《Veterinary Research》：Variation of rabbit serum IgA in relation to RHDV vaccination and infection: implications for serological diagnosis and epidemiological investigations
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兔出血症（RHD）是一种由RHD病毒（RHDV）和RHDV 2型（RHDV2）引起的高致病性和传染性疾病，这两种病毒属于杯状病毒科（Caliciviridae）的欧洲兔病毒（Lagovirus europaeus）。血清学调查已广泛且成功地用于野生和养殖兔群。
兔出血症（RHD）是一种由RHD病毒（RHDV）和RHDV 2型（RHDV2）引起的高致病性和传染性疾病，这两种病毒属于杯状病毒科（Caliciviridae）的欧洲兔病毒（Lagovirus europaeus）。血清学调查已广泛且成功地用于野生和养殖兔群。然而，解释血清学数据仍存在不确定性，尤其是对于先前感染或接种疫苗的兔子的IgA结果。本研究第一部分报告了两次独立疫苗接种实验的结果，表明（a）血清IgA仅在约半数接种兔中痕量存在并持续数周，（b）仅当研究人员用口服活RHDV攻毒时，接种兔的血清学特征才发生显著变化，IgA显著且快速上升。第二部分研究在一养殖场进行，持续3个月，期间意外发生了RHDV暴发。研究人员对9只多次接种的母兔进行重复采样，发现其中仅3只（即最年长的个体）具有持续的中高水平IgA，这些兔子一年半前曾经历破坏性的RHDV2疫情。至少有一只母兔在RHDV暴发时转为IgA阳性。对养殖场不同兔舍中61只幼兔的平行调查显示，仅一个兔舍中IgA阳性兔比例较高。总体而言，研究人员的发现明确证明，除既往感染兔外，疫苗接种不会诱导血清IgA，且IgA可作为RHDV再感染的标志物。
**研究背景与问题**
兔出血症（RHD）是由兔出血症病毒（RHDV）及其2型（RHDV2）引起的高致病性、高死亡率传染病，主要影响欧洲兔（Oryctolagus cuniculus）。病毒通过口/鼻途径传播，在肠道黏膜复制后快速到达肝脏，导致致死性肝炎。尽管血清学方法在RHD诊断和流行病学研究中广泛应用，但关于免疫球蛋白A（IgA）在感染或疫苗接种后的动态变化及其作为感染标志物的价值仍不明确。既往研究表明，血清IgG可提供终身保护，而IgA在康复后数月内消失。疫苗接种（多为皮下或肌肉注射）主要诱导IgG，但对黏膜免疫的IgA影响未知。此外，区分疫苗接种兔与自然感染兔是血清学诊断的关键需求。本研究旨在阐明不同免疫刺激（感染或接种）下血清IgA的变异规律，并探索IgA作为RHDV再感染标志物的可行性。该研究发表于《Veterinary Research》。
**主要技术方法**
研究采用了实验性疫苗接种与攻毒试验（澳大利亚野生型实验室兔和意大利新西兰兔）及养殖场长期血清学调查（意大利福贾省ANCI养殖场，含9只多疫苗母兔和61只幼兔）。主要技术包括：竞争ELISA（cELISA）检测总抗体，同型ELISA（IsoELISA）分别检测IgM、IgG和IgA，使用抗RHDV或RHDV2特异性单克隆抗体（MAb）与HRP偶联物。样本队列来源明确：澳大利亚实验兔来自堪培拉和新南威尔士州南部；意大利实验兔为3月龄新西兰兔；养殖场调查对象为9只多次疫苗接种的母兔（含RHDV2自疫苗和RHDV/RHDVa二价疫苗）及不同兔舍的幼兔。
**研究结果**
*实验性疫苗接种与血清学特征*
- *澳大利亚实验*：10只实验室野生兔接种RHDV灭活疫苗后，约半数兔在7-49天出现痕量IgA（滴度≤1/80），其余无IgA。49天后首次攻毒（口服或皮下），口服组IgA显著升高至1/1280-1/5120，皮下组无变化；第二次攻毒结果一致，表明口服途径诱导IgA，皮下途径无效。IgG在口服攻毒后显著升高，皮下组无显著变化。
- *意大利实验*：6只新西兰兔接种RHDV/RHDVa二价疫苗后，仅3只在9天出现可疑IgA（1/80），16天后消失。65天后口服攻毒：活病毒组IgA在2周内升至1/10240，7周后降至痕量；灭活病毒组无IgA反应。活病毒组IgG升高约16倍，灭活组仅2-4倍。
*养殖场血清学调查*
- *多疫苗母兔*：9只母兔中，3只（#1、#2、#3）持续高水平IgA-RHDV2，且这些兔均在1.5年前RHDV2流行期间在场；其余6只IgA阴性。1只（#9）在RHDVa暴发期间转为IgA阳性。IgM均阴性。
- *未接种幼兔*：61只中，兔舍#4的11只新断奶兔（#13-#23）IgA阳性（1/160-1/5120），且RHDV cELISA滴度高于RHDV2，提示近期RHDVa感染；其他兔舍兔IgA阴性或母源抗体衰减。
- *首次接种幼兔*：兔舍#4的72%兔IgA阳性且RHDV抗体占优，证实RHDVa循环；兔舍#5仅1只兔显示疫苗诱导的IgM，另1只兼具疫苗反应和感染特征。
**讨论与结论**
研究证实，疫苗接种（皮下或肌内）仅诱导痕量且短暂的血清IgA，远低于RHD康复兔的高水平IgA。口服活病毒攻毒可有效激发疫苗预存的B细胞产生IgA，而皮下攻毒因疫苗IgG迅速中和病毒而无效。灭活病毒口服不诱导IgA，证明活病毒复制是必要触发因素。养殖场调查显示，多次疫苗接种不能诱导血清IgA，但曾感染RHD的兔（如经历RHDV2流行）在疫苗加强后维持高水平IgA，这与人类脊髓灰质炎病毒和诺如病毒的研究一致——灭活疫苗对既往感染者可激活黏膜归巢IgA记忆B细胞。
IgA作为再感染标志物在流行病学中具重要价值：对野生兔，血清IgA阳性可指示近期感染或再感染；对养殖场，结合动物病史（排除旧感染）可监测病毒循环。本研究结论为：疫苗接种不诱导血清IgA，除非兔曾感染RHD；血清IgA可作为RHDV再感染的特异性标志物，用于血清学诊断和流行病学调查。
