《Sleep Medicine》：Chronic intermittent hypoxia triggers hepatic platelet recruitment and activation.
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纪尧姆·维亚尔（Guillaume Vial）|索菲·布永（Sophie Bouyon）|艾米莉·蒙泰利埃（Emilie Montellier）|弗洛朗·舒法尔（Florent Chuffart）|埃梅琳·勒马里（Emeline Lemarie）|拉乌阿·本·梅索德（Raoua
纪尧姆·维亚尔（Guillaume Vial）|索菲·布永（Sophie Bouyon）|艾米莉·蒙泰利埃（Emilie Montellier）|弗洛朗·舒法尔（Florent Chuffart）|埃梅琳·勒马里（Emeline Lemarie）|拉乌阿·本·梅索德（Raoua Ben Messaoud）|玛丽-乔耶·福尔（Marie-Joyeux Faure）|萨迪·科奇宾（Saadi Khochbin）|雷诺·塔米西耶（Renaud Tamisier）|夏洛特·科斯坦丁（Charlotte Costentin）|让-路易·佩潘（Jean-Louis Pépin）|乔纳森·高歇（Jonathan Gaucher）
格勒诺布尔阿尔卑斯大学（Université Grenoble Alpes, UGA）；法国国家健康与医学研究院（Inserm）第1300单元，缺氧与病理生理学实验室（Hypoxia and Physiopathology Laboratory, HP2），法国格勒诺布尔
摘要 阻塞性睡眠呼吸暂停（Obstructive Sleep Apnea, OSA）及其标志性特征——间歇性缺氧（Intermittent Hypoxia, IH），越来越多地被认为是肝脏疾病发生和进展的独立风险因素。然而，将IH与肝脏损伤联系起来的早期分子机制仍不甚明了。通过使用慢性IH的小鼠模型，我们发现了肝脏中与血小板相关的转录反应，表现为参与血小板激活、聚集和中性粒细胞脱颗粒的基因上调。在啮齿动物模型中，组织学分析证实了肝脏内血小板的积聚和中性粒细胞的浸润，这是纤维化或脂肪变性之前的早期阶段。来自OSA患者的肝活检显示活化血小板的染色增强，这支持了我们研究结果的转化意义。总体而言，我们的数据表明肝脏内血小板的募集和激活是肝脏对IH的早期且保守的反应特征，提示血小板-中性粒细胞相互作用可能是OSA相关肝脏损伤的潜在因素。
引言 阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）是最常见的睡眠障碍，全球有近十亿人受到影响，其特征是在睡眠期间反复出现部分或完全的咽部阻塞，导致氧气饱和度反复下降和恢复，即间歇性缺氧（IH）（Lévy等人，2015；Benjafield等人，2019）。虽然OSA对心血管和代谢的影响已经得到充分认识，但其对肝脏健康的影响也日益受到重视（Lévy等人，2015；Harki等人，2022；Belaidi等人，2022；Jullian-Desayes等人，2021）。现在认为IH是肝脏疾病发生和进展的独立驱动因素，超越了传统的代谢风险因素，通过促进脂肪变性、触发肝脏炎症反应和促进纤维化，从而加速疾病进展（Mesarwi等人，2019；Jullian-Desayes等人，2021；Gaucher等人，2024；Trzepizur等人，2025）。
血小板已被认为是肝脏损伤的主要潜在因素。除了其在止血中的传统作用外，现在还发现它们是活跃的免疫和炎症介质，能够通过释放生物活性分子并与免疫细胞相互作用来影响组织反应（Lisman & Luyendyk，2018；Ramadori等人，2019；Dalbeni等人，2022；Scherlinger等人，2023；Poli & Zanoni，2023）。然而，IH（OSA的标志）是否直接影响肝脏内血小板的募集和激活仍不清楚。
在这里，我们使用慢性IH的小鼠模型，研究了肝脏的早期反应，重点关注与血小板相关的途径。结合转录组分析、组织学研究和人类肝活检的交叉验证，我们发现血小板的积聚和激活是IH诱导的早期肝脏改变的保守特征，可能启动肝脏炎症级联反应和重塑。
章节摘录 间歇性缺氧诱导与血小板激活和中性粒细胞募集相关的肝脏转录程序 为了研究IH对肝脏的分子影响，雄性C57BL/6J小鼠被暴露于慢性IH环境中16周（图1A），随后进行肝脏转录组分析。RNA-seq数据集的主成分分析（PCA）显示IH样本和正常氧合对照（NC）样本之间存在明显的分离（图1B）。在17,204个表达的肝脏基因中，差异表达分析确定了1,285个（7.5%）在IH条件下上调的基因和1,376个（8%）下调的基因（图1C）。
讨论 本研究确定了肝脏对IH的早期反应中血小板的积聚和激活，为OSA与肝脏疾病进展提供了机制联系。使用IH的小鼠模型，我们观察到了以止血和血小板聚集为中心的协调转录程序，并得到了肝脏内血小板沉积的组织学证据支持。值得注意的是，这些改变发生在没有明显纤维化的情况下，表明存在一个“启动阶段”
动物和慢性间歇性缺氧暴露 16周大的雄性C57BL/6JRj小鼠（JanvierLabs，法国Le Genest-Saint-Isle）被置于12小时光照：12小时黑暗的周期中，可以自由摄取标准饲料（LASQRodent Diet Rod16，LASVENDI）和水。为了模拟与OSA相关的代谢压力和IH，小鼠被暴露于一种已建立的慢性IH方案中，该方案包括每小时60个周期的交替缺氧（5% FiO2 ）和室空气（21% FiO2 ），仅限于睡眠/休息阶段（ZT0–ZT8），以再现
免疫组化 免疫组化方法根据制造商的方案（PK-6101，Vectastain Elite ABC试剂盒，Vector Laboratories）进行，如之前所述（Gaucher等人，2024）。简要来说，将5 μm厚的石蜡包埋肝脏切片重新水化，并用pH6的柠檬酸缓冲液（C999，Sigma Aldrich）或tris-EDTA缓冲液（pH9）处理以回收抗原。然后，用3%过氧化氢（H1009，Sigma Aldrich）淬灭内源性过氧化物酶活性，并用
CRediT作者贡献声明 让-路易·佩潘（Jean-Louis Pépin）： 撰写——原始草稿，可视化，监督，资源管理，项目管理，研究，资金获取，正式分析，概念化。乔纳森·高歇（Jonathan Gaucher）： 撰写——原始草稿，可视化，监督，资源管理，项目管理，研究，资金获取，正式分析，数据管理，概念化。纪尧姆·维亚尔（Guillaume Vial）： 方法学，研究，正式分析，数据管理。雷诺·塔米西耶（Renaud Tamisier）： 撰写——审阅与编辑。
数据可用性 本研究中使用的肝脏RNA-seq数据可在基因表达组学数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）中公开获取，访问号为
GSE242668 ，此前已在（Gaucher等人，2024）中报道。
财政支持 这项工作部分得到了格勒诺布尔阿尔卑斯大学（Université Grenoble Alpes, UGA）和法国国家健康与医学研究院（Inserm）的支持。JG还获得了来自“为慢性疾病行动”（Fonds de Agir pour les Maladies Chroniques, APMC）和Lefoulon Delalande基金会（Institut de France）的额外资助。JG和JLP获得了法国国家研究署（ANR）对Temporise项目（ANR-19-CE14-0037-01）的支持。RT和JLP还获得了ANR在FRANCE 2030计划框架下的支持，以及格勒诺布尔e-Health 和综合护理主席的支持
利益冲突声明 ? 作者声明他们没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。
致谢 我们感谢HP2实验室的所有成员提供的有益讨论和技术支持，以及格勒诺布尔阿尔卑斯动物设施（UMS-hTAG）的支持。在准备这项工作时，作者使用了ChatGPT（OpenAI，美国加州旧金山）来改进语言表达和可读性，并协助代码编写。作者根据需要审阅和编辑了所有内容，并对最终版本的手稿负全责。
