聚合物基质与生物基质中曲安奈德与柠檬酸三乙酯同时测定色谱方法的建立

《Analytica》：Chromatographic Method for Simultaneous Determination of Triamcinolone Acetonide and Triethyl Citrate in Polymeric and Biological Matrices

　　

热熔挤出（Hot-Melt Extrusion, HME)广泛应用于药物制剂生产领域；然而，需要可靠的分析工具以在热加工过程中同时监测药物含量与辅料稳定性。本研究中，研究人员建立并验证了一种选择性高、稳健性好的高效液相色谱-紫外检测法（HPLC–UV)，用于同时测定HME聚合物薄膜及猪颊黏膜中的曲安奈德（Triamcinolone Acetonide, TA)和柠檬酸三乙酯（Triethyl Citrate, TEC)。色谱分离采用C₁₈色谱柱，以乙腈-水（30:70, v/v)为流动相，流速0.6 mL min^?1，检测波长分别为TA的240 nm和TEC的210 nm。该方法经选择性、线性、精密度和准确度验证，包括在黏膜提取物及聚合物基质成分存在下的选择性评估，以及TA在猪颊黏膜中的回收率考察。TA在0.20–12.5 μg mL^?1范围内、TEC在4.5–30.0 μg mL^?1范围内均表现出良好的线性关系（r ≥ 0.998)，精密度低于6.3%，TA回收率超过94%。将方法应用于挤出薄膜分析，证实了分析物的均匀分布，并实现了热处理条件下TA降解与TEC损失的同步监测。上述结果表明，所建立的方法适用于HME药物制剂的处方开发、过程监测及稳定性评价。

热熔挤出（Hot-Melt Extrusion, HME)作为一种无溶剂连续化药物生产技术，因其可实现规模化生产、增强药物在聚合物基质中的分散调控能力等优势，已成为现代药物制剂领域的重要制造平台，近年来在颊黏膜及黏膜给药系统等先进递药系统的开发中得到日益广泛的应用。然而，HME工艺涉及的高温和高剪切力环境对活性药物成分及辅料的稳定性构成了显著挑战，亟需建立能够同时监测药物含量与辅料稳定性的可靠分析方法。

在HME制剂中，热塑性聚合物如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮-醋酸乙烯酯共聚物及纤维素衍生物等常被用作基质材料，而增塑剂的加入对于改善加工性能、调控最终产品的机械性能和理化性质至关重要。Eudragit? L100（EL100)作为一种阴离子甲基丙烯酸共聚物，因其成膜特性及在黏膜环境中的控释适用性，在HME系统中广泛用作聚合物基质。与此同时，柠檬酸三乙酯（TEC)因其生物相容性好、毒性低、能有效降低聚合物的玻璃化转变温度（Glass Transition Temperature, T_g)而增强制剂柔韧性和黏附性，成为最常用的药用增塑剂之一。但TEC具有相对挥发性，在高温加工过程中可能部分挥发或重新分布，进而改变制剂性能、机械完整性和药物释放行为。另一方面，曲安奈德（TA)作为一种合成皮质类固醇，因其高效的局部抗炎活性和降低口腔黏膜病变复发率的能力，常被纳入颊黏膜递药系统；然而TA在光照、高温及pH变化条件下易发生降解，在热加工系统中监测其完整性具有特殊的分析难度。目前文献中同时测定TA和TEC的方法尚属空白，也未见在聚合物基质和生物相关基质中同步评估这两种成分的研究报道。

基于上述背景，本研究旨在建立并验证一种稳健、选择性高的HPLC–UV方法，用于HME系统中 Palin系统中TA和TEC的同时定量，并支持TA在黏膜组织提取物中的定量分析，以满足颊黏膜滞留、渗透及局部生物利用度研究的需求。该方法依据国际人用药品注册技术协调委员会（ICH) Q2 (R2)指南进行验证，并应用于评估HME相关条件下分析物的分布及热诱导组成变化。

研究采用的技术方法主要包括：高效液相色谱法（HPLC)分离检测技术，使用C₁₈反相色谱柱（150 × 4.6 mm, 5 μm)，以乙腈-水（30:70, v/v)为流动相，流速0.6 mL min^?1，柱温35°C，检测波长240 nm（TA)和210 nm（TEC)，总运行时间17 min；样品制备方面，采用乙腈溶解和稀释，对猪颊黏膜样本进行机械搅拌和超声提取处理；方法验证涵盖系统适用性、选择性、线性、检测限（LOD)与定量限（LOQ)、精密度（重复性与中间精密度)、准确度（回收率)及稳健性评价；应用研究包括采用HME制备TA/TEC/EL100（10:30:60, m/m)薄膜，并在180°C条件下进行强制降解试验。

在方法优化与系统适用性方面，研究人员发现初始条件（乙腈-水40:60, v/v, 流速0.7 mL min^?1)下TA与TEC存在共洗脱现象，通过优化流动相组成和流速至乙腈-水30:70、流速0.6 mL min^?1，实现了TEC在10.5 min、TA在14.2 min的良好分离，拖尾因子均低于1.5。波长选择性得到确认：TA在210 nm虽有微弱响应，但相对于240 nm可忽略不计；210 nm处基质低强度信号不干扰定量。PDA峰纯度分析显示，TA纯度指数0.001–0.115，TEC标准溶液为0.004–0.739，均低于1.0的接受阈值。系统适用性试验中，容量因子（k′)分别为TA 4.08、TEC 2.75，满足k′ > 2的要求；理论板数分别约4900（TA)和6300（TEC)，超过[^4]于2000；分辨率持续高于1.5；进样重复性%RSD为TA 0.55%、TEC 3.14%。

在方法验证方面，选择性试验证实TA和TEC在EL100聚合物及猪颊黏膜提取物存在下均能实现完全分离，保留时间稳定（TA: 14.2–14.4 min; TEC: 10.4–10.6 min)，浓度测定不受干扰。线性关系良好，TA回归方程y = 32,708.0 x ? 4709.1（r = 0.999)，TEC为y = 1049.1 x ? 1155.3（r = 0.998)，残差随机分布无系统偏差。灵敏度方面，TA的LOD和LOQ分别为0.05和0.16 μg mL^?1；TEC为0.06和0.18 μg m0.05 μg mL^?1。精密度结果优异，重复性CV < 1.67%，中间精密度CV < 6.26%。准确度试验中，TA在猪颊黏膜中的回收率为94.2 ± 1.2%至96.3 ± 0.6%。稳健性评价显示，流动相组成、流速和柱温的

在方法验证方面，选择性试验证实TA和TEC在EL100聚合物及猪颊黏膜提取物存在下均能实现完全分离，保留时间稳定（TA: 14.2–14.4 min; TEC: 10.4–10.6 min)，浓度测定不受干扰。线性关系良好，TA回归方程y = 32,7.0 x ? 4709.1（r = 0.999)，TEC为y = 1049.1 x ? 1155.3（r = 0.998)，残差随机分布无系统偏差。灵敏度方面，TA的LOD和LOQ分别为0.05和0.16 μg mL^?1；TEC为0.06和0.18 μg mL^?1。精密度结果优异，重复性CV < 1.67%，中间精密度CV < 6.26%。准确度试验中，TA在猪颊黏膜中的回收率为94.2 ± 1.24.2 ± 1.2%至96.3 ± 0.6%。稳健性评价显示，流动相组成、流速和柱温的±1.5%变化未影响色谱分离效果，柱效、拖尾因子、分辨率及峰纯度均保持在可接受范围内。

在方法应用方面，研究人员将验证后的HPLC–UV方法应用于TA/TEC/EL100（10:30:60, m/m) HME制备薄膜的分析。新鲜挤出样品（时间点零)中TA含量为理论值的98.1 ± 5%，TEC为98.4 ± 11%，表明两种分析物在聚合物基质中分布均匀，证实了该方法对于热加工聚合物系统中两种成分同时测定的适用性。强制降解研究中，样品在180°C条件下暴露0.5–4.4 h，两种分析物的峰面积均显著下降，降解或损失率超过75%。TA的减少源于热降解，而TEC的损失主要由于在高温下的挥发。

总结与讨论部分，研究结论指出：本研究建立了一种选择性高、可靠性强的色谱方法，实现了HME聚合物样品中TA和TEC的同时定量。该方法满足线性、精密度、准确度、灵敏度和选择性等验证指标要求，能够在聚合物基质和生物基质存在下有效检测两种分析物，并可监测热加工相关条件下的药物降解和增塑剂损失情况。

该论文发表在《Analytica》期刊。所建立的HPLC–UV方法为热熔挤出聚合物给药系统的处方开发、过程控制和稳定性评估提供了有价值的分析工具，填补了TA和TEC同步检测方法学的空白，对于优化HME工艺参数、提高产品质量具有重要实践意义。