队列概览与样本流程图。A，结肠镜纵向时间线...

《Cancer Prevention Research》：Cohort overview and sample flow chart. A, Longitudinal timeline of colono... Open Access

　　

该研究提供了林奇综合征（Lynch syndrome, LS）携带者癌前结直肠病变的分子特征，以评估Nous-209免疫疗法预防结直肠癌发展的潜力。研究人员从26名携带MLH1或MSH2致病性变异的LS携带者中收集了总计50个腺瘤（adenoma）和12个高级别腺瘤（advanced adenoma, AA）。分子分析包括评估错配修复（mismatch repair, MMR）状态、微卫星不稳定性（microsatellite instability, MSI）以及检测Nous-209靶向的突变。研究人员发现83%的AA和58%的腺瘤为MMR缺陷型（deficient MMR, dMMR）。值得注意的是，尽管所有dMMR AA均为高MSI（MSI-high, MSI-H），但仅66%的dMMR腺瘤表现为MSI-H。Nous-209突变的存在与MSI状态强相关，dMMR/MSI-H病变中突变计数范围为15至57。被分类为低MSI（MSI-low, MSI-L）的dMMR腺瘤携带有限数量的突变（6–19），而微卫星稳定（microsatellite-stable, MSS）的病变无论MMR状态如何，几乎不携带Nous-209突变（0–2）。这些发现证实了癌前病变的分子异质性，并支持Nous-209免疫疗法通过在MSI获取时靶向腺瘤-癌序列来预防LS中MSI结直肠癌的潜力。预防相关性：研究显示在LS癌前病变的演变过程中，MSI和新抗原积累出现。这些发现支持将共享新抗原疫苗Nous-209作为MSI驱动的结直肠癌发生免疫预防策略的临床评估，对癌症预防研究具有重要意义。

## 论文解读：林奇综合征癌前病变分子特征与Nous-209免疫预防潜力

### 研究背景、问题与研究目的

林奇综合征（Lynch syndrome, LS）是由DNA错配修复（mismatch repair, MMR）基因（如MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）胚系致病性变异或EPCAM缺失导致MSH2沉默引起的常染色体显性遗传病，发病率为1/279。LS携带者患微卫星不稳定性（microsatellite instability, MSI）结直肠癌及其他多种恶性肿瘤的风险显著升高。当前指南建议对LS携带者进行密切结肠镜监测（通常1–2年间隔），以早期发现并切除癌前病变（腺瘤和高级别腺瘤，advanced adenoma, AA），但该策略在降低癌症发病率方面的效果存在争议，且患者依从性差、医疗成本高。因此，亟需能减少癌前病变进展为癌症的有效干预措施。

在LS中，癌前病变向癌症的转变加速，通常是由于体细胞“二次打击”导致MMR功能丧失，进而产生微卫星区域突变，形成重复移码肽（frameshift peptide, FSP），这些FSP可作为安全有效的新抗原。Nous-209免疫疗法是一种包含209个共享FSP的癌症疫苗，这些FSP在MSI肿瘤中富集，目前正研究作为LS携带者的预防性单药治疗。本研究旨在从分子角度表征LS携带者癌前病变的特征，以评估Nous-209免疫疗法通过靶向处于生长过程中的良性病变来预防结直肠癌的潜力。论文发表在《Cancer Prevention Research》。

### 主要关键技术方法

1. **患者队列与样本来源**：回顾性观察研究，纳入意大利IRCCS Humanitas Research Hospital接受主动监测的26名LS携带者（MLH1或MSH2胚系变异），共收集62个病变（50个腺瘤、12个AA）。
2. **MMR状态评估**：对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）标本进行免疫组化（immunohistochemistry, IHC），检测MLH1、PMS2、MSH2、MSH6蛋白表达，经验丰富的胃肠病理学家判读核染色缺失判定为dMMR。
3. **MSI检测与Nous-209突变鉴定**：对剩余样本进行全外显子组测序（whole-exome sequencing, WES），使用MSIsensor2计算MSI评分（分类为MSI-H、MSI-L、MSS），并通过基于查找的方法从比对数据中鉴定Nous-209靶向突变。
4. **统计分析**：采用Wilcoxon秩和检验比较连续变量，Fisher精确检验比较分类变量，Spearman秩相关系数评估相关性，P<0.05为统计学显著。

### 研究结果

#### 研究队列与癌前病变特征

在5年监测期内，26名携带者（14女12男，中位年龄52岁）中，MLH1变异占38%，MSH2占62%，包括癌症幸存者（57.7%）和未患癌者（42.3%）。共62个病变（50个腺瘤、12个AA），中位直径5毫米。通过IHC，39个（63%）病变为dMMR，23个（37%）为pMMR（MMR功能完整型）。AA中83.3%为dMMR，腺瘤中42%为dMMR（21个pMMR、29个dMMR）。

#### 癌前病变中的MMR状态与MSI表型

在33个可分析的dMMR标本中，所有dMMR AA均为MSI-H；而dMMR腺瘤中66.6%为MSI-H，16.7%为MSI-L，16.7%为MSS。所有测序的pMMR标本均为MSS。dMMR状态与病变大小相关：≥10 mm和5–10 mm病变中dMMR比例高于≤5 mm腺瘤。且dMMR病变中，MSI-H状态更常见于≥10 mm和5–10 mm病变，而≤5 mm dMMR腺瘤仅50%为MSI-H。

#### 癌前病变中存在Nous-209免疫疗法靶向突变

根据MSI状态分组：MSI-H病变中位含31个Nous-209突变（范围15–57），MSI-L病变中位13.5个（范围6–19），MSS/dMMR病变中位0.5个（范围0–2），pMMR/MSS病变中位0个（范围0–3）。MSI-H病变的肿瘤突变负荷（tumor mutational burden, TMB）显著高于MSI-L和MSS病变。但在不同大小类别中（≤5 mm、5–10 mm、≥10 mm），Nous-209突变数量无显著差异，且癌症幸存者与未患癌者之间的突变数量也无统计学差异。

### 讨论总结与结论

此项研究首次在LS携带者癌前病变中整合了MMR、MSI及疫苗靶向新抗原特征。dMMR频率（腺瘤58%、AA 83.3%）略高于既往报道，提示当前文献可能低估了癌前病变中dMMR的发生率。dMMR与MSI-H在AA中高度一致（100%），但在腺瘤中一致性较低（66%），4个dMMR腺瘤表现为MSI-L，4个为MSS。dMMR/MSI-H更常见于AA和>5 mm腺瘤，这反映了LS相关病变肿瘤形成过程的分子异质性：一种途径是MMR缺陷早发于结肠隐窝，另一种是病变初期为MSS腺瘤，后续获得MMR缺陷。

研究表明，基于晚期结直肠癌表达选择的Nous-209突变实际上在癌变早期（MSI获取时）就已出现。MSI-H癌前病变中位携带31个FSP产生的新抗原，且小型MSI-H腺瘤（≤5 mm）中Nous-209突变数量与更大病变相当，提示突变可能很早发生。这些发现支持阶梯式获取模型，并加强了免疫预防的生物学依据，同时也支持将MSI-H腺瘤减少作为Nous-209疗效的有意义的替代终点。

研究结论：MSI和新抗原积累在LS癌前病变的演变过程中出现。这些发现支持将共享新抗原疫苗Nous-209作为MSI驱动结直肠癌发生免疫预防策略的临床评估，对癌症预防研究具有重要意义。