《Discover Immunity》：CD20 by diagnostic flow cytometry helps discriminate monoclonal gammopathy of undetermined significance and multiple myeloma plasma cells
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摘要：流式细胞术（Flow Cytometry, FC）是鉴定多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM）克隆性浆细胞的重要诊断工具；然而非MM的单克隆浆细胞免疫表型尚未完全明确。这对于意义未明单克隆免疫球蛋白血症（Monoclonal Gammo
摘要：流式细胞术（Flow Cytometry, FC）是鉴定多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM）克隆性浆细胞的重要诊断工具；然而非MM的单克隆浆细胞免疫表型尚未完全明确。这对于意义未明单克隆免疫球蛋白血症（Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance, MGUS）尤为重要，早期将其与MM鉴别有助于早期诊断及临床决策。研究人员回顾性分析了某单中心诊断流式细胞学实验室12个月内所有骨髓浆细胞病例。浆细胞采用含CD45、CD38、CD138、CD19、CD20、CD56、CD117、胞内κ链及胞内λ轻链的抗体组合进行染色。通过查阅病历将病例分类为正常/多克隆浆细胞、MM浆细胞及非MM的MGUS浆细胞。共纳入267例。单克隆浆细胞较正常浆细胞一致表现为CD45表达降低或缺失，且CD19和CD20丢失；但在MGUS与MM病例比较中，CD20在MGUS中更常保留表达，而在MM中通常缺失。上述数据显示CD20可作为流式细胞术鉴别MGUS与MM的有用标志物，支持对单克隆浆细胞疾病进行更准确的临床分型，并有望改善患者管理。
论文解读：诊断流式细胞术检测CD20有助于鉴别意义未明单克隆免疫球蛋白血症与多发性骨髓瘤浆细胞
本文发表于《Discover Immunity》。
研究背景与目的
流式细胞术（Flow Cytometry, FC）是诊断单克隆浆细胞疾病如多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM）及意义未明单克隆免疫球蛋白血症（Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance, MGUS）的重要手段，胞质轻链限制性（monotypic intracellular light chain staining）是浆细胞克隆性的标志。虽然目前尚无统一的国际标准浆细胞疾病流式检测抗体组合，但通常推荐包含CD38、CD138和CD45。MM的诊断需骨髓克隆性浆细胞≥10％（形态学）伴至少一项SLiM-CRAB（钙升高、肾功能不全、贫血、骨病或骨髓浆细胞≥60%、血清游离轻链比≥100、MRI可疑病灶）骨髓瘤定义事件；而MGUS定义为骨髓克隆性浆细胞＜10％且无SLiM-CRAB特征，年转化为MM率约1％，被视为侵袭性浆细胞疾病的前驱状态。已有文献较好描述了MM克隆细胞的免疫表型，但非MM（如MGUS）克隆细胞的流式免疫表型报道较少。因此，研究人员开展此项研究旨在比较MM与MGUS浆细胞的流式免疫表型差异，探寻辅助二者鉴别的标志物。
主要关键技术方法
研究人员对澳大利亚Westmead医院临床病理与医学研究所流式细胞学实验室12个月内的所有成人骨髓标本进行回顾性分析，排除重复患者，经病历复核确诊分组。骨髓标本经红细胞裂解后，采用含CD45-Krome Orange、CD38-Alexa Fluor 700、CD138-APC、CD19-PE-Cy7、CD56-V450、CD117-PerCP-Cy5.5、胞内κ-FITC、胞内λ-PE及CD20-Alexa Fluor 750的抗体鸡尾酒染色，胞质轻链采用透化试剂盒处理。浆细胞定义为CD38hiCD138hi且表达胞内免疫球蛋白轻链的细胞；单克隆浆细胞定义为κ:λ比值超出0.4–4.0范围。统计学分析采用SPSS v22，计量资料正态分布经Shapiro-Wilk检验后用单因素方差分析（ANOVA），分类变量用卡方检验。本研究经Western Sydney Local Health District Research Office批准为质量保证项目。
研究结果
3 Results（结果）
研究期间共267例可检出足够浆细胞用于免疫分型的患者标本，其中189例（71%）存在单克隆浆细胞群体，包括127例MM和23例MGUS（排除2例冒烟型骨髓瘤）。单克隆浆细胞（MM与MGUS合计）患者平均年龄约69岁，其表型较之多克隆浆细胞表现为CD45亮度降低、CD56和/或CD117表达、CD19阴性；年龄校正后此差异仍有统计学意义。进一步比较MGUS与MM，两者浆细胞表型整体相似，但MGUS浆细胞更可能显示CD20弱阳性至阳性表达（dim to positive CD20），而MM浆细胞通常CD20缺失；此差异在未接受过治疗的MM亚组中仍具统计学意义（χ2[2]=9.04, p=0.011）。CD20弱阳性/阳性鉴别MM与MGUS的敏感性为15.0%，特异性为71.4%。
讨论与结论总结
讨论部分指出，浆细胞准确表型分析对浆细胞疾病诊断至关重要。本研究在真实世界大样本诊断实验室队列中全面分析了MM与非MM浆细胞免疫表型。与已知范式一致，单克隆浆细胞特征为CD45降低或缺失、CD19丢失，常伴CD56和CD117表达。重要的是，研究发现MGUS浆细胞较MM更常保留CD20表达，这可作为二者流式细胞学鉴别的有意义指标。正常及成熟浆细胞通常丢失CD20，MGUS中约三分之一病例CD20+可能反映浆细胞相对不成熟、CD20丢失延迟或异常（aberrant）表达。尽管CD20非常规纳入标准浆细胞流式组合，本研究支持未来将其加入检测面板。除诊断价值外，部分MGUS浆细胞CD20表达也提示MGUS与MM间存在浆细胞分化成熟程度的生物学差异，并为抗CD20靶向治疗（如利妥昔单抗Rituximab用于MGUS相关神经病变或冒烟型骨髓瘤探索）提供潜在依据。研究局限为单中心回顾性及MGUS例数偏少（n=23），需在更大队列中验证。
研究结论翻译：
综上所述，研究人员在大规模真实世界实验室队列中对MM与非MM浆细胞进行了全面的免疫表型分析。与既定范式一致，单克隆浆细胞以CD45降低或缺失、CD19丢失为特征，常伴CD56和CD117表达。重要的是，本研究强调CD20表达更具MGUS特征，是MGUS与MM有意义的流式鉴别标志。由于临床实践中仅凭临床特征鉴别MGUS与MM可能存在困难，该发现具有实际意义。尽管CD20常未被常规纳入浆细胞疾病流式评估组合，本研究结果为未来将其加入流式抗体组合提供了依据。除诊断外，这些发现提示MGUS与MM浆细胞在成熟分化上存在生物学差异，对疾病进展及靶向治疗具有潜在意义。
