基于新型多重免疫荧光肿瘤炎症评分的I/II期研究：既往经治晚期非小细胞肺癌患者接受帕博利珠单抗联合吉西他滨治疗的潜在预测性生物标志物

《OncoImmunology》：Novel multiplex immunofluorescence-based tumor inflammation score provides apparent predictive biomarker in a phase I/II study of pembrolizumab with gemcitabine in patients with previously-treated advanced non-small cell lung cancer (NSCLC)

对肿瘤微环境(TME)中细胞间关系的回顾性表征，相比程序性死亡配体1(PD-L1)表达、肿瘤突变负荷(TMB)或基因表达谱，具有显著更优的预测效能。在这项评估吉西他滨联合帕博利珠单抗用于既往经治、未接受过免疫治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者安全性与潜在疗效的小型研究中，研究人员对入组的16例患者开展了标准及新型免疫参数分析(NCT03083808)。吉西他滨与帕博利珠单抗联合给药安全性良好，但与历史对照相比未显示出协同效应。本研究的新发现是：基线时调节性T细胞(Treg)在CD3+T细胞附近的富集频率与治疗改善的结局相关(p<0.05)。将该Treg/T细胞关系指标与总体T细胞密度整合，得到肿瘤炎症评分(TIS)，其与疾病缓解显著相关(p<0.002)。研究人员推测这提示存在持续的抗癌免疫反应。此外，既往研究证实针对肿瘤相关抗原(TAA)的IgG抗体反应可识别协调的T细胞与B细胞应答靶点及免疫监视证据，本研究则发现高水平自身抗体反应虽未达到统计学显著性，但有趋向更差结局的趋势(p=0.06)，提示肿瘤可能已进化出逃逸针对上述TAA免疫反应的机制。

本研究发表于《OncoImmunology》，聚焦既往经治晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者接受帕博利珠单抗联合吉西他滨治疗的疗效与生物标志物探索。当前免疫检查点抑制剂虽改善了晚期NSCLC生存，但仅少数患者获益，亟需优化治疗策略与精准预测标志物。吉西他滨作为NSCLC常用化疗药，临床前研究显示其可增加抗原交叉提呈、扩增瘤内肿瘤特异性CD8⁺T细胞并选择性减少调节性T细胞(Treg)，具备联合免疫治疗的潜力，但二者联用的临床可行性及预测标志物此前尚未明确。

研究纳入16例2015年7月至2018年8月入组、美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态0-1分的既往经治晚期NSCLC患者，所有患者均提供治疗前活检标本及系列外周血样本。关键技术方法包括：采用22C3检测PD-L1表达；流式细胞术分析外周血单个核细胞亚群，定义Treg为CD3⁺CD4⁺CCR4^hiCD127^lowCD25^hi细胞，单核样髓源抑制细胞(Mo-MDSC)为谱系阴性CD15^?CD11b⁺CD33⁺CD14⁺HLA-DR^low细胞；噬菌体展示免疫沉淀测序(PhIP-Seq)检测血清自身抗体反应；多重免疫荧光(mIF)五重染色分析肿瘤组织免疫细胞表型与空间分布，通过计算平均每个CD3⁺T细胞周围15 μm内的FOXP3⁺Treg数量乘以CD3⁺T细胞密度，构建肿瘤炎症评分(TIS)；采用Cox比例风险模型与秩和检验进行生存与相关性分析。

研究结果如下：

患者特征：中位年龄64岁，14例为高加索/非西班牙裔人群，12例为腺癌，14例ECOG评分为1，12例既往接受过1线治疗。PD-L1检测显示3例≥50%，4例1%-49%，7例无表达。

疗效：中位无进展生存期(PFS)为3.10个月(95%CI 2.60-5.68)，中位总生存期(OS)为8.20个月(95%CI 5.03-28.29)，客观缓解率(ORR)为12.5%，疾病控制率为68.8%。疗效未优于单药吉西他滨历史数据，未观察到协同信号。

相关性结果：

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  PD-L1表达与结局：PD-L1阳性与阴性患者、PD-L1≥50%与<50%患者的PFS与OS均无显著差异。
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  外周血免疫谱：基线外周血Treg频率与疗效无关，而Mo-MDSC频率在无应答患者中显著升高(p=0.0281)，且与PFS负相关(p=0.0310)。
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  抗体反应：基线自身抗体反应数量与最佳疗效无显著相关，但高于中位值的患者疾病进展更快，呈边缘显著性趋势(p=0.06)。治疗中可检测到新的自身抗体反应，个别患者反应谱极广。
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  肿瘤免疫浸润与TIS：肿瘤组织CD3⁺T细胞亚群与PFS/OS无显著关联。但基线活检中CD3⁺T细胞周围15 μm内Treg数量越高，患者生存越长(p<0.05)。整合该空间关系与CD3⁺T细胞密度构建的TIS，可将患者分为三组，三组PFS差异显著(p=0.002)：高TIS组预后最优，低TIS伴高PD-1⁺CD3⁺T细胞组预后最差。

讨论部分总结：联合方案安全性可控但未超越单药吉西他滨疗效，与同期PROLUNG研究中帕博利珠单抗联合多西他赛显示的协同效应形成对比，提示不同化疗药与免疫治疗的协同潜力存在差异。外周血Mo-MDSC可作为潜在疗效负相关标志物，而肿瘤内Treg与CD3⁺T细胞的空间邻近性反映局部抗肿瘤免疫激活状态，而非单纯免疫抑制。高水平自身抗体反应趋向不良预后，可能源于肿瘤免疫逃逸导致T细胞耗竭或抗原丢失。构建的TIS突破了传统PD-L1等静态标志物的局限，通过量化肿瘤微环境的细胞空间关系，为NSCLC免疫治疗精准分层提供了新型候选生物标志物，但仍需在更大队列中验证其预测价值与普适性。研究强调前瞻性临床试验中获取治疗前活检对解析免疫微环境、指导个体化治疗的重要性。