西班牙β-地中海贫血（β-thalassemia）：来自国家地中海贫血登记库（National Thalassemia Registry）的结果及输血依赖型地中海贫血（TDT）患者的分子分析

《JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY ANALYSIS》：Beta-Thalassemia in Spain: Results From the National Thalassemia Registry and Molecular Analysis of Patients With Transfusion-Dependent Thalassemia

　　

背景：β-地中海贫血是一种具有显著临床异质性的遗传性血红蛋白病（hemoglobinopathy）。在西班牙，关于输血依赖型β-地中海贫血（TDT）的全面全国性数据仍然有限，尤其是分子表征方面。方法：本观察性研究分析了西班牙血液学与血液治疗学会（SEHH）国家地中海贫血登记库的数据。2022年11月至2025年2月期间，共登记了来自42家医院的147例β-地中海贫血患者；本报告聚焦于78例TDT患者。研究人员收集了临床、输血和生化数据，并采用Sanger测序、下一代测序（NGS）及互补技术对HBB和HBA基因进行分子分析。基因型根据β-珠蛋白合成降低程度进行分类。结果：TDT患者平均年龄为34.3岁，73.1%为西班牙裔。患者平均每年接受31.4单位浓缩红细胞（packed red blood cell）。35.9%的病例曾行脾切除术（splenectomy）。大多数患者铁过载控制良好，血清铁蛋白（serum ferritin）中位数低于1000 ng/mL。共鉴定出24种不同的HBB突变；最常见的为CD39（C＞T）、IVS-1-nt1（G＞A）、IVS-1-nt110（G＞A）、IVS-1-nt6（T＞C）和IVS-1-nt1（G＞T），占等位基因的75%。基因型分布为55.2% β0/β0、30.3% β0/β+、14.4% β+/β+。β+/β+基因型患者的铁蛋白水平显著更低。结论：该全国登记研究突出了西班牙TDT的遗传和临床异质性，并强调了分子表征对患者管理、遗传咨询和未来治疗策略的价值。

该研究发表于《JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY ANALYSIS》。研究背景方面，地中海贫血（thalassemia，一类遗传性血红蛋白病（hemoglobinopathy））是全球常见的单基因疾病，β-地中海贫血（β-thalassemia，由HBB基因变异导致β珠蛋白链合成部分受抑（β⁺）或完全抑制（β⁰）引起）在临床与遗传上具有高度异质性，传统分为重型（thalassemia major，需规律输血）、中间型（intermedia，偶有输血需求）、轻型（trait，无症状携带者）和静止型（silent）。在西班牙，既往缺乏全面的全国层面输血依赖型β-地中海贫血（TDT，transfusion-dependent thalassemia，指需定期输血维持生命的β-地中海贫血）数据，尤其分子表征不完整，而人口迁移又带来了新的遗传多样性，因此研究人员依托西班牙血液学与血液治疗学会（SEHH，Sociedad Espa?ola de Hematología y Hemoterapia）国家地中海贫血登记库开展此项观察性研究，旨在系统分析TDT患者的临床、输血、生化及HBB/HBA分子特征，为管理、遗传咨询和新疗法提供依据。

为开展研究，研究人员主要采用以下关键方法：样本队列来源于2022年11月至2025年2月SEHH国家地中海贫血登记库中全西班牙42家医院登记的147例β-地中海贫血患者，其中78例符合TDT（≤2岁发病、需规律输血维持血红蛋白）标准并被纳入分析；排除合并结构性血红蛋白病（如HbS、HbC、HbD）及β地贫复合结构性变异者；所有患者提供知情同意并通过伦理审批；血液学分析采用高效液相色谱（HPLC）与毛细管电泳（CE）鉴定并定量血红蛋白变异体；分子分析对HBB基因采用Sanger测序（全覆盖外显子及启动子区），后期33例加用下一代测序（NGS，Devyser Thalassemia kit on Illumina MiSeq）检测HBA1、HBA2、HBB的单核苷酸变异、插入缺失及拷贝数变异，对HBA基因先采用α-Globin StripAssay筛查常见缺失和点突变，必要时用多重连接依赖探针扩增（MLPA，multiplex ligation-dependent probe amplification）进一步表征；统计学用IBM SPSS 27.0，定量变量按正态性以均值±标准差或中位数（IQR）表示，组间比较用t检验、Mann–Whitney U、ANOVA、χ²或Fisher确切检验，相关性用Pearson/Spearman，p＜0.05为显著。

结果部分如下。3.1 队列特征（Cohort Characteristics）：通过对78例TDT分析，平均年龄34.29±16.85岁，46.2%女性、53.8%男性；73.1%为西班牙裔，26.9%为外国出生或父母为外籍（以印度裔10.25%、北非裔8.97%为主）；仅3家医院贡献≥5例，多数为1～2例/中心；无研究期内死亡；5例经新生儿筛查诊断，其中仅2例父母为西班牙人且无前期遗传咨询，反映移民群体预防不足。3.2 输血负担与临床管理（Transfusion Burden and Clinical Management）：年均输注浓缩红细胞31.43±12.20单位（范围10～54）；35.9%曾行脾切除术，平均脾切除年龄11.65±4.12岁；平均血清铁蛋白992.42±1573.89 ng/mL，中位数487 ng/mL，78%患者＜1000 ng/mL，提示铁过载总体可控；性别间年龄、输血量、脾切除年龄、铁蛋白无显著差异（铁蛋白男低女高但未达显著）；脾切除患者显著更年长（43.78±9.23 vs 28.87±17.86岁，p＜0.001），铁蛋白虽较低（653.81 vs 1191.17 ng/mL）但未达显著，输血量也无显著组间差异；患者年龄与输血量呈正相关（r=0.29，p=0.019），铁蛋白与输血量呈正相关（r=0.34，p=0.023），年龄与铁蛋白无相关。3.3 铁螯合治疗与附加治疗（Iron Chelation Therapy and Additional Treatments）：61例用地拉罗司（deferasirox，DFX）单药，3例地拉硫酮（deferiprone，DFP）单药，4例去铁胺（deferoxamine，DFO）单药，4例DFP+DFX联合，1例DFP+DFO联合，6例＜2岁未治疗，4例数据缺；不同螯合方案间铁蛋白差异极显著（p＜0.001），联合治疗者铁蛋白最高（均值4978.4 ng/mL），DFX单药较低（798.61 ng/mL），年龄、输血量、脾切除年龄无显著组间差异；15例用罗特西普（luspatercept，最大1.5 mg/kg每21天），33.3%（5例）达临床应答（Hb升高≥1.5 g/dL），1例实现脱离输血；3例刚开始无法评估；4例行同胞HLA相合异基因造血干细胞移植（allogeneic HSCT），均获稳定植入及完全嵌合与良好免疫耐受。3.4 分子表征（Molecular Characterization）：共发现24种HBB突变，前五位为CD39（C＞T，HBB:c.118C＞T，β⁰，等位频率26.6%）、IVS-1-nt1（G＞A，HBB:c.92+1G＞A，β⁺，17.5%）、IVS-1-nt6（T＞C，HBB:c.92+6T＞C，β⁺，13%）、IVS-1-nt110（G＞A，HBB:c.93-21G＞A，β⁰，10.4%）、IVS-1-nt1（G＞T，HBB:c.92+1G＞T，β⁺，8.4%），合计占75%；其余19种低频突变（如Codons 41/42（-TTCT）、Spanish (δβ)⁰-Thal、Poly A等）多为复合杂合状态；完整基因型最常见为CD39/CD39（15.4%）、IVS-1-nt1/IVS-1-nt1（10.3%），其余为多种复合杂合（44.9%归为其他）；按β珠蛋白合成严重程度分，β⁰/β⁰占55.2%（42例），β⁰/β⁺占30.3%（23例），β⁺/β⁺占14.4%（11例），2例因α珠蛋白三倍重复（ααα/ααα）未纳入此分类；HBA异常包括2例ααα/ααα（anti3.7同源）、3例-α^3.7/αα（α缺失）、3例δβ⁰地贫。3.5 基因型分布与表型关联（Genotype Distribution and Phenotype Correlation）：基因型分组间铁蛋白差异显著（p=0.004），β⁺/β⁺者铁蛋白明显更低（315.73±176.90 ng/mL vs β⁰/β⁰1004.95、β⁰/β⁺1322.43），年龄、输血量、脾切除率、性别、籍贯无显著组间差异；β⁺/β⁺中5例为IVS-1-nt6/IVS-1-nt6（通常可变表型，有的呈NTDT），但在本队列均需规律输血（曾尝试停输后Hb骤降而复输），证实可为TDT表型；2例ααα/ααα合并β⁰杂合（CD39及CD82/83（-G））均呈TDT，提示α珠蛋白合成程度等二级修饰因子可影响α/β失衡与表型严重度。

讨论部分总结：地中海贫血全球年新增重症约4～5万TDT，西班牙历史上发病率低于希腊意大利，轻型携带率0.1%～2%；通过SEHH红细胞病理小组婚检产前项目，西班牙本土家庭新发TDT极少，本研究≤20岁TDT仅3例父母均为西班牙裔，其余多为移民背景，强调需加强文化适配的筛查预防与移民健康融入；估计西班牙全国TDT约100例，本研究78例覆盖大部分；队列平均34岁，47.5%＞40岁，无研究期死亡，反映铁螯合、输血改善生存；年均输血31.4单位，年龄与输血量正相关（含儿科），铁蛋白与输血量正相关；口服地拉罗司为一线螯合，DFP多用于应答好或特定情况，联合治疗者铁蛋白高反映适应症偏重；脾切除现更限制（并发症如血栓、肺高压），本队列脾切除者显著年长（平均切除年龄11岁），虽输血量无显著减少，但铁蛋白偏低可能源于输血略少及髓外造血减少等；75%患者铁蛋白＜1000 ng/mL，提示总体铁控制尚可（用血清铁蛋白代理MRI受限）；分子谱前五位突变同其他地中海国家，但移民引入南亚、北非、东欧突变增加多样性；基因型上β⁺/β⁺铁蛋白更低、年龄偏大，或与较轻表型有关；IVS-1-nt6纯合可为TDT（非必然NTDT）；α三倍重复等二次修饰可加重表型；未纳入内分泌、骨病、心肺并发症等将在后续更新；局限为多中心无完全统一随访协议及可能的未登记偏倚，但建立了可用注册平台供未来试验；结论为：本研究更新西班牙TDT临床与分子特征，突出遗传异质性与人口迁移影响，分子表征对管理、遗传咨询及基因治疗等新策略至关重要。

结论部分翻译：本研究的结论为，此项研究提供了西班牙国家地中海贫血登记库中输血依赖型β-地中海贫血患者临床与分子特征的更新概览。数据突出了疾病的遗传异质性，并反映了影响西班牙β-地中海贫血流行病学的最新人口学变化。对这些患者进行分子表征，对于推动适宜的遗传咨询、识别新兴治疗策略（如基因治疗及其他创新疗法）的候选者至关重要。