采用Alinity m平台精简移植患者病毒监测的研究

《Journal of Clinical Virology Plus》：Streamlining Viral Surveillance in Transplant Patients with the Alinity m Platform

　　

摘要：巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)和BK病毒(BKV)感染在免疫功能正常个体中常见且血清阳性率高，但在移植受者等免疫功能低下个体中再激活会增加发病率与死亡率。监测这些病毒的病毒载量在移植受者的治疗与管理中发挥重要作用。本研究比较了Alinity m CMV、Alinity m EBV和Alinity m BKV检测试剂与其他广泛使用的移植检测试剂的临床性能。临床血浆标本检测中，Alinity m CMV与cobas CMV和RealTime CMV比较的相关系数(r)分别为0.974和0.991，平均偏差分别为0.16 Log IU/mL和0.14 Log IU/mL。临床血浆标本检测中，Alinity m EBV与cobas EBV和RealTime EBV比较的r分别为0.974和0.956，平均偏差分别为0.09 Log IU/mL和0.47 Log IU/mL。Alinity m BKV对血浆和尿液标本与cobas BKV比较的r分别为0.953和0.932，平均偏差分别为-0.12 Log IU/mL和-0.15 Log IU/mL。这些结果支持这三种Alinity m检测试剂在移植受者管理中的实用性。重要性：CMV、EBV和BKV病毒可导致移植后并发症，作为移植受者管理的一部分需监测这些病毒的病毒载量。本研究提供了Alinity m CMV、EBV和BKV检测试剂与其他广泛使用的移植检测试剂临床性能对比的见解。

研究背景方面，巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)和BK病毒(BKV)在全球广泛流行，在免疫功能正常个体中通常呈终身潜伏感染且不引起显著疾病。但在造血干细胞移植(HSCT)和实体器官移植(SOT)受者中，免疫抑制状态下的病毒再激活可导致发病与死亡的主要病因。CMV病影响高达50%的HSCT患者，未治疗可显著增加死亡率，指南推荐HSCT后至少100天、SOT后12周内每周检测；EBV再激活与移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)强相关，高达100%的HSCT和80%的SOT病例与EBV有关，需在最初四个月频繁监测并持续 surveillance一年；BKV是肾移植受者BKV相关肾病(BKVN)的首要病因，通过定期尿液和血浆病毒载量检测实现早期发现，可抢先调整免疫抑制并预防移植物失功。传统上这些病毒是分别单独监测，增加了实验室负担并延迟干预。在Alinity m自动化分子平台上同时对CMV、EBV、BKV进行定量核酸扩增检测(NAAT)，可精简实验室工作流程，提供综合风险分层与及时治疗，改善移植患者结局。研究人员开展了多中心对比研究，评价Alinity m CMV、Alinity m EBV、Alinity m BKV检测试剂的临床性能，结果与cobas（罗氏）和RealTime（雅培前代）对应检测试剂进行比较，得出Alinity m平台三种检测与原广泛使用的移植病毒检测试剂具有强相关性、低平均偏差、高一致性的结论，支持其在移植受者管理中的实用性。该研究发表于《Journal of Clinical Virology Plus》。

关键技术方法上，研究人员采用对比设计：Alinity m CMV、EBV、BKV分别与cobas CMV、EBV、BKV以及RealTime CMV、EBV进行方法学比对；临床标本来源于SOT、HSCT及其他免疫功能低下患者的血浆（CMV、EBV、BKV）和尿液（BKV），其中Alinity m CMV vs cobas CMV为267例血浆，Alinity m EBV vs cobas EBV为550例血浆，Alinity m BKV vs cobas BKV为579例血浆和380例尿液，Alinity m CMV vs RealTime CMV为125例血浆，Alinity m EBV vs RealTime EBV为146例血浆（含68例加标标本）；统计方法采用Deming回归分析、Bland?Altman分析评估定量关系与平均偏差，整体一致性(OPA)、阳性一致(PPA)、阴性一致(NPA)按病毒载量分级（未检出、低于定量下限<LLOQ、定量）计算，并用极端Student化偏差(ESD)法识别统计离群值，所有分析用PC SAS 9.4完成，研究遵循GCP与赫尔辛基宣言并经IRB批准。

1. 3.
   Results（结果）：3.1 Clinical Performance of Alinity m CMV（Alinity m CMV的临床性能），研究人员通过对267例血浆标本与cobas CMV比对，OPA为98.9%，PPA为100%，NPA为96.1%；177例同处于定量范围内的标本相关系数r=0.974，Deming回归y=0.99x+0.17，平均偏差0.14 Log IU/mL（Alinity m减cobas）；另一队列125例阳性血浆与RealTime CMV比对，124例同定量范围内r=0.991，Deming回归y=0.98x+0.27，平均偏差0.16 Log IU/mL，表明Alinity m CMV与两个对照检测具有强相关和低偏差。3.2 Clinical Performance of Alinity m EBV（Alinity m EBV的临床性能），550例血浆与cobas EBV比对OPA为92.5%，PPA为97.8%，NPA为82.4%；239例同定量范围内（剔除1例ESD离群值）r=0.976，Deming回归y=1.02x+0.04，平均偏差0.09 Log IU/mL；146例血浆与RealTime EBV比对中126例同定量范围内r=0.978（文中讨论部分记为0.958），Deming回归y=0.96x+0.63，平均偏差0.48 Log IU/mL，显示与cobas EBV高度一致，与RealTime EBV相关性高但偏差相对较大。3.3 Clinical Performance of Alinity m BKV（Alinity m BKV的临床性能），579例血浆与cobas BKV比对OPA为96.6%，PPA为95.5%，NPA为97.8%；268例同定量范围内r=0.953，Deming回归y=1.07x?0.37，平均偏差?0.12 Log IU/mL；453例尿液比对OPA为94.9%，PPA为96.1%，NPA为93.4%；168例同定量范围内r=0.932，Deming回归y=1.04x?0.35，平均偏差?0.15 Log IU/mL，证实血浆和尿液中与cobas BKV均强相关且偏差小。

讨论部分总结：研究人员指出Alinity m CMV与cobas CMV（r=0.974，平均偏差0.14 Log IU/mL）及RealTime CMV（r=0.991，平均偏差0.16 Log IU/mL）均强相关，95.0%的定量结果相差≤0.5 Log IU/mL，低偏差可能来自校准策略（Alinity m和RealTime用两点校准曲线，cobas用每个反应内独立校准）、提取效率、靶区域与扩增子大小差异（Alinity m靶向UL34和UL80.5双基因，cobas靶向单一UL54基因），且CMV片段化影响WHO国际标准(WHO IS)定量 harmonization；指南推荐对同一患者固定监测平台，同样适用于EBV、BKV。Alinity m EBV与cobas EBV（r=0.976，平均偏差0.09 Log IU/mL）强相关，96.7%定量结果差≤0.5 Log IU/mL；与RealTime EBV（r=0.978，平均偏差0.48 Log IU/mL）相关性高但偏差较大，原因包括Alinity m靶向EBNA1和GP350双保守区，RealTime仅靶向GP350，以及校准和提取差异。Alinity m BKV与cobas BKV在血浆（r=0.953，平均偏差?0.12 Log IU/mL）和尿液（r=0.932，平均偏差?0.15 Log IU/mL）均强相关，99.6%血浆定量结果差≤1.0 Log IU/mL，93.1%尿液定量结果差≤1.0 Log IU/mL；定量差异可归因于引物探针靶区域不同（WHO IS中存在拷贝数异质性 due to 结构变异），以及尿液稳定液配方差异（两者均需将原尿转入稳定液但缓冲液不同）；同样强调需用单一平台连续监测。研究人员提到所有方法学比对中因剩余标本量不足无法追加检测以解决不一致结果。Alinity m系统为随机存取(random?access)、连续处理，TAT约2.5小时，短于m2000（~7小时）和cobas（~3小时）的批量模式；具备STAT功能可插队紧急标本，且同一标本可同时做多项检测，利于移植患者常见共感染（如CMV+BKV、CMV+EBV）的综合风险管理。结论为：本研究证实了Alinity m平台可从血浆标本同时准确检测并定量BKV、CMV、EBV，精简流程、高性能，适用于移植受者病毒监测。