《Veterinary Research Communications》：Diagnosis of acetaminophen and codeine poisoning in a dog using earwax analysis by headspace gas chromatography-mass spectrometry (HS/GC-MS)
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伴侣动物因暴露于供人用的镇痛药而发生中毒，是兽医临床中常见且具有重要临床意义的问题，通常与未经专业监督的给药有关。这种情况可诱发严重的全身性毒性反应。在出现非特异性临床表现或无法获得常规生物样本时，诊断性确认尤其具有挑战性。本病例报告描述了耳垢作为一种无创生物
伴侣动物因暴露于供人用的镇痛药而发生中毒，是兽医临床中常见且具有重要临床意义的问题，通常与未经专业监督的给药有关。这种情况可诱发严重的全身性毒性反应。在出现非特异性临床表现或无法获得常规生物样本时，诊断性确认尤其具有挑战性。本病例报告描述了耳垢作为一种无创生物学基质在兽医毒理学确认中的创新性应用。1只9岁雄性混种犬因创伤事故后由其主人给予含对乙酰氨基酚和可待因的人用药物而入院。临床评估显示精神沉郁、流涎增多、食欲减退、脱水及神经系统异常。实验室检查结果提示中性粒细胞性白细胞增多，并伴有肝酶活性显著升高，与急性肝细胞损伤一致。采用顶空气相色谱-质谱联用技术（HS/GC-MS）进行毒理学检测，在耳垢样本中检出与对乙酰氨基酚相关的特征信号，从而支持对该药物暴露的怀疑。随后立即启动强化治疗，包括液体治疗、N-乙酰半胱氨酸（NAC）解毒治疗、阿片类拮抗、镇痛及支持治疗。患犬临床状态逐步改善，临床症状完全消失并实现完全康复。本病例突出了将人用药物给予伴侣动物所带来的显著风险，并强调有必要提高饲主对自行给宠物用药行为风险的认知。此外，本研究表明耳垢作为无创生物学基质具有毒理学确认的诊断潜力，拓展了兽医毒理学可用的辅助诊断工具范围，并有助于改善疑似药物中毒病例中的临床决策。
该文发表于《Veterinary Research Communications》，报道了1例犬对乙酰氨基酚与可待因暴露相关中毒的临床与毒理学诊断病例，核心创新在于将耳垢作为无创生物学基质用于毒理学辅助确认。研究背景在于，伴侣动物接触人用药物所致中毒是小动物临床中高频且现实的问题，尤其在主人未经兽医指导自行用药的情境下更易发生。对乙酰氨基酚在人体中广泛用于镇痛、解热，但犬猫对其毒性风险明显，过量后可经细胞色素P450（CYP450，参与药物氧化代谢的酶系统）途径生成高反应性代谢物N-乙酰对苯醌亚胺（NAPQI），当肝脏谷胱甘肽耗竭时，可引发氧化应激和急性肝细胞坏死。可待因作为阿片类镇痛药，其兽医中毒资料相对有限，但过量暴露可能造成神经抑制和呼吸抑制。此类中毒的诊断通常依赖病史、临床表现和实验室检查，但当症状非特异或缺乏常规样本时，确证往往困难，因此开展耳垢替代性检测研究具有明确临床意义。
研究人员围绕1例由主人误用人用复方镇痛药导致的犬中毒病例，系统记录了病史、体格检查、神经学评估、血液学与血清生化结果、影像学检查、毒理学分析、治疗经过及转归。病例为1只9岁、13.5 kg雄性混种犬，因前一日发生机动车碰撞，主人为缓解疼痛自行给予含500 mg对乙酰氨基酚及未注明剂量可待因的药片，估算对乙酰氨基酚剂量约为犬推荐治疗剂量的3倍。给药后患犬出现精神萎靡、轻度流涎、摄食减少、饮水下降以及未排尿排便等异常。入院后体检见黏膜充血、皮肤弹性下降，并伴左侧体侧、股部及右髋部剥脱性损伤和明显包皮水肿。神经学检查提示骨盆肢本体感觉缺失、右后肢髌反射下降、肛门括约肌反射减弱、髂嵴尾侧皮肌反射消失，并见瞳孔反射与眼睑反射减弱、鼻镜和耳廓感觉下降，以及强迫性咀嚼和重复性头部运动。研究人员据此判断，该病例不仅存在创伤后改变，还合并了药物暴露相关的全身性和神经系统异常。
为开展本研究，研究人员主要采用了临床病例连续评估、血液学与血清生化检测、X线与腹部超声影像学检查，以及耳垢样本顶空气相色谱-质谱联用（HS/GC-MS）毒理学分析等关键方法。样本来源为就诊于戈亚斯联邦大学兽医医院的1只自然发病混种犬。毒理学部分以耳垢为检测基质，采用扫描模式与选择离子监测（SIM）模式，对对乙酰氨基酚、可待因及色谱标准相关离子进行筛查，并通过NIST17与NIST17s谱库进行碎片比对注释。
研究结果部分可按原文主体结构概括如下。
Background
研究首先梳理了人用药物暴露在小动物中毒中的重要地位，指出抗炎药和镇痛药是高频致毒药物。对乙酰氨基酚口服后可快速吸收，主要经葡萄糖醛酸化和硫酸化代谢，但部分经CYP450生成NAPQI；过量时谷胱甘肽清除能力不足，从而导致严重肝细胞损伤。可待因则主要通过CYP2D6代谢为吗啡，其在犬中毒方面报道较少。该部分为后续病例分析提供了药理毒理学基础，也说明了采用色谱-质谱技术进行暴露确认的必要性。
Case presentation
病例呈现显示，患犬在创伤后接受主人擅自给予的人用复方药物，形成明确暴露背景。体格检查和神经学检查提示，患犬存在脱水、局部组织损伤及较明显的神经功能异常。该部分通过详细病史与临床查体，建立了“创伤后状态合并疑似药物中毒”的初步临床判断。
Laboratory findings
血常规结果显示白细胞升高，并以分叶中性粒细胞增多为主，伴杆状核中性粒细胞升高，提示急性炎症反应；同时可见中性粒细胞胞质嗜碱性、D?hle小体及少量胞质空泡化等毒性改变。血浆总蛋白升高支持脱水状态。红细胞系统整体变化不大，仅平均红细胞血红蛋白浓度轻度下降。血清生化结果中，丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）和γ-谷氨酰转移酶（GGT）升高，总胆红素和直接胆红素升高，提示肝细胞性与胆汁淤积性损伤并存，整体与急性肝损伤相符；而肌酐和尿素处于参考范围，未见明确肾功能损害证据。该部分通过实验室证据支持了中毒相关肝损伤的判断。
Imaging findings
骨盆及腰骶部X线未见显著骨性异常，腹部超声提示双肾肾病改变及右肾可能存在血肿或囊肿。研究人员据此认为，影像学未发现能够解释全部临床异常的决定性骨骼病变，而肾脏超声改变虽存在，但未与生化肾损伤指标形成对应。该结果说明，病例主要临床风险并不集中于明显骨折或急性肾衰竭，而更侧重于创伤基础上的药物性肝损伤与神经异常。
Toxicological investigation by HS/GC-MS
本研究最具创新性的结果来自耳垢毒理学分析。研究人员在耳垢样本经HS/GC-MS检测后，于SIM模式下观察到与对乙酰氨基酚相关的m/z特征碎片，并与对苯二酚共洗脱；后者被认为既可能是对乙酰氨基酚的代谢相关产物，也可能是其热降解产物。保留时间为57.754 min的峰与该相关信号一致，从而支持患犬存在对乙酰氨基酚暴露。与此同时，该方法未检出可待因相关碎片。研究人员明确指出，这一阴性结果并不能排除可待因暴露，原因可能包括未衍生化可疑物筛查技术的局限性，以及可待因在犬耳垢中的药代动力学、掺入机制与稳定性尚不清楚。因此，耳垢分析结果应与病史、临床表现和常规实验室结果综合解读。该部分结论表明，耳垢可作为犬药物暴露毒理学确认的辅助基质，尤其对对乙酰氨基酚具有实际诊断价值。
Treatment and clinical evolution
治疗方面，研究人员在住院后立即实施强化干预，包括乳酸林格液静脉输注、N-乙酰半胱氨酸（NAC）解毒、纳洛酮阿片拮抗、镇痛、止吐、局部创面处理以及一般支持治疗。经过28 h强化治疗后，患犬精神状态改善，流涎减少，神经功能恢复。出院后继续接受口服镇痛、止吐、抗菌及外用创面管理，并在第5天复查时继续抗感染治疗，未见明显不良结局。该结果说明，在及时识别并积极处理的前提下，此类药物暴露相关中毒可获得良好预后。
Discussion and conclusions
讨论部分强调，本病例的主要意义在于三个层面。其一，病例再次证实主人擅自将人用镇痛药用于伴侣动物具有显著危险性，尤其是固定复方制剂中对乙酰氨基酚剂量可能迅速达到毒性水平。其二，从临床病理角度看，白细胞增多和中性粒细胞毒性改变提示急性炎症，ALT、ALP、GGT及胆红素升高共同支持急性肝损伤诊断，这与对乙酰氨基酚经NAPQI介导的肝毒性机制一致。其三，也是本文最突出的贡献，即耳垢作为无创生物学基质可用于兽医毒理学辅助诊断。研究人员指出，在常规样本受限、无尿或生物材料获取不足时，耳垢检测可作为补充性工具，而非替代既有标准诊断流程。
论文结论部分可译为：本病例凸显了在兽医临床实践中，不恰当给予动物人用药物所带来的重要临床影响。未经监督使用对乙酰氨基酚和可待因，使该犬暴露于对乙酰氨基酚毒性剂量以及可待因潜在不良反应风险之下，反映出饲主对宠物自行用药风险认知不足这一常见问题。此外，本报告证明了耳垢作为无创生物学基质用于毒理学确认的新颖性及其诊断价值。当标准样本采集受限或不可行时，如无尿或生物材料获取受限的情形，可考虑将这一辅助诊断工具纳入应用，但其定位应是补充既有诊断方案，而非取代已建立的标准诊断流程。总体而言，研究表明耳垢HS/GC-MS检测能够为疑似药物中毒病例提供有价值的补充证据，并有助于提升兽医毒理学临床决策的准确性。
