参考基因的矩阵依赖性和分化阶段依赖性变异：重新思考3T3-L1脂肪生成模型中的验证策略

《International Journal of Molecular Sciences》：Matrix- and Differentiation Stage-Dependent Variability of Reference Genes: Rethinking Validation Strategies in 3T3-L1 Adipogenic Models

　　

摘要

本研究评估了3T3-L1细胞在不同细胞外基质上分化为脂肪细胞过程中候选参考基因的稳定性。目的是探讨基质组成和分化阶段对候选管家基因表达的影响，并比较动态体外模型中的验证策略。在分化第7天和第14天，使用RT-qPCR技术分析了11个候选参考基因（18S、Actb、B2m、Gapdh、Hmbs、Hprt、Nono、Ppia、Rplp0、Tbp和Ywhaz）在TC、胶原蛋白、明胶和Matrigel基质上的表达情况。通过geNorm、NormFinder、RefFinder、比较ΔCt、BestKeeper、广义线性模型（GLM）、线性混合模型（LMM）以及与脂肪生成标志物Pparg和Fasn的相关性分析来评估基因稳定性。结果表明，大多数管家基因的表达受到基质组成、分化阶段或其相互作用的影响。18S表现出最强的条件依赖性变异性和显著的基质敏感性。Hprt与Fasn均呈显著相关性，而Fasn相关，这表明这些参考基因可能并非完全独立于脂肪生成状态。B2m和Tbp仍是一个强有力的补充参考基因候选者。