综述：方法验证、分子对接研究以及阿里·卡扎乌雷（Ali Kazaure Jos）地区（位于高原州，Plateau State）非孕妇群体中RHESUS同种抗体的流行情况评估

《Gene Reports》：Method validation, molecular docking and assessment of the prevalence of RHESUS alloantibodies among non-pregnant females in Ali Kazaure Jos, Plateau State

　　**Rebecca Mayam Summunti | Raymond Tyoakaa Iorhemen | Ejeh Stephen | Nankyer Isa Kyesmen | Abduljelil Ajala**
**尼日利亚博科斯高原州立大学医学实验室科学系**

**摘要**
Rh血型系统，尤其是具有免疫原性的D抗原（RhD），在输血医学和预防溶血性疾病方面至关重要。可靠地检测RhD同种抗体是确保输血安全和母婴健康的关键，尤其是在当地数据有限的情况下。本研究采用横断面研究方法，对150名非孕妇进行了标准血清学方法验证，包括间接抗球蛋白试验（IAT）。研究探索了基于校准的分析方法，并进行了计算抗原-抗体相互作用建模。根据CLSI EP17-A2标准估算了分析灵敏度（LOD/LOQ）。RhD阳性率为91.3%（95% CI：85.6–94.9），而RhD阴性率为8.7%（95% CI：5.1–14.4）。同种抗体阳性率为0.7%（95% CI：0.02–3.9）。Fisher精确检验显示RhD状态与同种免疫反应之间无统计学显著差异（p > 0.05），但统计功效有限。分析验证表明该方法具有可接受的定性检测能力，但定量可靠性受到限制。通过使用低浓度重复样本重新确定的LOD和LOQ值提高了模型的有效性。计算对接技术利用基于同源性的结构近似方法探索了潜在的RhD抗原-抗体结合模式，而非直接确定RhD膜蛋白的结构，因此更多是用于生成假设而非验证假设。综合这些方法，验证后的血清学框架确保了抗体检测的分析可靠性，而计算机模拟结果为抗原-抗体识别提供了机制背景，同时避免了过度解读免疫风险。这种综合方法支持在资源有限的环境中进行基于证据的输血规划和产前筛查策略。本研究提供了初步的流行病学和方法学见解。

**引言**
Rh血型系统是当前35个人类血型系统之一，仅次于ABO系统，包含50种已表征的人类血型抗原，其中D、C、c、E和e抗原最为重要。常用的术语“Rh因子”、“Rh阳性”和“Rh阴性”仅指D抗原（Enawgaw等人，2022；Mahmood等人，2018）。在输血医学中，Rh血型系统因具有极高的临床重要性而占据主导地位。其重要性源于多种原因，包括高免疫原性（尤其是D抗原），可引发胎儿和新生儿的溶血性疾病（胎儿红细胞增多症，简称HDFN，这是一种危及生命的情况），以及加剧输血反应（Tormey和Hendrickson，2019）。当暴露于不相容的血液（例如Rh阳性红细胞）时，会形成抗D抗体（针对Rh抗原的抗体），这一过程称为同种免疫反应，会导致多种并发症。免疫预防和输血实践依赖于对Rh同种抗体形成机制的了解（Setyanda和Rofinda，2024）。在产科中，D抗原的暴露尤为重要，因为如果母亲的抗D抗体是免疫球蛋白G（IgG），它能够穿过胎盘并引发HDFN。HDFN根据母亲免疫反应涉及的红细胞抗原分为三种类型：仅由抗D引起的HDFN；由抗D及其他Rh抗体（如抗C、抗c、抗E或抗e）共同引起的HDFN（最为常见且严重）；以及由ABO抗原或其他非抗D免疫抗体（如Jk、K、Fy、S）引起的HDFN。当母亲的免疫系统对异体红细胞表面抗原敏感时，会刺激IgG抗体的产生，这些抗体会穿过胎盘，如果胎儿携带相应的表面抗原，则会导致溶血和随后的贫血（Christensen等人，2023；Roubalová和Lubu?ky，2020；Sonneveld等人，2017）。抗D抗体引起的并发症分为新生儿和胎儿并发症，包括：胆红素诱导的脑损伤、器官功能障碍、严重贫血、高输出性心力衰竭引起的胎儿水肿、神经系统后遗症、高胆红素血症和新生儿黄疸；母亲并发症包括：需要进行父亲基因型检测、尽管采取了预防措施但仍存在免疫风险、同种免疫反应以及侵入性胎儿评估带来的心理压力（Argoti等人，2022；Fung-Kee-Fung等人，2024）。针对这些并发症的管理策略以抗D免疫球蛋白的预防性使用为核心，以减少初次免疫反应（Kilby等人，2025）。

**全球范围内Rh同种抗体流行率的研究**
全球范围内Rh同种抗体的流行率存在差异，受医疗资源、遗传因素和社会经济因素的影响。不同种族群体中RhD阴性的比例不同，白人中约为15.8%，黑人中为8%，亚洲人为1%。研究表明，在撒哈拉以南非洲地区，约有4%至6%的女性患有RhD阴性。在尼日利亚，据现有数据统计，Rh相关疾病导致每天有144名孕妇死亡。此外，这也是该国高婴儿-母亲死亡率的重要原因之一。令人担忧的是，曾进行选择性流产的RhD阴性女性可能已经暴露于该疾病（Eleje等人，2017）。在安全预防措施出现之前，所有新出生的婴儿中约有1%患有HDFN，相当于每2200个新生儿中就有1个死亡（Cordell等人，2025）。尼日利亚高原州的数据也显示出类似的趋势，但具体数字尚未记录。表1列出了全球Rh单倍型的分布情况（Reid和Lomas-Francis，2004）。

**关于Rh同种抗体和红细胞同种免疫反应的研究**
关于Rh同种抗体和红细胞同种免疫反应的研究主要集中在不同人群中的流行率调查和血清学方法验证上。横断面研究采用了多种方法，包括使用抗c和抗D抗体的手动试管检测以及间接抗球蛋白试验（Otomewo等人，2020），以及使用商业筛查试剂的柱凝集技术（Kahar，2018）。Ortho Biovue系统和AHG/Coombs技术也被用于抗体检测（Isaac等人，2017）。不同人群中的流行率差异显著，例如尼日利亚女性中的抗D抗体阳性率为0%（Otomewo等人，2020），而印度孕妇中的同种免疫反应率为1.02%（Kahar，2018）。需要输血的患者中，这一比率高达14.85%（Isaac等人，2017），而在密歇根州东南部的孕妇中则为0.74%（Moinuddin等人，2019）。这些研究表明，标准化血清学方法对于预防胎儿和新生儿的溶血性疾病至关重要。

**研究方法与结果**
虽然RhD抗体的流行病学检测和血清学方法已经成熟，但由于RhD蛋白的跨膜性质以及缺乏高分辨率实验结构，其分子基础尚未完全阐明。因此，计算建模提供了一种补充性的、基于假设的方法来探索潜在的相互作用模式，但需明确其局限性。本研究结合了血清学验证、流行病学评估和分子对接技术，提供了对Rh同种免疫反应的多维度理解。血清学方法确认了同种抗体的存在和特异性，而流行病学分析则将其在研究人群中的分布情况进行了背景说明。分子对接技术作为一种假设生成工具，用于探索抗原和抗体之间的潜在结构相互作用，从而补充实验结果而非作为最终验证。这些方法共同构成了一个连贯的研究框架，将分析可靠性、群体观察和分子层面的见解联系起来，同时认识到计算结果主要用于生成假设而非验证假设。本研究评估了尼日利亚高原州Ali Kazaure地区非孕妇群体中RhD血型和异常抗体的流行率。

**试剂信息**
本研究使用的所有试剂相关信息见表2。

**质量控制与保证**
曲线表示用于评估检测性能和信号响应的优化曲线。回归方程为y = ?6.95775 + 0.28521x，皮尔逊相关系数为0.93813，R2值为0.88008，调整后的R2值为0.8501。基于这些数据，LOD为0.053，LOQ为0.161。

**分子对接技术**
在尼日利亚高原州Ali Kazaure地区非孕妇群体中，分子对接和Rh同种抗体流行率的研究中，校准曲线是方法验证的关键组成部分。从回归方程（y = ?6.95775 + 0.28521x）可以看出，时间（分钟）与血清/30%盐水比例之间存在强正线性关系（Jiang等人，2022）。

**结论**
本研究提供了该地区非孕妇群体中Rh同种抗体流行率的证据，得到了血清学验证和流行病学分析的支持。分子对接技术的应用为潜在的抗原-抗体相互作用提供了初步见解。然而，这些发现仍处于探索阶段，需要进一步的实验验证。该研究有助于理解资源有限环境下的同种免疫反应模式。

**作者贡献声明**
Rebecca Mayam Summunti：撰写初稿、方法学设计、数据分析、概念构建。
Raymond Tyoakaa Iorhemen：撰写、审稿与编辑、数据可视化、软件应用、方法学设计、概念构建。
Ejeh Stephen：撰写、审稿与编辑、数据可视化、软件应用、方法学设计。
Nankyer Isa Kyesmen：撰写、审稿与编辑、数据可视化、监督工作。
Abduljelil Ajala：撰写、审稿与编辑、数据可视化、监督工作、软件应用、方法学设计。

**伦理声明**
本研究获得高原州专科医院研究伦理委员会的批准（注册编号：NHREC/05/01/2010b，参考编号：PSSH/ADM/ETH/CO/2015/004），并在国家健康研究伦理委员会（NHREC）注册。高原州专科医院研究伦理委员会是NHREC下属的子委员会，注册时间为2010年5月1日。伦理同意批准日期为2019年10月23日。

**资金情况**
作者未获得任何研究资助。

**利益冲突声明**
作者声明没有利益冲突。