坎地沙坦酯通过调控ADMA–DDAH–eNOS通路恢复实验性ACLF相关肾功能障碍中的肾内皮功能

《Journal of Clinical and Experimental Hepatology》：Candesartan Cilexetil Restores Renal Endothelial Function through Modulation of the ADMA–DDAH–eNOS Pathway in Experimental ACLF-Associated Renal Dysfunction

　　

摘要：肾功能障碍是进展期肝硬化常见且危及生命的并发症，在急性-慢性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure，ACLF）中尤为突出，与高死亡率及不良临床预后密切相关。本研究旨在（1）阐明肾ADMA–DDAH–eNOS轴在合并肾功能障碍的肝硬化±叠加炎症（模拟ACLF）中的作用；（2）评价坎地沙坦酯（Candesartan Cilexetil，CC）对该通路的影响。雄性Wistar大鼠给予四氯化碳（CCl4，15% v/v玉米油，0.5 mL/kg，每周2次，持续14周）诱导伴肾功能障碍的肝硬化模型。第14周末，于脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）急性攻击前随机给予CC（8 mg/kg，灌胃，持续2周）。所有动物于第16周处死。CCl4诱导的肝硬化大鼠平均动脉压（mean arterial pressure，MAP）及肾血流量（renal blood flow，RBF）下降，肾血管阻力（renal vascular resistance，RVR）升高，伴肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肾损伤分子-1（kidney injury molecule-1，KIM-1）升高及肾炎症反应增强。急性LPS打击进一步加重上述异常。CC处理显著降低肝硬化±LPS攻击大鼠的肾损伤及炎症标志物，而MAP、RBF及RVR无明显改变。在伴肾功能障碍的ACLF模型大鼠中，CC显著降低肾不对称二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA）水平，上调磷酸化内皮型一氧化氮合酶（phosphorylated endothelial nitric oxide synthase，p-eNOS）及二甲基精氨酸二甲氨基水解酶-1（dimethylarginine dimethylaminohydrolase-1，DDAH-1）表达，下调DDAH-2表达，恢复肾一氧化氮（nitric oxide，NO）水平，增强抗氧化酶活性并减轻氧化应激。本研究首次证实CC通过上调DDAH-1及eNOS表达、减少ADMA蓄积从而提高肾NO生物利用度，改善肝硬化合并肾功能障碍时的肾内皮功能。靶向DDAH-1介导的NO恢复可能是治疗肝硬化肾功能障碍的潜在策略。

论文解读：坎地沙坦酯通过调控ADMA–DDAH–eNOS通路恢复实验性ACLF相关肾功能障碍中的肾内皮功能

一、研究背景与意义

肾功能障碍是进展期肝硬化的严重并发症，尤多见于急性-慢性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure，ACLF），与短期高死亡率密切相关。目前有效治疗手段有限，其病理生理涉及循环紊乱、全身炎症、氧化应激及内皮功能障碍。肾脏内皮功能障碍表现为肾血管痉挛及一氧化氮（nitric oxide，NO）生物利用度降低。NO由内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）催化L-精氨酸生成，受内源性竞争抑制剂——不对称二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA）调控。ADMA主要由二甲基精氨酸二甲氨基水解酶（dimethylarginine dimethylaminohydrolase，DDAH；尤以DDAH-1为主）水解代谢。失代偿期肝硬化时肝肾ADMA升高、DDAH-1表达下调，致eNOS抑制及NO减少，促进肾内皮功能受损。血管紧张素II（Ang II）可通过eNOS解偶联及活性氧（reactive oxygen species，ROS）增多抑制DDAH活性，形成恶性循环。坎地沙坦酯（Candesartan Cilexetil，CC）为血管紧张素II 1型受体（angiotensin II type 1 receptor，AT₁R）拮抗剂，具抗炎、抗氧化及改善NO合成作用。本研究由Balasubramaniyan Vairappan、T.S. Ravikumar、M. Sundar及Gavin Wright完成，发表于《Journal of Clinical and Experimental Hepatology》，旨在明确CC是否通过调节肾ADMA–DDAH–eNOS轴改善肝硬化及ACLF样炎症状态下的肾功能障碍。

二、主要实验方法

研究人员采用雄性Wistar大鼠，以四氯化碳（CCl₄，15% v/v玉米油，0.5 mL/kg，腹腔注射，每周2次，共14周）诱导肝硬化伴肾功能障碍模型。第14周末将成模大鼠随机分组，于脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，模拟ACLF叠加炎症）攻击前给予CC（8 mg/kg，灌胃，每日1次，共2周）干预，设健康对照组、单纯CC对照组、CCl₄组、CCl₄+CC组、CCl₄+LPS组及CCl₄+LPS+CC组（n=6/组）。于第16周取材，检测平均动脉压（mean arterial pressure，MAP）、肾血流量（renal blood flow，RBF）、肾血管阻力（renal vascular resistance，RVR）；测定血清/肾组织中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肾损伤分子-1（kidney injury molecule-1，KIM-1）；检测肾组织ADMA含量、DDAH-1/DDAH-2及p-eNOS（Ser1177）蛋白表达、NO水平、抗氧化酶（超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽GSH）活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，并进行肾组织形态学观察。

三、研究结果

Effect of CC on Body Weight, Food/Water Intake, and Kidney Morphometry in CCl₄-Induced Cirrhotic Rats ± LPS（坎地沙坦酯对CCl₄诱导肝硬化±LPS大鼠体重、摄食/水及肾脏形态学的影响）

CCl₄组终末体重较健康组显著降低（p＜0.01），肾重及肾体比降低（p＜0.01，p＜0.05）；CC干预后肝硬化大鼠终末体重明显改善。LPS叠加未进一步降低体重，CC处理对各组摄食、摄水量无显著影响，可部分逆转CCl₄所致的肾脏萎缩性形态改变。

四、讨论与结论翻译

讨论部分指出：本研究显示实验性肝硬化相关肾功能障碍中肾DDAH-1（而非DDAH-2）选择性下调，表明ADMA代谢存在亚型特异性受损并致肾NO缺乏；LPS诱导的ACLF样炎症虽未进一步抑制DDAH-1，但显著上调DDAH-2且伴随RBF下降与RVR升高；CC处理可特异性上调DDAH-1及p-eNOS、降低ADMA、恢复NO，并减轻氧化应激与炎症，提示阻断ROS–DDAH–ADMA–NOS轴为改善肾内皮功能的关键机制。

结论（译文）：综上，本研究证明AT₁R拮抗剂坎地沙坦酯通过恢复肾DDAH–ADMA–eNOS通路、提高NO生物利用度、减轻氧化应激与炎症、缓解肾损伤，改善肝硬化相关肾功能障碍。研究确定ROS–DDAH–ADMA–NOS轴失调是肝硬化肾内皮功能障碍的重要机制。鉴于血管紧张素阻断剂在肝硬化患者中已知的安全性考量，这些发现支持进一步探索靶向DDAH-1介导NO恢复以管理肝硬化肾功能障碍的治疗潜力。