乙酰乙酰苷通过抑制肝细胞中的Notch1通路，并通过Keap1–Nrf2途径调控铁死亡过程来改变巨噬细胞的极化方向，从而改善非酒精性脂肪性肝病（MASLD）

《Metabolism》：Acacetin ameliorates MASLD by inhibiting the Notch1 pathway in hepatocytes and reprogramming macrophage polarization via Keap1–Nrf2–mediated restraint of ferroptosis

　　

徐俊|应慧雅|王一晓|曾媛|赵倩|余星月|蒋浩然|朱丹丹|夏子强|周若若|余福军

中国浙江省温州市温州医科大学第一附属医院胃肠病学系

摘要

代谢功能障碍相关性脂肪性肝病（MASLD）是全球最常见的慢性肝病，巨噬细胞极化和铁死亡在其发病过程中起着关键作用。据报道，乙酰辛具有对抗MASLD的保护作用，但其作用机制尚不清楚。本研究采用高脂饮食（HFD）喂养的雄性C57BL/6J小鼠，通过腹腔注射给予乙酰辛，并使用RAW264.7、BMDM和AML12细胞进行体外实验。结果显示，乙酰辛可减少肝脏脂质积累，抑制坏死性凋亡，并下调肝细胞中的Notch1通路。同时，乙酰辛能将巨噬细胞从M1型表型重新编程为M2型表型，并通过Keap1–Nrf2通路抑制铁死亡。在肝细胞中，N1ICD的过表达会减弱乙酰辛的降脂效果。研究发现USP7是N1ICD的去泛素化酶，而N1ICD又上调USP7的转录，形成正反馈循环。乙酰辛破坏了这一循环，促进N1ICD的泛素化及蛋白酶体降解。在巨噬细胞中，铁死亡激活因子erastin部分逆转了乙酰辛诱导的抗炎作用，这一效应是通过线粒体损伤导致的mtDNA释放及随后的cGAS–STING通路激活实现的。Nrf2抑制剂ML385也减弱了乙酰辛对巨噬细胞铁死亡的抑制作用及其对M2型表型的促进作用。此外，乙酰辛通过与Keap1在Arg483位点的竞争性结合，促进Nrf2向细胞核的转运。总体而言，本研究阐明了乙酰辛改善MASLD的双细胞机制，为MASLD的治疗提供了新的见解。

部分摘要

缩写

MASLD	代谢功能障碍相关性脂肪性肝病
HFD	高脂饮食
MASH	代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎
NICD	Notch细胞内域
Hes	hairy and enhancer of split
mTORC1	雷帕霉素复合体1的靶蛋白
SREBP-1c	固醇调节元件结合蛋白1c
DUB	去泛素化酶
USP7	泛素特异性蛋白酶7
IL-1β	白细胞介素-1β
TNF-α	肿瘤坏死因子-α
IL-6	白细胞介素-6
IL-10	白细胞介素-10
SLC7A11	溶质转运蛋白家族7成员11
GSH	谷胱甘肽
GPX4	谷胱甘肽还原酶

试剂

本研究使用的试剂包括脂多糖（LPS；#L3025，Sigma，美国）；乙酰辛（#HY-N0451，纯度：99.83%）、油酸（OA；#HY-N1446）、棕榈酸（PA；#HY-N0830）、转化生长因子-β（TGF-β；#HY-P7118）、erastin（#HY-15763）、ML385（#HY-100523）和溴化乙锭（EtBr；HY-D0021，MedChemExpress，美国）；GSH试剂盒（#BC1175，Solarbio，中国）；丙二醛（MDA）试剂盒（#S0131S，Beyotime，中国）；Fe²⁺试剂盒（#E-BC-K881-M，Elabscience，中国）；脂质过氧化试剂盒

乙酰辛改善小鼠高脂饮食引起的MASLD

为了探讨乙酰辛对MASLD的体内作用，按图1A所示给高脂饮食小鼠注射10 mg/kg的乙酰辛。结果显示，与对照组相比，高脂饮食组的体重、肝脏重量及肝脏/体重比均有所增加，而乙酰辛可减轻这些高脂饮食引起的不良影响（图1B–D）。体成分分析进一步表明，乙酰辛减少了脂肪质量，但对瘦质量没有显著影响（图1E）。

讨论

本研究阐明了乙酰辛在巨噬细胞和肝细胞中调节MASLD的机制。鉴于Notch1信号通路与肝脏脂质积累之间的关联，我们的发现表明，乙酰辛通过破坏USP7–N1ICD的正反馈循环，促进N1ICD的泛素化及降解，从而抑制Notch1通路，进而减轻肝脏脂质积累。这与铁死亡与

CRediT作者贡献声明

徐俊：撰写初稿、数据整理、概念构思。应慧雅：数据整理、概念构思。王一晓：撰写初稿、数据可视化。曾媛：方法学设计、实验实施。赵倩：数据可视化、软件操作。余星月：方法学设计、实验实施。蒋浩然：项目管理、资金申请。朱丹丹：数据分析。夏子强：数据分析。周若若：结果验证、实验实施。余福军：撰写终稿、审稿与编辑、指导

资助

本项目得到了浙江省自然科学基金（项目编号：LY23H030003）、浙江省医疗卫生科技计划项目（项目编号：2024KY1264）和温州市科学技术局（项目编号：Y20220024）的支持。

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

致谢

不适用。