.76 ± 3.48 对 36.75 ± 3.03 h；t4：40.75 ± 4.07 对 37.25 ± 3.66 h；t5：54.85 ± 8.07 对 46.34 ± 5.54 h；P < 0.05）；(c) 胚胎质量较低，表现出高质量滋养层的囊胚比例较少。

结论

研究结果主要强调了对于那些看似正常（2PN）受精过程中产生的三倍体胚胎，需要提高对其风险的认识。虽然形态学和形态动力学参数与三倍体相关，但它们提供的区分准确性不足以替代直接的基因检测，后者仍然是排除三倍体的唯一可靠方法。大多数由2PN形成的三倍体胚胎似乎是由于第二极体未被排出所导致的，这突出了准确检查受精过程的重要性，特别是在不进行PGT-A的周期或检测平台无法确定倍性的情况下，因为三倍体是妊娠早期流产最常见的非整倍体形式。不同试管婴儿实验室中2PN合子发生三倍体的比例可能有所不同。鉴于鉴定出的三倍体胚胎数量有限，这些发现应谨慎解读。