《Cytopathology》：Decoverslipping of Archival Cytology Aspirate Smears for Ancillary Studies: A Review of Methods and Institutional Experience With Freezer-Based Techniques
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**摘要**
**引言**：存档细胞学穿刺涂片越来越多地用于辅助检测，然而去盖片（decoverslipping）仍是一个实际操作瓶颈。本研究综述了已发表的去盖片方法学，并评估了针对穿刺涂片的冷冻基础策略。
**方法**：研究人员回顾并比较了已发表的去
**摘要**
**引言**：存档细胞学穿刺涂片越来越多地用于辅助检测，然而去盖片（decoverslipping）仍是一个实际操作瓶颈。本研究综述了已发表的去盖片方法学，并评估了针对穿刺涂片的冷冻基础策略。
**方法**：研究人员回顾并比较了已发表的去盖片技术，在周转时间、组织保存、安全性和下游应用适宜性方面进行对比。一项在MD Anderson Cancer Center进行的机构研究评估了冷冻基础去盖片（?20°C和?80°C）应用于存档穿刺涂片（40例，80张玻片），涵盖四个冷冻时长组（1–2分钟、3–5分钟、10分钟和15分钟）。
**结果**：使用厚二甲苯基封固剂和刚性玻璃盖玻片制备的穿刺涂片始终抵抗冷冻移除，仅在80张玻片中的26张（32.5%）实现完全移除，对应76张可评估穿刺玻片中的22张（28.9%）。最高单张玻片成功率出现在10分钟组（15/40；37.5%）。?80°C相对于?20°C的方向性优势明显，但不足以克服该制备类型的根本抵抗性。显著的病例内变异性表明，玻片特异性因素是结果的主要决定因素。
**结论**：封固剂厚度和盖玻片成分是去盖片成功的主要决定因素，且是未被充分认识的分析前变量。这些发现强调了根据预期下游辅助检测需求调整盖片工作流程的必要性。
**论文解读文章**
**研究背景与问题**
随着肿瘤精准医学的发展，存档细胞学穿刺涂片越来越多地用于辅助检测，包括免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）和高通量分子检测。这些检测需要从永久封固的玻片中获取细胞材料，而移除盖玻片（即去盖片）成为实际操作中的瓶颈。传统二甲苯浸泡法虽可靠，但耗时数小时至数天，涉及有害溶剂暴露，且对核酸保存不理想。现有替代方法（如冷冻法、加热溶剂法、机械法等）多基于组织学切片或盖玻片及封固剂特性差异显著的细胞学标本，其在穿刺涂片中的适用性未被系统评估。因此，本研究旨在：(1) 全面综述文献中报道的去盖片方法学；(2) 通过机构研究，重点揭示穿刺细胞学涂片在计划下游辅助检测时面临的独特挑战，强调盖玻片成分和封固剂选择作为分析前关键变量的重要性。该论文发表于《Cytopathology》。
**关键技术方法**
研究人员在MD Anderson Cancer Center开展了一项机构研究，使用40例存档穿刺涂片（80张玻片），涵盖四种冷冻时长组（1–2分钟、3–5分钟、10分钟、15分钟）和两种温度条件（?20°C和?80°C）。样本包括快速现场评估（rapid on-site evaluation, ROSE）制备的穿刺涂片（使用CoverSeal-X封固剂和玻璃盖玻片）以及细胞块切片（使用Tissue-Tek薄膜盖片）。去盖片尝试采用一次性切片刀或手术刀片，不使用溶剂或辅助干预。主要结局指标为研究者定义的四点顺序性Decoverslip Success Score（0–3），综合考虑移除难易度和细胞保留率。此外，还记录了盖玻片移除百分比、感兴趣区域（region of interest, ROI）细胞保留率和封固剂残留情况。
**研究结果**
**穿刺涂片结果**：80张玻片中仅26张（32.5%）实现完全成功移除；排除2张薄膜盖片细胞块玻片后，76张可评估穿刺涂片中22张（28.9%）达到完全移除。应用扩展可接受阈值（评分≥2）时，36.8%的玻片达到至少可接受结果。
**冷冻时长的影响**：冷冻时长是实验变量中影响最大的因素。短时间暴露（1–2分钟和3–5分钟）均无效（无一达到评分≥2）。延长至10分钟时获得最高成功率（37.5%），但性能高度变异。进一步延长至15分钟反而成功率下降（25.0%），提示超过10分钟收益递减且不可预测。
**冷冻温度的影响**：?80°C相对于?20°C表现出方向性优势，尤其在较长暴露时长下；例如10分钟组中，15/19病例比较中?80°C效果相等或更优；15分钟组中所有14例比较均如此。然而，绝对成功率仍低，且无论温度如何均无法克服该制备类型的根本抵抗性。
**病例内变异性**：配对玻片间观察到显著的病例内变异，8例病例的盖玻片移除差异超过65个百分点（最高达95个百分点）。研究者推测局部玻片特异性因素（如封固剂层厚度、封片后加热）主导结果。
**玻片年龄的影响**：最旧病例（2002年，23年）在所有4张玻片中均成功移除，但细胞保留率降低（50%–70%）；最新病例（2024年，1年）仅6.2%成功。呈现年龄越大移除越易但细胞保留越少的权衡趋势。
**薄膜盖片病例**：2张细胞块薄膜盖片玻片实现了完全或接近完全的物理移除，但细胞保存变异较大，且常有封固剂残留。
**感兴趣区域细胞保留与封固剂残留**：绝大多数玻璃盖片玻片的ROI细胞保留率为100%，最旧病例除外（50%–70%）。薄膜盖片病例保留率变异大（0%–100%）。封固剂残留多为微量。
**讨论与结论**
讨论指出，封固剂与去盖片方法的相互作用决定了移除可行性和分析物质量。本研究中穿刺涂片使用的CoverSeal-X（一种基于二甲苯的树脂聚合物，含乙苯和丁羟甲苯）对冷冻方法始终抵抗，与文献中DPX封固剂有效移除形成鲜明对比，证实封固剂成分和盖玻片材料是主导分析前变量。冷冻时长的影响最大，10分钟达最佳效果，15分钟效果下降可能因热平衡减弱了收缩失配。?80°C优于?20°C但不足以克服抵抗。显著的病例内变异表明需要逐张玻片评估。玻片年龄的影响提示封固剂老化和细胞完整性之间的权衡。实践建议包括：根据制备类型选择方法；记录封固剂和盖玻片信息；推荐10分钟?80°C冷冻为起始点；前瞻性统一盖片材料；注意安全防护。
**研究结论**（翻译原文结论部分）：
去盖片是从存档细胞学玻片中实现辅助检测可行性的一个被低估的决定因素。虽然冷冻基础方法可能对某些制备类型有效，但使用厚二甲苯基封固剂和刚性玻璃盖玻片制备的穿刺涂片始终抵抗，仅在约三分之一的可评估玻片中实现完全移除。配对玻片间的大幅度病例内变异证实，玻片特异性因素——主要是封固剂成分和盖玻片材料——而非冷冻方案，是结果的主导驱动因素。这些发现强调了根据下游辅助检测需求前瞻性统一盖片材料和实践的必要性。未来工作应表征热辅助去盖片对核酸完整性的影响，并评估为当代精准肿瘤学工作流程优化的替代封固策略。
