口黏膜给予CBD富集的Cannabis sp.提取物2周适度减轻慢性神经病理性疼痛大鼠的冷痛觉过敏

《European Journal of Pain》：Oromucosal Administration of a Cannabidiol-Enriched Cannabis sp. Extract for 2?Weeks Moderately Reduces Cold Hyperalgesia in Rats With Neuropathic Pain

　　

摘要 背景：慢性神经病理性疼痛（Chronic Neuropathic Pain, CNP）涉及常驻及外周免疫细胞间的复杂相互作用，以及内源性大麻素系统（Endocannabinoid System, EcS）的调制。基于大麻（Cannabis-based）的产品已成为有前景的治疗选择，但其对免疫细胞的影响尚不清楚。本研究评估了通过口腔黏膜给予大麻二酚（Cannabidiol, CBD）富集的Cannabis sp.提取物在CNP模型中的效应。 方法：将2月龄Wistar大鼠按性别随机分为四组。两组接受坐骨神经慢性压迫性损伤（Chronic Constriction Injury, CCI），剩余两组接受假手术（Sham）。从CCI后第7天起，大鼠每日接受CBD富集提取物（10 mg/kg）或溶媒处理，持续15天。使用von Frey、丙酮及热板试验评估机械和温度敏感性。通过流式细胞术、免疫组织化学及蛋白质印迹法（Western Blotting）分析同侧脊髓节段。 结果：CCI诱导了热痛觉过敏和机械性异常痛。CBD富集提取物处理适度降低了两性CCI大鼠的冷敏感性，但未改善热敏感性，对机械阈值有显著但微小的影响。CCI增加了脊髓小胶质细胞数量（雌性尤为明显），该效应未被治疗调节。各组间未检测到免疫细胞浸润或CB1R、CB2R或TRPV1蛋白表达的显著变化。 结论：口黏膜给予CBD富集提取物可适度缓解两性的冷 hypersensitivity。CCI后22天的神经免疫改变以微胶质细胞为主，无论治疗与否均未检测到外周免疫细胞浸润。 意义声明：本手稿通过使用更接近患者使用的治疗方案（商用CBD富集提取物及口黏膜途径）评估Cannabis sp.产品的临床前模型，填补了文献空白。此外，所有实验均在两性动物中进行，解决了慢性疼痛研究中公认的局限性。国际疼痛研究学会（International Association for the Study of Pain）强调在该领域进一步研究前需谨慎认可Cannabis sp.产品用于慢性疼痛治疗。

论文解读：《Oromucosal Administration of a Cannabidiol-Enriched Cannabis sp. Extract for 2?Weeks Moderately Reduces Cold Hyperalgesia in Rats With Neuropathic Pain》

一、 研究背景与目的

慢性神经病理性疼痛（Chronic Neuropathic Pain, CNP）由体感觉神经系统病变引起，全球约7%–10%人口受累。其病理机制涉及外周免疫细胞、小胶质细胞及内源性大麻素系统（Endocannabinoid System, EcS）的复杂互动。目前一线药物（加巴喷丁类、阿片类）疗效有限且有依赖风险。

尽管Cannabis sp.来源产品（富含大麻二酚Cannabidiol, CBD）在临床观察中显示镇痛潜力，但国际疼痛研究学会（International Association for the Study of Pain, IASP）指出其临床前证据及作用机制尚存空白。既往临床前研究多仅用雄性动物，且给药途径（如腹腔注射）与患者常用的口黏膜（Oromucosal）途径脱节。为此，研究人员在坐骨神经慢性压迫性损伤（Chronic Constriction Injury, CCI）大鼠模型中，采用两性动物及临床模拟的口黏膜给药，探究CBD富集提取物对疼痛行为及脊髓神经免疫的调控。

二、 主要关键技术方法

研究人员采用2月龄Wistar大鼠（雌雄各半），建立CCI模型（假手术Sham对照）。从术后第7天（疼痛确立期）起，每日经口黏膜给予CBD富集Cannabis sp.提取物（10 mg/kg CBD，溶媒为MCT油）或对照，持续14天。

主要评估手段包括：

1. 1.
   行为学测试：术前基线、术后7天（治疗前）及21天（治疗后）分别进行von Frey（机械阈值）、丙酮试验（冷敏感性）及52℃热板试验（热潜伏期）。
2. 2.
   免疫与分子分析（术后第22天取材）：
   • •
     流式细胞术：分析同侧L4-L6脊髓中CD45/CD11b定义的髓系细胞、小胶质细胞、T/B淋巴细胞及中性粒细胞。
   • •
     免疫荧光：抗Iba-1标记小胶质细胞，进行细胞计数、面积定量及Sholl形态分析。
   • •
     蛋白质印迹（Western Blotting）：检测脊髓CB₁R、CB₂R及TRPV₁蛋白表达。
     数据统计采用重复测量双因素ANOVA及事后检验。

三、 研究结果

3.1 治疗对疼痛行为的影响

研究人员发现CCI成功诱导了机械性异常痛（Mechanical Allodynia）、冷痛觉过敏（Cold Hyperalgesia）及热痛觉过敏。每日口黏膜给予CBD富集提取物14天后：

• •
  冷敏感性：丙酮试验评分在雌雄CCI大鼠中均显著降低（雄 p=0.0112，雌 p=0.0199），但未完全恢复至Sham水平。
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  机械阈值：von Frey阈值在CCI+Extract组显著升高（雄 p=0.0006，雌 p=0.0367），但绝对数值改善幅度小（如雄性从0.086g升至0.79g），且仍低于Sham组，功能学意义有限。
• •
  热敏感性：52℃热板试验中，提取物未显著改善撤足潜伏期（雄 p=0.4454；雌 p=0.0503，边缘显著）。
  结论：CBD富集提取物适度改善已确立CNP的冷 hypersensitivity，对机械异常痛有微弱作用，对高热痛觉无显著影响。

3.2 脊髓小胶质细胞数量与形态

通过Iba-1染色评估背角（Lamina I-III）：

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  细胞数量：雌性CCI组（无论Vehicle或Extract）小胶质细胞数及Iba-1⁺面积均显著高于Sham（p<0.05）。雄性中，仅CCI+Extract组较Sham+Extract升高（p=0.0319），Vehicle组无差异。
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  治疗调制：Extract治疗未逆转CCI引起的细胞数增加（CCI+Veh vs CCI+Ext无差异）。
• •
  形态学（Sholl分析）：在22天时间点，各组间突起交叉点、最大投射距离无差异。
  结论：CCI在雌性大鼠脊髓引发更持久的小胶质细胞增殖，但2周CBD治疗未调节该神经免疫响应，且晚期时间点形态未明显活化。

3.3 流式细胞术分析外周免疫细胞浸润

研究人员在术后22天分析脊髓免疫谱：

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  主要群体：CD45^lowCD11b⁺小胶质细胞占主导。部分组别（雄CCI+Ext、雌CCI+Veh）显示小胶质比例微升，CD45^highCD11b⁺髓系细胞微降。
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  外周细胞：B细胞（CD45^highCD45R⁺）、T细胞（CD3⁺CD4⁺/CD8⁺）及中性粒细胞（RP1⁺）在各组间无显著差异，且占比极低。
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  治疗影响：Extract与Vehicle组间无差异。
  结论：在CCI后22天（慢性期），脊髓免疫景观以驻留小胶质细胞改变为主，未见明显外周淋巴细胞浸润，且CBD提取物未重塑该图谱。

3.4 内源性大麻素受体表达

Western Blotting检测同侧脊髓：

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  蛋白水平：CB₁R、CB₂R及TRPV₁的蛋白丰度在Sham vs CCI、Veh vs Extract间均无统计学差异（雌雄皆然）。
  结论：在慢性痛确立期（22天），CCI及低剂量CBD提取物均未引起脊髓主要大麻素/香草醛受体的代偿性上调或下调。

四、 讨论总结与结论翻译

讨论要点：本研究采用临床相关的口黏膜途径及两性设计，发现10 mg/kg/天CBD富集提取物（含微量THC 0.035 mg/kg）对已确立的CCI痛觉有部分缓解，尤以冷敏感为著，这与部分临床观察一致。热不敏感可能源于剂量保守（对比文献30 mg/kg有效）。在机制上，22天时间点脊髓以外周驻留小胶质细胞变化为主，外周浸润消退，故未观测到CBD典型的急性抗炎（抑制浸润）效应，也未改变CB₁/CB₂/TRPV₁蛋白量。雌性小胶质增殖更明显，但治疗均未调制，提示晚期神经免疫稳态可能对单纯CBD不敏感。

结论（翻译）：

每日给予CBD富集Cannabis sp.提取物2周对两性大鼠神经病理性疼痛症状有适度影响，部分衰减冷 hypersensitivity。该效应发生在雌性小胶质细胞增生未被检测到的调制背景下。此外，在研究的时间点，无论治疗条件如何，研究人员未检测到免疫细胞浸润或脊髓内源性大麻素受体表达的变化。