《Clinical and Translational Discovery》：Clinical significance of urinary SPP1 as a potential new diagnostic marker for oesophageal squamous cell carcinoma
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背景：尿蛋白质可作为检测食管鳞状细胞癌(oesophageal squamous cell carcinoma, ESCC)的非侵入性生物标志物。研究人员评估了ESCC患者尿液中分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1, SPP1)水平
背景：尿蛋白质可作为检测食管鳞状细胞癌(oesophageal squamous cell carcinoma, ESCC)的非侵入性生物标志物。研究人员评估了ESCC患者尿液中分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1, SPP1)水平，评价其作为诊断生物标志物的潜力。方法：采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测29例ESCC患者和30例健康对照者尿液SPP1水平。通过免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)检测患者肿瘤组织及配对癌旁正常组织中SPP1表达。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析评估SPP1对ESCC的诊断效能。结果：ESCC组尿SPP1水平显著高于对照组。该指标对两组具有区分能力，曲线下面积(area under the curve, AUC)为0.7。免疫组织化学分析证实ESCC组织中SPP1表达较配对正常组织明显上调。亚组分析显示尿SPP1也能有效识别Ⅲ期ESCC患者。结论：本研究提示尿SPP1可作为检测ESCC的新型生物标志物。
本文对发表于《Clinical and Translational Discovery》的研究《尿SPP1(分泌磷蛋白1，secreted phosphoprotein 1，又名骨桥蛋白osteopontin，OPN)作为食管鳞状细胞癌(oesophageal squamous cell carcinoma，ESCC)潜在新型诊断标志物的临床意义》进行解读总结。
研究背景与立题依据
食管癌(oesophageal cancer，EC)全球发病率排第11位，死亡率排第7位，其中ESCC约占所有EC病例的90%。ESCC预后极差，5年生存率不足20%，主要归因于确诊时已处晚期及有效治疗手段有限。当前确诊金标准为胃镜下活检及病理检查，但存在侵入性强、费用高的问题，难以大规模推广筛查。液体活检(liquid biopsy)虽可无创检测血液、尿液等体液中的肿瘤标志物，但传统血清标志物如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)、糖类抗原72-4(carbohydrate antigen 72-4，CA72-4)对ESCC诊断敏感性与特异性均不足。尿液因采集无创、成本低，是大规模筛查的理想标本。前期基于液相色谱-串联质谱(liquid chromatography?tandem mass spectrometry，LC?MS/MS)的尿蛋白质组学研究发现ESCC患者尿中多种蛋白异常表达，其中包括SPP1。因此，研究人员开展此项研究，旨在评估尿SPP1作为ESCC新型无创诊断生物标志物的临床应用价值。
主要研究方法概述
研究纳入2023年1月至6月山东第二医科大学第一附属医院胸外科及体检中心受试者，最终分析ESCC患者29例（经内镜活检病理确诊、未接受过治疗，按第8版AJCC TNM分期分型）与健康对照(healthy controls，CTLs)30例。收集受试者晨尿，离心取上清，采用人SPP1 ELISA试剂盒定量尿SPP1浓度；收集ESCC患者癌及配对癌旁正常组织，采用抗SPP1多克隆抗体行免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)染色并按强度与阳性细胞百分比评分（0–9分）。统计学分析采用Mann?Whitney U检验比较组间尿SPP1水平，独立t检验比较IHC评分，χ2检验分析SPP1表达与临床病理特征关联，受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线计算曲线下面积(area under the curve，AUC)及95%置信区间(confidence interval，CI)，Kaplan?Meier法绘制生存曲线，以p < 0.05为差异有统计学意义。
研究结果
3.1 Characteristics of study participants（研究对象特征）
通过基线资料分析确认ESCC组与CTL组在年龄、性别、吸烟饮酒史、体质指数(body mass index，BMI)、糖尿病、高血压等方面无显著差异(p > 0.05)，两组具备可比性。
3.2 ESCC patients have higher urinary SPP1 levels than CTLs（ESCC患者尿SPP1水平高于健康对照）
ELISA检测显示ESCC组尿SPP1中位数水平显著高于CTL组(p < 0.001)。ROC曲线分析显示尿SPP1区分ESCC与CTL的AUC为0.756（95% CI：0.635?0.878），灵敏度100%，特异度43.3%，诊断效能优于传统血清肿瘤标志物CA72-4(AUC=0.639)、CA19-9(AUC=0.690)及CEA(AUC=0.717)。
3.3 Correlation between urinary SPP1 levels and pathological features in ESCC（尿SPP1水平与ESCC病理特征的相关性）
尿SPP1水平在低分化ESCC患者中显著升高；且与更晚临床分期（Ⅲ期）、更高T分期（肿瘤浸润深度）及更多淋巴结转移呈正相关。按中位数分组后，尿SPP1阳性率在不同年龄、吸烟饮酒状态、BMI、高血压、糖尿病、肿瘤部位及PD-L1表达(<1% vs ≥1%)亚组间均无统计学显著差异(p均 > 0.05)。
3.4 Urinary SPP1 effectively identifies stage III ESCC（尿SPP1可有效识别Ⅲ期ESCC）
针对Ⅲ期ESCC vs 早Ⅰ–Ⅱ期的ROC分析显示，尿SPP1的AUC达0.892（95% CI：0.75?1），灵敏度82.4%，特异度91.7%；传统标志物CA72-4(AUC=0.525)、CA19-9(AUC=0.748)、CEA(AUC=0.480)均不及尿SPP1。
3.5 Reduced survival in ESCC patients with high urinary SPP1 expression（高尿SPP1表达ESCC患者生存缩短）
Kaplan?Meier生存分析显示，以中位ELISA值为界分为高、低尿SPP1表达组，高表达组18个月生存率显著低于低表达组(log-rank检验p < 0.05)，高表达组中位生存时间13.005个月，低表达组为17.063个月。
3.6 High expression of SPP1 in ESCC tissues（ESCC组织中SPP1高表达）
IHC结果显示ESCC组织SPP1染色强度及IHC评分均显著高于配对癌旁正常组织(p < 0.001)；且肿瘤组织中SPP1表达与晚期肿瘤分期呈显著正相关(p < 0.05)。
讨论与结论总结
讨论部分指出，本研究证实ESCC患者尿SPP1水平显著高于健康人，且随疾病进展（更晚分期、更深浸润、更多淋巴结转移）升高；尿SPP1对Ⅲ期ESCC识别效能良好，且高尿SPP1提示较差预后；IHC验证癌组织SPP1高于癌旁正常组织并与分期正相关，支持肿瘤源SPP1经循环滤过至尿液的可能机制。与传统血清标志物比，尿SPP1诊断效能更优；与质谱等技术比，ELISA检测尿SPP1简便、稳定、价廉，适合大规模初筛。局限性包括样本量较小且未能有效区分早期ESCC与对照、未完全控制饮食及摄水量等混杂因素、SPP1促瘤分子机制未阐明，需扩大样本进一步验证。
结论(Conclusion)：本研究表明，尿SPP1是ESCC潜在的尿生物标志物。结果发现ESCC患者尿SPP1显著升高，且可识别Ⅲ期ESCC。这些发现提示尿SPP1有望成为ESCC检测和辅助诊断的新型标志物，为这一侵袭性肿瘤的大规模筛查工具开发提供潜在基础。
